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【摘 要】本文通过单因素试验、正交试验得到裙带菜多酚最佳提取工艺，通过对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的抑制情况来研究其抗菌活性。结果表明，使用1：7的料液比，微波中小火加热1.5min，加75%乙醇在75℃浸提2次，每次2h，可以得到最高提取率3.388‰。当裙带菜多酚浓度为1.0mg/mL时，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果明显，抑菌圈为7mm，此浓度下对大肠杆菌无抑制效果。
【关键词】裙带菜；多酚；提取；抑菌
随着植物多酚化学的不断发展，植物多酚类物质在各个应用领域的应用范围逐渐扩大[1]。近年来，多酚以其生物学活性及功能特点，引起了世界各国研究、开发、利用的热潮[2]。目前，国内外对茶多酚、苹果多酚、葡萄多酚的提取、抑菌效果及在食品中的应用研究较多[3]，而海洋植物多酚还未进行深入研究，我国海洋植物资源丰富，如何充分、科学利用我国丰富的海洋资源已成为一项重要课题，而且对植物多酚的精细化和高附加值利用（如生物活性、食用及营养）是目前主要应用研究的方向和趋势[4-5]。
本次试验对裙带菜多酚的提取工艺进行优化，并研究其抑菌作用。为深入研究裙带菜多酚提供参考依据，同时也为裙带菜的高值化利用及新的抗肿瘤药物开发提供一种新的思路。
一、材料、主要仪器与试剂
材料：青岛裙带菜，市售。
主要仪器：HH-4数显恒温水浴锅；722N可见分光光度计；YXQ-LS-50A立式压力蒸汽灭菌器；SW-CJ-1D型单人净化工作台；DH4000B电热恒温培养箱。
主要试剂：无水乙醇、甲醇、三氯甲烷、没食子酸（分析纯AR）；福林酚试剂（1.0Normal）。
二、裙带菜多酚的提取及抑菌试验
（一）裙带菜多酚的提取工艺
新鲜裙带菜→洗净、切碎→均质→加乙醇→微波加热→水浴浸提→真空旋转蒸发→加甲醇、氯仿→萃取→真空旋转蒸发→定容
（二）裙带菜多酚提取率的测定[6]
参照杨会成的多酚测定方法进行测定。
（三）抑菌试验
将所提取的裙带菜多酚制成不同浓度的多酚溶液（1、2、3、4、5mg/mL），分别浸泡6张灭菌的圆形滤纸片。
分别刮取活化后的供试菌菌苔（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）一环于100mL液体培养基中，振荡摇匀，倒入溶化并冷却至40～45℃的固体培养基中，摇匀后，倒平板，待凝固后，取浸泡过的圆形滤纸片（直径6mm）贴于培养基平板上，同时作蒸馏水的空白对照，置37℃恒温培养箱中培养，24h后分别观察结果，测量抑菌圈。以上步骤均在无菌条件下操作，每份样品3个平行样。
三、结果与分析
（一）单因素试验结果
（1）浸提温度对裙带菜多酚提取率的影响
表3-1 浸提温度对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-1可知，在其他条件一定的情况下，当浸提温度在50～80℃时，多酚提取率随着浸提温度的升高而升高，当浸提温度高于80℃时，多酚提取率降低，由于多酚在高温条件下会发生氧化聚合。
（2）乙醇浓度对裙带菜多酚提取率的影响
表3-2 乙醇浓度对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-2可知，在其他条件一定的情况下，当乙醇浓度在60～80%范围内时，多酚提取率随着乙醇浓度的升高而迅速升高，高于80%时，随乙醇浓度的升高而降低，由于较高的乙醇浓度使裙带菜中其他成分溶出，干扰多酚与乙醇—水分子结合。
（3）料液比对裙带菜多酚提取率的影响
表3-3 料液比对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-3可知，在其他条件一定的情况下，多酚提取率随浸提液体积的增大而升高，当浸提液添加量为裙带菜物料的8倍时，提取率达到最大，随着浸提液的增加，多酚提取率基本不变，保持平稳状态。
（二）提取条件优化
根据单因素试验结果进行正交试验。正交试验结果及数据分析见表3-4。
表3-4 正交试验结果（如上表）
