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【摘要】目的：探讨细胞学薄层液基涂片技术在免疫组化中的应用。方法：选用有对比意义的二组病例。计有腺癌性胸腹水液基涂片74例。小细胞未分化痰涂片40例。采用免疫组化二代二步法进行染色。结果：腺癌性胸腹水薄层液基涂片中腺癌细胞对CEA抗体显阴性，间皮细胞对mesothelin（间皮素）抗体显阳性；小细胞未分化痰涂片中小细胞未分化癌细胞对CHA抗体显阳性。淋巴细胞对LCA抗体显阳性。结论：免疫组化的抗原抗体反应是具有高度特异性和敏感性的生物化学反应，对特定抗原识别力强。在细胞、亚细胞水平检测抗原分子是其他生物技术难以达到和替代的。在细胞学上具有广阔的应用前景。
【关键词】细胞学；薄层液基涂片；染色；方法
【Abstract】objective:tostudythin-layerliquid-basedcytologysmeartechniqueanditsapplicationinImmunohistochemistry.Method:theuseofcomparativesignificanceoftwogroupsofcases.Therewere74casesofadenocarcinomainpleuralfluid-basedsmear.40casesofsmallcell,resolvingphlegmandsmear.Secondgenerationusingimmunohistochemicaltwo-stepdye.Results:adenocarcinomainpleuraleffusionandascitesinathinlayerofliquidbasedsmearsadenocarcinomacellsonCEAantibody-negative,Mesothelialcellstomesothelin(mesothelin)antibody-positivesmallsmallcellundifferentiatedcarcinomacellandresolvingphlegmsmearonCHAantibody-positive.OnLCAantibody-positivelymphocytes.Conclusion:ImmunohistochemicalAntigen-antibodyreactionisahighdegreeofspecificityandsensitivityofbiochemicalreactions,toaspecificantigenrecognitionandstrong.Incells,subcellularleveldetectionAntigenmoleculeisdifficultforotherbiotechnologyandalternative.Onthecytologyhasbroadapplicationprospects.
【Keywords】Cytology;thinlayerliquidbasedsmears;dyeing;method.
【中圖分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0308-02
免疫组化是用特异性抗体对细胞或组织内的抗原进行定性、定位或定量检测。凡能作为抗原半抗原的物质，都可用免疫组化方法检测，近年免疫组化技术在病理组织学上广泛应用，但少见于细胞学薄层液基涂片的报道。本文总结细胞学薄层液基涂片的免疫组化染色实验，探讨免疫组化技术在细胞学上的应用。
1材料与方法
1.1材料：选用有对比意义的细胞学检材，记有腺癌性胸腹水薄层液基涂片74例，小细胞未分化癌涂片40例，试剂选用迈新公司Elivsionplus免疫组化试剂盒。
1.2方法：免疫组化二代二步染色法：1）胸腹水、痰薄层液基涂片、固定、潮干、PBS液洗涤。2）胰酶消化修复抗原，胶酶浓缩剂与稀释液按1:3滴加，37℃孵育15分钟，PBS液洗涤。3）阻断：滴加3%过氧化氢液，37℃孵育15分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS液洗涤。4）免疫反应，抗体依需要自选，滴加后37℃孵育1小时，PBS液洗涤。5增强反应，滴加增强剂，37℃孵育30分钟，PBS液洗涤.6）标记：滴加酶标抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30分钟，PBS液洗涤。7）显色，滴加新制DAB液，镜下观察，显色适当后放入蒸馏水中终止反应。8）苏木素复染，中性树胶封固。
2结果
经反复实验总结出以上染色方法，可使阳性细胞液基涂片中的阳性细胞呈黄棕色或棕褐色。74例腺癌性胸腹水离心涂片中，变形未圆形、卵圆形，聚集成团的深染的腺癌细胞，与增生间皮细胞在镜下难以区别；通过免疫组化染色，腺癌细胞对CEA抗体显阳性，间皮细胞对mesothelin（间皮素）抗体显阴性。40例小细胞未分化癌痰涂片中，小细胞未分化癌细胞略大于淋巴细胞，圆形、卵形、短小梭形，核深染，与大淋巴细胞难以鉴别。通过免疫组化染色，小细胞未分化癌细胞对CHA抗体显阳性，淋巴细胞对LCA抗体显阴性，这样可以鉴别开来。
3讨论
免疫组织化学的抗原抗体反应是特异性很强的免疫化学反应，具高度敏感性，对特定抗原的识别力很强。薄层液基结合滤膜细胞吸附，空气回流，喷射技术与高精度传感技术，实现细胞分散、采集、转移，使涂片较原来直接离心涂片具有细胞涂层薄、均匀，细胞丰富，不互相折叠，在同等量送检标本比离心涂片可作更多张涂片，以便做多项的免疫组化技术染色。因此免疫组化染色技术是一种定性与定量密切结合，形态、机能和代谢密切一体的检测技术。可以在细胞，亚细胞水平检测抗原分子，是其他生物技术难以达到和替代的。检索近年有关文献，少有免疫组化技术用于薄层液基涂片。本文选择二组具有对比意义的细胞学病例，总结出一套用于薄层液基涂片的免疫组化染色方法和步骤。对液基涂片之中的特定抗原进行精确标记，以讨论免疫组化染色技术在液基涂片上的应用。由于通过薄层液基涂片的染色技术，在光学显微镜下观察结果具一定局限性，对于一些难以鉴别的病例缺乏办法，容易作出误诊，出现假阴性或假阳性的诊断。所以，常规的细胞学诊断往往是作为一种辅助提示性诊断，临床还需要其他检查结果相互结合印证。而通过免疫组化染色的手段，可以在分子水平上对一些疑难病例作出鉴别诊断，解决了一些过去的化学上难以确诊的问题，从而具有很大的推广和应用前景。
【关键词】细胞学；薄层液基涂片；染色；方法
【Abstract】objective:tostudythin-layerliquid-basedcytologysmeartechniqueanditsapplicationinImmunohistochemistry.Method:theuseofcomparativesignificanceoftwogroupsofcases.Therewere74casesofadenocarcinomainpleuralfluid-basedsmear.40casesofsmallcell,resolvingphlegmandsmear.Secondgenerationusingimmunohistochemicaltwo-stepdye.Results:adenocarcinomainpleuraleffusionandascitesinathinlayerofliquidbasedsmearsadenocarcinomacellsonCEAantibody-negative,Mesothelialcellstomesothelin(mesothelin)antibody-positivesmallsmallcellundifferentiatedcarcinomacellandresolvingphlegmsmearonCHAantibody-positive.OnLCAantibody-positivelymphocytes.Conclusion:ImmunohistochemicalAntigen-antibodyreactionisahighdegreeofspecificityandsensitivityofbiochemicalreactions,toaspecificantigenrecognitionandstrong.Incells,subcellularleveldetectionAntigenmoleculeisdifficultforotherbiotechnologyandalternative.Onthecytologyhasbroadapplicationprospects.
