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摘要：目的：观察并分析免疫组织化学方法在肺癌病理诊断中的具体应用及其效果。方法：选取我院收治的30例肺癌患者为研究对象，采用免疫组织化学方法，对其细支气管肺泡癌、肺大细胞癌以及肺乳头状腺癌组织中，低分子细胞角蛋白（CK-LMW）、嗜铬粒蛋白（CgA）、突触泡蛋白（Syn）等的表达进行统计与分析。结果：三种类型的肺癌均存在不同程度的神经内分泌分化的情况，其中，细支气管肺泡癌与肺乳头状腺癌两种癌症存在多种细胞的分化成分，与干细胞为肺癌细胞的共同来源这一假说相符合。结论：在对肺癌进行病理诊断时，通过应用免疫组织化学方法，不但可将人们对肺癌病理的本质认识充分反映出来，而且极大程度上提高了诊断的正确率，值得临床推广应用。
关键词：肺癌；免疫组织化学方法；诊断
Abstract：Objective： To observe and analyze the practical application of immunohistochemical method in the pathologic diagnosis of lung cancer and its effect. Methods： 30 patients with lung cancer in our hospital were selected as the objects. The expressions of low molecular weight cytokeratin （CK-LMW）， chromogranin （CgA）， synaptobrevin （Syn）， etc. in tissues of the patients’ bronchioloalveolar carcinoma， pulmonary large cell carcinoma and papillary adenocarcinoma were recorded and analyzed using immunohistochemical method. Results： Different degrees of neuroendocrine differentiation appeared in the three types of lung cancer. Differentiation of different cells was observed in both bronchioloalveolar carcinoma and papillary adenocarcinoma， which corresponded to the hypothesis that stem cells were the common sources of lung cancer cells. Conclusion： Performing pathological diagnosis on lung cancer by immunohistochemical method can not only reflect people’s essential recognition of the pathology of lung cancer but also substantially increase the diagnostic accuracy， which is worth widespread application in clinic.
Keywords： lung cancer， immunohistochemical method， diagnosis
作为肺癌病理学重要的分型及诊断基础，组织的发生、免疫学表型以及癌细胞的分化程度为肺癌临床防治的关键性依据[1]。近些年来，随着社会的进步及医疗水平的提高，免疫组织化学在临床的病理诊断中得到了非常广泛的应用。大量试验研究资料提示支气管粘膜上皮的多能干细胞可能为各种类型肺癌组织发生的共同起源，由于癌细胞的分化存在多形性，因而导致了不同细胞表型的出现，进而逐步成为肺癌病理形态学的分型基础[2-3]。通过利用光镜展开观察与探究，我们发现α1-抗胰蛋白酶（也即α1-AT）为肺乳头状腺癌的柱状癌细胞表达，并且细支气管肺泡癌可分化为大细胞癌，而现阶段针对这些现象与肺癌细胞的表型、分化及诊治等方面之间存在何种关系的研究报道比较少[4]。基于此，本文以我院收治的30例肺癌患者为研究对象，就免疫组织化学方法在肺癌病理诊断中的具体应用及效果展开深入探讨。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取我院2012年2月至2014年12月收治的30例肺癌患者为研究对象，所有病例均符合肺肿瘤国家组织学制定的分类标准。其中，男18例，女12例；年龄分布：26-68岁，平均年龄50.9岁；肺癌类型：13例为细支气管肺泡癌（BAC）、12例为肺大细胞癌（PLCC）、5例为肺乳头状腺癌（PPA）。在所有肺癌患者中，肿块的最大直径均值为6.5cm，共有16例出现局部淋巴结转移。从每例患者身上选取7至8张连续切片及1至2块癌组织蜡块，用来进行免疫组织化学法的染色操作。