由表3-4可知，A1B1C1为裙带菜多酚最佳提取工艺条件，乙醇浓度70%，料液比1：7，浸提温度75℃，其最佳多酚提取率为3.388‰。通过极差分析可知，各因素对多酚提取率的影响顺序为：乙醇浓度>浸提温度>料液比。
（三）抑菌试验结果
表3-5 不同浓度的裙带菜多酚抑菌效果
由表3-5可知，裙带菜多酚对两种菌的生长都有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果更明显。当多酚浓度为1.0mg/mL时，对金黄色葡萄球菌有抑制作用，产生直径为7mm的抑菌圈，并且随着多酚浓度的增加而增大；当多酚浓度为3.0mg/mL时，对大肠杆菌有抑制作用，产生直径为7mm的抑菌圈，并且随多酚浓度的增加而增大。据有关资料显示，一般海藻多酚对革兰氏阳性菌抑菌效果好，如金黄色葡萄球菌，对革兰氏阴性菌的抑菌效果因菌种而异[20]，与本试验结果相符。4 结论
微波辅助乙醇提取法对裙带菜多酚最佳提取工艺条件为：用75%乙醇溶液在75℃条件下浸提2h，料液比为1：7，重复浸提2次，得到最高提取率为3.388‰。通过对裙带菜多酚的抑菌试验发现，裙带菜多酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制活性，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果更为明显，当浓度为1.0mg/mL时就可以产生7mm的抑菌圈，而对于大肠杆菌，浓度为3.0mg/mL时才能产生7mm的抑菌圈，所以，抑菌效果因菌种而异。
参考文献：
[1]纪明侯. 海藻化学[M]. 北京： 科学出版社， 1997： 324.
[2]左丽丽， 王振宇， 樊梓鸾， 等. 植物多酚类物质及其功能研究进展[J]. 中国林副特产， 2012， （5）： 119-122.
[3]Sailler B.， Glombitza K.W.. Phlorethols and fucophlorethols from the brown alga Cystoph or a retroflexa[J]. Phytochemistry， 1999， 50： 869-881.
[4]张笑， 李颖畅. 植物多酚的抑菌活性及其在食品保鲜中的应用[J]. 食品安全质量检测学报， 2013， 03： 769-773.
[5]白蕾. 海带多酚的分离提取及其抗肿瘤活性研究[D]. 大连理工大学， 2008， （2）： 25-30.
[6]杨会成. 海带（Laminaria japonica Aresch）多酚的提取、分离及其抗肿瘤、抗菌活性研究[D]. 中国海洋大学， 2008， （5）： 119-120.
【关键词】裙带菜；多酚；提取；抑菌
随着植物多酚化学的不断发展，植物多酚类物质在各个应用领域的应用范围逐渐扩大[1]。近年来，多酚以其生物学活性及功能特点，引起了世界各国研究、开发、利用的热潮[2]。目前，国内外对茶多酚、苹果多酚、葡萄多酚的提取、抑菌效果及在食品中的应用研究较多[3]，而海洋植物多酚还未进行深入研究，我国海洋植物资源丰富，如何充分、科学利用我国丰富的海洋资源已成为一项重要课题，而且对植物多酚的精细化和高附加值利用（如生物活性、食用及营养）是目前主要应用研究的方向和趋势[4-5]。
本次试验对裙带菜多酚的提取工艺进行优化，并研究其抑菌作用。为深入研究裙带菜多酚提供参考依据，同时也为裙带菜的高值化利用及新的抗肿瘤药物开发提供一种新的思路。
一、材料、主要仪器与试剂
材料：青岛裙带菜，市售。
主要仪器：HH-4数显恒温水浴锅；722N可见分光光度计；YXQ-LS-50A立式压力蒸汽灭菌器；SW-CJ-1D型单人净化工作台；DH4000B电热恒温培养箱。
主要试剂：无水乙醇、甲醇、三氯甲烷、没食子酸（分析纯AR）；福林酚试剂（1.0Normal）。
二、裙带菜多酚的提取及抑菌试验
（一）裙带菜多酚的提取工艺
新鲜裙带菜→洗净、切碎→均质→加乙醇→微波加热→水浴浸提→真空旋转蒸发→加甲醇、氯仿→萃取→真空旋转蒸发→定容
（二）裙带菜多酚提取率的测定[6]
参照杨会成的多酚测定方法进行测定。
（三）抑菌试验
将所提取的裙带菜多酚制成不同浓度的多酚溶液（1、2、3、4、5mg/mL），分别浸泡6张灭菌的圆形滤纸片。