【Keywords】Cytology;thinlayerliquidbasedsmears;dyeing;method.
【中圖分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0308-02
免疫组化是用特异性抗体对细胞或组织内的抗原进行定性、定位或定量检测。凡能作为抗原半抗原的物质，都可用免疫组化方法检测，近年免疫组化技术在病理组织学上广泛应用，但少见于细胞学薄层液基涂片的报道。本文总结细胞学薄层液基涂片的免疫组化染色实验，探讨免疫组化技术在细胞学上的应用。
1材料与方法
1.1材料：选用有对比意义的细胞学检材，记有腺癌性胸腹水薄层液基涂片74例，小细胞未分化癌涂片40例，试剂选用迈新公司Elivsionplus免疫组化试剂盒。
1.2方法：免疫组化二代二步染色法：1）胸腹水、痰薄层液基涂片、固定、潮干、PBS液洗涤。2）胰酶消化修复抗原，胶酶浓缩剂与稀释液按1:3滴加，37℃孵育15分钟，PBS液洗涤。3）阻断：滴加3%过氧化氢液，37℃孵育15分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS液洗涤。4）免疫反应，抗体依需要自选，滴加后37℃孵育1小时，PBS液洗涤。5增强反应，滴加增强剂，37℃孵育30分钟，PBS液洗涤.6）标记：滴加酶标抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30分钟，PBS液洗涤。7）显色，滴加新制DAB液，镜下观察，显色适当后放入蒸馏水中终止反应。8）苏木素复染，中性树胶封固。
2结果
经反复实验总结出以上染色方法，可使阳性细胞液基涂片中的阳性细胞呈黄棕色或棕褐色。74例腺癌性胸腹水离心涂片中，变形未圆形、卵圆形，聚集成团的深染的腺癌细胞，与增生间皮细胞在镜下难以区别；通过免疫组化染色，腺癌细胞对CEA抗体显阳性，间皮细胞对mesothelin（间皮素）抗体显阴性。40例小细胞未分化癌痰涂片中，小细胞未分化癌细胞略大于淋巴细胞，圆形、卵形、短小梭形，核深染，与大淋巴细胞难以鉴别。通过免疫组化染色，小细胞未分化癌细胞对CHA抗体显阳性，淋巴细胞对LCA抗体显阴性，这样可以鉴别开来。
3讨论
免疫组织化学的抗原抗体反应是特异性很强的免疫化学反应，具高度敏感性，对特定抗原的识别力很强。薄层液基结合滤膜细胞吸附，空气回流，喷射技术与高精度传感技术，实现细胞分散、采集、转移，使涂片较原来直接离心涂片具有细胞涂层薄、均匀，细胞丰富，不互相折叠，在同等量送检标本比离心涂片可作更多张涂片，以便做多项的免疫组化技术染色。因此免疫组化染色技术是一种定性与定量密切结合，形态、机能和代谢密切一体的检测技术。可以在细胞，亚细胞水平检测抗原分子，是其他生物技术难以达到和替代的。检索近年有关文献，少有免疫组化技术用于薄层液基涂片。本文选择二组具有对比意义的细胞学病例，总结出一套用于薄层液基涂片的免疫组化染色方法和步骤。对液基涂片之中的特定抗原进行精确标记，以讨论免疫组化染色技术在液基涂片上的应用。由于通过薄层液基涂片的染色技术，在光学显微镜下观察结果具一定局限性，对于一些难以鉴别的病例缺乏办法，容易作出误诊，出现假阴性或假阳性的诊断。所以，常规的细胞学诊断往往是作为一种辅助提示性诊断，临床还需要其他检查结果相互结合印证。而通过免疫组化染色的手段，可以在分子水平上对一些疑难病例作出鉴别诊断，解决了一些过去的化学上难以确诊的问题，从而具有很大的推广和应用前景。