1.2免疫组织化学染色方法
显示神经内分泌的标记物抗体有突触泡蛋白（Syn）、嗜铬粒蛋白（CgA）、神经烯醇化酶（NSE）；显示腺性分化的则对相应抗体低分子细胞角蛋白（CK-LMW）进行标志；对于α1-抗胰蛋白酶（α1-AT），则采用S-P法进行染色操作，每次染色时，都应当设置相应的阳性对照组。
1.3染色结果的判定标准
利用双盲半定量展开计算，并以阳性细胞占据的面积为依据，将其分为以下四个等级[5]：
“-”表示不存在明显的阳性反应细胞；
“+”表示阳性反应细胞的面积在25%以内；
“++”表示阳性反应细胞的面积处于25%至50%的范围； “+++”表示发生明显阳性反应细胞的面积超过50%。
2.结果
经染色操作后，本组30例患者的Syn、CgA、NSE等肺癌神经内分泌标记物以及CK-LMW、α1-AT的免疫组织化学阳性反应情况具体如表1所示。
表1 肺癌患者免疫组织化学阳性反应情况
2.1肺癌患者神经内分泌标记物的表达情况
分析表1各项数据可知，肺大细胞癌、细支气管肺泡癌、肺乳头状腺癌细胞胞浆内的NES均存在不同程度的阳性反应，其中，细支气管肺泡癌的阳性率最大，为53.8%（7/13）；其次是肺大细胞癌50.0%（6/12），肺乳头状腺癌的阳性率最低，为40.0%（2/5）。此外，Syn在肺大细胞癌、细支气管肺泡癌、肺乳头状腺癌中均存在阳性表达，阳性率分别为33.3%（4/12）、46.2%（6/13），以及40.0%（2/5）；对于CgA这一神经内分泌标记物，其仅仅在肺大细胞癌中具有25.0%（3/12）的阳性率，在细支气管肺泡癌以及肺乳头状腺癌中，均呈现出阴性反应。
2.2肺癌患者CK-LMW及α1-AT的表达情况
CK-LMW在肺大细胞癌中呈现为阴性反应，在细支气管肺泡癌及肺乳头状腺癌中的阳性率分别为38.5%（5/13）与80.0%（4/5），可以看出CK-LMW在肺乳头状腺癌中具备最高的阳性率。对于α1-AT而言，其在肺大细胞癌中完全呈现阴性反应，而在细支气管肺泡癌及肺乳头状腺癌中发生一定的阳性反应，且在细支气管肺泡癌中的阳性率最高，为61.5%（8/13），肺乳头状腺癌的阳性率则为40.0%（2/5）。在细支气管肺泡癌细胞中，α1-AT的阳性反应主要表现为棕褐色的颗粒在呈现出腺泡状或腺管状的立方形、柱形或多角形癌细胞胞浆内进行分布，与此同时，正常的肺泡上皮及细支气管呈现出阴性反应，仅仅在少数个别柱形的上皮细胞中呈现出浅棕色的反应。
3.结论
随着自然环境的恶化及人们生活、工作方式的改变，肺肿瘤的发病几率呈现出不断上升的趋势，给人们身心健康带来严重危害的同时，也给患者家庭造成了不小的经济及精神负担。因此，对肺癌的病理学展开准确诊断，并采用一定的治疗措施，对缓解患者的身心痛苦有着非常重要的现实意义[6]。
近些年来，临床对肺癌的病例诊断展开不断的探索与尝试，其中，肺癌组织的发生、免疫细胞学的表型，以及癌细胞的分化程度等依旧为医学专家探究的重要基础。在很长一段时间，大多数研究将透射电镜作为主要的研究手段，来探讨各种类型的肺癌多能分化现象。经过深入的探究与尝试，在肺癌的异质性，特别是非小细胞肺癌合并神经内分泌分化这一方面，取得了较为显著的成效[7]。然而，由于利用电镜展开观察时，其首要条件便是提取新鲜的组织，因而给大多数基层单位的协同研究，以及众多试验资料的回顾性研究带来一定的局限性，而在肺癌的病例诊断分类中，这些研究工作起着不可或缺的作用。与电镜观察方法不同的是，免疫组织化学方法主要利用常规的石蜡切片开展研究工作，因而在对原材料的利用方面，具有电镜观察无可比拟的操作优势。除此之外，本实验结果表明，在30例非小细胞癌中，检测出有神经内分泌分化现象的例数就有14例，与电镜研究结果相比较，其阳性率与之基本相符，因此，我们可以确定，免疫组织化学方法具有良好的检测效果。
本实验以我院收治的30例肺癌患者展开研究，经免疫组织化学的检测可知，细支气管肺泡癌与肺乳头状腺癌这两种肺癌分型均存在多种细胞的分化成分，而对于肺大细胞癌而言，其主要显示的是神经内分泌分化成分。除了说明肺癌存在异质性这一点以外，这些结果还存在更深层次意义：其一，表示肺癌的分化可能受到了微环境的动态影响，在与光镜观察相结合的条件下，发现大细胞癌与细支气管肺泡癌通常是混合存在着，这一现象说明细支气管肺泡癌存在分化为大细胞癌的可能；其二，α1-抗胰蛋白酶为肺乳头状腺癌与细支气管肺泡癌的表达，但尚未明确其具体的表达意义，而这一表达则可能提示在癌细胞的分化过程中，细胞的胚胎分化及发育可能起到了一定的影响作用。许多的医学专家及学者认为肺癌的来源为共同干细胞，正是由于干细胞存在的多能分化潜能，才使得肺癌细胞存在异质性。以此，将这一观点作为探究的起点，对观察到的现象展开深入分析与探讨，就具有非常重要的意义[8]。