分别刮取活化后的供试菌菌苔（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）一环于100mL液体培养基中，振荡摇匀，倒入溶化并冷却至40～45℃的固体培养基中，摇匀后，倒平板，待凝固后，取浸泡过的圆形滤纸片（直径6mm）贴于培养基平板上，同时作蒸馏水的空白对照，置37℃恒温培养箱中培养，24h后分别观察结果，测量抑菌圈。以上步骤均在无菌条件下操作，每份样品3个平行样。
三、结果与分析
（一）单因素试验结果
（1）浸提温度对裙带菜多酚提取率的影响
表3-1 浸提温度对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-1可知，在其他条件一定的情况下，当浸提温度在50～80℃时，多酚提取率随着浸提温度的升高而升高，当浸提温度高于80℃时，多酚提取率降低，由于多酚在高温条件下会发生氧化聚合。
（2）乙醇浓度对裙带菜多酚提取率的影响
表3-2 乙醇浓度对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-2可知，在其他条件一定的情况下，当乙醇浓度在60～80%范围内时，多酚提取率随着乙醇浓度的升高而迅速升高，高于80%时，随乙醇浓度的升高而降低，由于较高的乙醇浓度使裙带菜中其他成分溶出，干扰多酚与乙醇—水分子结合。
（3）料液比对裙带菜多酚提取率的影响
表3-3 料液比对裙带菜多酚提取率的影响
由表3-3可知，在其他条件一定的情况下，多酚提取率随浸提液体积的增大而升高，当浸提液添加量为裙带菜物料的8倍时，提取率达到最大，随着浸提液的增加，多酚提取率基本不变，保持平稳状态。
（二）提取条件优化
根据单因素试验结果进行正交试验。正交试验结果及数据分析见表3-4。
表3-4 正交试验结果（如上表）
由表3-4可知，A1B1C1为裙带菜多酚最佳提取工艺条件，乙醇浓度70%，料液比1：7，浸提温度75℃，其最佳多酚提取率为3.388‰。通过极差分析可知，各因素对多酚提取率的影响顺序为：乙醇浓度>浸提温度>料液比。
（三）抑菌试验结果
表3-5 不同浓度的裙带菜多酚抑菌效果
由表3-5可知，裙带菜多酚对两种菌的生长都有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果更明显。当多酚浓度为1.0mg/mL时，对金黄色葡萄球菌有抑制作用，产生直径为7mm的抑菌圈，并且随着多酚浓度的增加而增大；当多酚浓度为3.0mg/mL时，对大肠杆菌有抑制作用，产生直径为7mm的抑菌圈，并且随多酚浓度的增加而增大。据有关资料显示，一般海藻多酚对革兰氏阳性菌抑菌效果好，如金黄色葡萄球菌，对革兰氏阴性菌的抑菌效果因菌种而异[20]，与本试验结果相符。4 结论
微波辅助乙醇提取法对裙带菜多酚最佳提取工艺条件为：用75%乙醇溶液在75℃条件下浸提2h，料液比为1：7，重复浸提2次，得到最高提取率为3.388‰。通过对裙带菜多酚的抑菌试验发现，裙带菜多酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制活性，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果更为明显，当浓度为1.0mg/mL时就可以产生7mm的抑菌圈，而对于大肠杆菌，浓度为3.0mg/mL时才能产生7mm的抑菌圈，所以，抑菌效果因菌种而异。
参考文献：
[1]纪明侯. 海藻化学[M]. 北京： 科学出版社， 1997： 324.
[2]左丽丽， 王振宇， 樊梓鸾， 等. 植物多酚类物质及其功能研究进展[J]. 中国林副特产， 2012， （5）： 119-122.
[3]Sailler B.， Glombitza K.W.. Phlorethols and fucophlorethols from the brown alga Cystoph or a retroflexa[J]. Phytochemistry， 1999， 50： 869-881.
[4]张笑， 李颖畅. 植物多酚的抑菌活性及其在食品保鲜中的应用[J]. 食品安全质量检测学报， 2013， 03： 769-773.
[5]白蕾. 海带多酚的分离提取及其抗肿瘤活性研究[D]. 大连理工大学， 2008， （2）： 25-30.
[6]杨会成. 海带（Laminaria japonica Aresch）多酚的提取、分离及其抗肿瘤、抗菌活性研究[D]. 中国海洋大学， 2008， （5）： 119-120.