【摘 要】
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目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用. 方法采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、I型前胶原(α 1)mRNA的表达; Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将
【机 构】
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200032,复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学上海医学院分子遗传学教研室,200032,复旦大学上
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目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用. 方法采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、I型前胶原(α 1)mRNA的表达; Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3.1(-)-C/EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内,采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;在相差显微镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变.结果原代正常HSC中可以检测到C/EBPα m RNA和蛋白的表达,蛋白位于细胞质和细胞核内,但主要位于细胞质内,且除新鲜分离(0 d)组以外,随着HSC培养至2、4、7、10 d,C/EBP α蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势,而α-SMA、MMP2和I型前胶原(α1)的表达则逐步增强;转染后24 h,目的基因转染组HSC内C/EBPα的表达明显强于空载体对照组,而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少;转染后36 h,目的基因转染组细胞几乎全部死亡,残存的细胞形态变细,体积缩小,而空载体对照组细胞仍存活.结论 C/EBP α基因可能参与HSC的激活调控机制,且C/EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。
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