分析本实验结果，其表明神经烯醇化酶（NSE）可与文中提到的三种肺癌分型发生阳性反应，而对于同一分型肺癌的癌组织，其针对不同种类的神经内分泌表达同样存在一定的差异性，其中，细支气管肺泡癌与大细胞癌均具备较大的NES阳性率，CgA的阳性率则比较低。针对这一现象，我们可将NES作为肺神经内分泌癌的一项重要诊断标准及依据，在对各种类型肺癌的神经内分泌表达进行观察时，为促进诊断精确率的提高，就需要将其他神经内分泌肿瘤的组织学改变及其标记情况进行结合考虑。另外本研究中，未在肺大细胞癌中发现CK-LMW的表达，导致这一结果的原因可能为实验选取的例数偏少。
综上所述，在对肺癌进行病理诊断时，通过应用免疫组织化学方法，不但可将人们对肺癌病理的本质认识充分反映出来，而且极大程度上提高了诊断的正确率。此外，这种诊断方法对操作条件及环境的要求不高，可常规大量开展。由此可以预见，免疫组织化学方法的广泛应用势必会给肺癌的临床研究做出重要的贡献。
参考文献：
[1]熊敏.非小细胞肺癌伴神经内分泌分化的研究[J].临床与实验病理学杂志，2012，13（03）：95.
[2]文道源.免疫组织化学方法在眼眶肿瘤病理诊断中的应用及其前景[J].赣南医学院学报，2013，22（02）：154-156.
[3]郑明军.免疫组织化学技术在病理诊断中的应用和要求[J].实用医技杂志，2014，21（04）：396-397.
[4]刘复生，刘骅，吕福东.免疫组织化学技术在肿瘤病理诊断中的应用及其存在的问题[J].癌症进展杂志，2013，5（04）：355-356.
[5]姚宏. 免疫组织化学染色在病理诊断中的应用[J].陕西医药杂志，2013，30（01）：3-5.
[6]饶秋，周晓军.免疫组织化学在肾脏肿瘤病理诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2013，35（04）：244-246.
[7]戴林，吕晓红，李志红，等.特殊染色和免疫组织化学染色在肾上皮性肿瘤诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2014，33（09）：140-142.
[8]郝春荣，吴翠环.免疫组织化学方法在肺癌病理诊断中的应用[J].同济医科大学学报，2013，29（01）：46-48.
关键词：肺癌；免疫组织化学方法；诊断
Abstract：Objective： To observe and analyze the practical application of immunohistochemical method in the pathologic diagnosis of lung cancer and its effect. Methods： 30 patients with lung cancer in our hospital were selected as the objects. The expressions of low molecular weight cytokeratin （CK-LMW）， chromogranin （CgA）， synaptobrevin （Syn）， etc. in tissues of the patients’ bronchioloalveolar carcinoma， pulmonary large cell carcinoma and papillary adenocarcinoma were recorded and analyzed using immunohistochemical method. Results： Different degrees of neuroendocrine differentiation appeared in the three types of lung cancer. Differentiation of different cells was observed in both bronchioloalveolar carcinoma and papillary adenocarcinoma， which corresponded to the hypothesis that stem cells were the common sources of lung cancer cells. Conclusion： Performing pathological diagnosis on lung cancer by immunohistochemical method can not only reflect people’s essential recognition of the pathology of lung cancer but also substantially increase the diagnostic accuracy， which is worth widespread application in clinic.
