【摘 要】
：
为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白（haptoglobin）Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系
【机 构】
：
武汉市农业科学技术研究院畜牧兽医科学研究所; 黄冈梅家墩牧业有限责任公司;
【基金项目】
：
国际科技合作计划项目(2017030209010261);武汉市农业科学院创新项目(cx201719-6;cx201806)
论文部分内容阅读
为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白（haptoglobin）Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B12、4F4、4F11、5D7、5G8、7E5、10C3和12F9,腹水效价均在1∶5.12×104以上;亚类鉴定显示,除3B12、4F11、10C3为IgG2a外,其余单克隆抗体均属于IgG1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F9和4F11。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。
其他文献
江苏省乡镇农技推广机构财务管理现状与对策措施２１００１３江苏省农业厅土肥站蔡军近年来，我省的乡镇农业技术推广体系建设工作有了很大的发展和提高，农技队伍基本稳定，经济实力不断增强。
2012年7-8月我国河北、内蒙古、吉林、黑龙江、辽宁、天津等地暴发玉米粘虫灾害，至8月中旬，粘虫发生面积进333万公顷，严重发生面积43万公顷，大片玉米地被粘虫啃食，造成严重的经济
做过销售区域经理的都知道，要想做好自己的工作，不但要有营销人激情和悟性，还有要公司政策上的支持，才能事半功倍，否则步履维艰的结局可能就是负气之后的辞职报告了。一般公司的资
目的:观察益气祛瘀饮对慢性心力衰竭气虚血瘀证治疗的临床疗效,并从中、西医两方面初步探究、讨论其作用机理。方法:将符合诊断与纳入标准的60例病例随机分为治疗组和对照组
目的:通过观察清肺化浊汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热郁肺证患者的临床证候疗效、血清TNF-α、肺功能及CAT评分的影响,探讨清肺化浊汤对AECOPD的疗效及可能的作用机制,
目的:观察经皮穴位电刺激干预后大鼠心肌细胞自噬、凋亡情况以及PKCδ、PKCε表达的变化,比较一次性大强度运动和不同形式的经皮穴位电刺激对大鼠心肌细胞的影响,探讨二者对
目的:通过针刺颈性眩晕患者益脑方(百会、风府)加灵台、神道穴,并与单纯针刺益脑方相对照,观察两组穴位对颈性眩晕患者的椎—基底动脉血流动力学的影响,为丰富临床配穴方法,
促销，因销售环节的不同而分为两大类：渠道促销和终端促销。渠道促销由于与销售政策、价格体系等企业机密有关联，为避免竞争对手洞知实施攻击堵截．具体的实施方案都比较保密。终端
背景：咳嗽变异性哮喘(Cough variant asthma, CVA)是支气管哮喘的一种特殊类型,也是慢性咳嗽的常见原因之一。临床表现为慢性、顽固性咳嗽,尤以夜间发作性干咳为特征,病程长,
目的:观察巨刺对急性脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖的影响,探讨其治疗缺血性脑血管病的作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组10只、假手术组10只、造模组30只,空