Keywords： lung cancer， immunohistochemical method， diagnosis
作为肺癌病理学重要的分型及诊断基础，组织的发生、免疫学表型以及癌细胞的分化程度为肺癌临床防治的关键性依据[1]。近些年来，随着社会的进步及医疗水平的提高，免疫组织化学在临床的病理诊断中得到了非常广泛的应用。大量试验研究资料提示支气管粘膜上皮的多能干细胞可能为各种类型肺癌组织发生的共同起源，由于癌细胞的分化存在多形性，因而导致了不同细胞表型的出现，进而逐步成为肺癌病理形态学的分型基础[2-3]。通过利用光镜展开观察与探究，我们发现α1-抗胰蛋白酶（也即α1-AT）为肺乳头状腺癌的柱状癌细胞表达，并且细支气管肺泡癌可分化为大细胞癌，而现阶段针对这些现象与肺癌细胞的表型、分化及诊治等方面之间存在何种关系的研究报道比较少[4]。基于此，本文以我院收治的30例肺癌患者为研究对象，就免疫组织化学方法在肺癌病理诊断中的具体应用及效果展开深入探讨。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取我院2012年2月至2014年12月收治的30例肺癌患者为研究对象，所有病例均符合肺肿瘤国家组织学制定的分类标准。其中，男18例，女12例；年龄分布：26-68岁，平均年龄50.9岁；肺癌类型：13例为细支气管肺泡癌（BAC）、12例为肺大细胞癌（PLCC）、5例为肺乳头状腺癌（PPA）。在所有肺癌患者中，肿块的最大直径均值为6.5cm，共有16例出现局部淋巴结转移。从每例患者身上选取7至8张连续切片及1至2块癌组织蜡块，用来进行免疫组织化学法的染色操作。
1.2免疫组织化学染色方法
显示神经内分泌的标记物抗体有突触泡蛋白（Syn）、嗜铬粒蛋白（CgA）、神经烯醇化酶（NSE）；显示腺性分化的则对相应抗体低分子细胞角蛋白（CK-LMW）进行标志；对于α1-抗胰蛋白酶（α1-AT），则采用S-P法进行染色操作，每次染色时，都应当设置相应的阳性对照组。
1.3染色结果的判定标准
利用双盲半定量展开计算，并以阳性细胞占据的面积为依据，将其分为以下四个等级[5]：
“-”表示不存在明显的阳性反应细胞；
“+”表示阳性反应细胞的面积在25%以内；
“++”表示阳性反应细胞的面积处于25%至50%的范围； “+++”表示发生明显阳性反应细胞的面积超过50%。
2.结果
经染色操作后，本组30例患者的Syn、CgA、NSE等肺癌神经内分泌标记物以及CK-LMW、α1-AT的免疫组织化学阳性反应情况具体如表1所示。
表1 肺癌患者免疫组织化学阳性反应情况
2.1肺癌患者神经内分泌标记物的表达情况
分析表1各项数据可知，肺大细胞癌、细支气管肺泡癌、肺乳头状腺癌细胞胞浆内的NES均存在不同程度的阳性反应，其中，细支气管肺泡癌的阳性率最大，为53.8%（7/13）；其次是肺大细胞癌50.0%（6/12），肺乳头状腺癌的阳性率最低，为40.0%（2/5）。此外，Syn在肺大细胞癌、细支气管肺泡癌、肺乳头状腺癌中均存在阳性表达，阳性率分别为33.3%（4/12）、46.2%（6/13），以及40.0%（2/5）；对于CgA这一神经内分泌标记物，其仅仅在肺大细胞癌中具有25.0%（3/12）的阳性率，在细支气管肺泡癌以及肺乳头状腺癌中，均呈现出阴性反应。
2.2肺癌患者CK-LMW及α1-AT的表达情况
CK-LMW在肺大细胞癌中呈现为阴性反应，在细支气管肺泡癌及肺乳头状腺癌中的阳性率分别为38.5%（5/13）与80.0%（4/5），可以看出CK-LMW在肺乳头状腺癌中具备最高的阳性率。对于α1-AT而言，其在肺大细胞癌中完全呈现阴性反应，而在细支气管肺泡癌及肺乳头状腺癌中发生一定的阳性反应，且在细支气管肺泡癌中的阳性率最高，为61.5%（8/13），肺乳头状腺癌的阳性率则为40.0%（2/5）。在细支气管肺泡癌细胞中，α1-AT的阳性反应主要表现为棕褐色的颗粒在呈现出腺泡状或腺管状的立方形、柱形或多角形癌细胞胞浆内进行分布，与此同时，正常的肺泡上皮及细支气管呈现出阴性反应，仅仅在少数个别柱形的上皮细胞中呈现出浅棕色的反应。
3.结论
随着自然环境的恶化及人们生活、工作方式的改变，肺肿瘤的发病几率呈现出不断上升的趋势，给人们身心健康带来严重危害的同时，也给患者家庭造成了不小的经济及精神负担。因此，对肺癌的病理学展开准确诊断，并采用一定的治疗措施，对缓解患者的身心痛苦有着非常重要的现实意义[6]。
近些年来，临床对肺癌的病例诊断展开不断的探索与尝试，其中，肺癌组织的发生、免疫细胞学的表型，以及癌细胞的分化程度等依旧为医学专家探究的重要基础。在很长一段时间，大多数研究将透射电镜作为主要的研究手段，来探讨各种类型的肺癌多能分化现象。经过深入的探究与尝试，在肺癌的异质性，特别是非小细胞肺癌合并神经内分泌分化这一方面，取得了较为显著的成效[7]。然而，由于利用电镜展开观察时，其首要条件便是提取新鲜的组织，因而给大多数基层单位的协同研究，以及众多试验资料的回顾性研究带来一定的局限性，而在肺癌的病例诊断分类中，这些研究工作起着不可或缺的作用。与电镜观察方法不同的是，免疫组织化学方法主要利用常规的石蜡切片开展研究工作，因而在对原材料的利用方面，具有电镜观察无可比拟的操作优势。除此之外，本实验结果表明，在30例非小细胞癌中，检测出有神经内分泌分化现象的例数就有14例，与电镜研究结果相比较，其阳性率与之基本相符，因此，我们可以确定，免疫组织化学方法具有良好的检测效果。
本实验以我院收治的30例肺癌患者展开研究，经免疫组织化学的检测可知，细支气管肺泡癌与肺乳头状腺癌这两种肺癌分型均存在多种细胞的分化成分，而对于肺大细胞癌而言，其主要显示的是神经内分泌分化成分。除了说明肺癌存在异质性这一点以外，这些结果还存在更深层次意义：其一，表示肺癌的分化可能受到了微环境的动态影响，在与光镜观察相结合的条件下，发现大细胞癌与细支气管肺泡癌通常是混合存在着，这一现象说明细支气管肺泡癌存在分化为大细胞癌的可能；其二，α1-抗胰蛋白酶为肺乳头状腺癌与细支气管肺泡癌的表达，但尚未明确其具体的表达意义，而这一表达则可能提示在癌细胞的分化过程中，细胞的胚胎分化及发育可能起到了一定的影响作用。许多的医学专家及学者认为肺癌的来源为共同干细胞，正是由于干细胞存在的多能分化潜能，才使得肺癌细胞存在异质性。以此，将这一观点作为探究的起点，对观察到的现象展开深入分析与探讨，就具有非常重要的意义[8]。
分析本实验结果，其表明神经烯醇化酶（NSE）可与文中提到的三种肺癌分型发生阳性反应，而对于同一分型肺癌的癌组织，其针对不同种类的神经内分泌表达同样存在一定的差异性，其中，细支气管肺泡癌与大细胞癌均具备较大的NES阳性率，CgA的阳性率则比较低。针对这一现象，我们可将NES作为肺神经内分泌癌的一项重要诊断标准及依据，在对各种类型肺癌的神经内分泌表达进行观察时，为促进诊断精确率的提高，就需要将其他神经内分泌肿瘤的组织学改变及其标记情况进行结合考虑。另外本研究中，未在肺大细胞癌中发现CK-LMW的表达，导致这一结果的原因可能为实验选取的例数偏少。
综上所述，在对肺癌进行病理诊断时，通过应用免疫组织化学方法，不但可将人们对肺癌病理的本质认识充分反映出来，而且极大程度上提高了诊断的正确率。此外，这种诊断方法对操作条件及环境的要求不高，可常规大量开展。由此可以预见，免疫组织化学方法的广泛应用势必会给肺癌的临床研究做出重要的贡献。
参考文献：
[1]熊敏.非小细胞肺癌伴神经内分泌分化的研究[J].临床与实验病理学杂志，2012，13（03）：95.
[2]文道源.免疫组织化学方法在眼眶肿瘤病理诊断中的应用及其前景[J].赣南医学院学报，2013，22（02）：154-156.
[3]郑明军.免疫组织化学技术在病理诊断中的应用和要求[J].实用医技杂志，2014，21（04）：396-397.
[4]刘复生，刘骅，吕福东.免疫组织化学技术在肿瘤病理诊断中的应用及其存在的问题[J].癌症进展杂志，2013，5（04）：355-356.
[5]姚宏. 免疫组织化学染色在病理诊断中的应用[J].陕西医药杂志，2013，30（01）：3-5.
[6]饶秋，周晓军.免疫组织化学在肾脏肿瘤病理诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2013，35（04）：244-246.
[7]戴林，吕晓红，李志红，等.特殊染色和免疫组织化学染色在肾上皮性肿瘤诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2014，33（09）：140-142.
[8]郝春荣，吴翠环.免疫组织化学方法在肺癌病理诊断中的应用[J].同济医科大学学报，2013，29（01）：46-48.