研究燃煤污染型氟中毒对大鼠睾丸B细胞淋巴瘤/白细胞-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x(Bcl-associated x protein, Bax)蛋白表达的影响,探讨氟中毒所致睾丸生殖毒害的机制。
方法将40只雄性SD大鼠按照体质量,采用随机数字表法分为4组:对照组,低、中、高氟组,每组10只。低、中、高氟组分别喂饲含氟20、40、60 mg/kg的饲料,对照组喂饲常规大鼠饲料(含氟1.3 mg/kg)。每组大鼠在120、180 d时股动脉放血法各处死5只,在处死前,观察氟斑牙的发生率及程度,收集大鼠24 h尿液,用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟;取大鼠睾丸组织,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);采用免疫组化SP法检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。
结果在120、180 d,低、中、高氟组所有大鼠均出现不同程度的氟斑牙,而对照组未检出。在120、180 d,对照组、低、中、高氟组大鼠尿氟[(1.69±0.03)、(3.56±0.10)、(12.09±0.38)、(23.55±0.33)mg/L;(1.71±0.09)、(4.07±0.25)、(16.23±0.28)、(28.44±0.50)mg/L]均依次增高(P均< 0.05);低、中、高氟组大鼠在180 d尿氟均高于120 d(P均< 0.05)。在120、180 d,对照组、低、中、高氟组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数[(0.46±0.11)%、(8.83±1.64)%、(17.24±3.96)%、(44.21±7.85)%;(0.54±0.11)%、(10.41±2.70)%、(22.23±3.96)%、(49.62±4.77)%]依次增加(P均< 0.05);低、中、高氟组,大鼠睾丸组织生精细胞凋亡指数在180 d均高于120 d(P均< 0.05)。在120、180 d,对照组、低、中、高氟组大鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达的平均光密度值(0.183±0.007、0.165±0.007、0.152±0.003、0.143±0.007;0.184±0.006、0.159±0.011、0.151±0.005、0.135±0.005)均依次降低(P均< 0.05)。在120 d,中、高氟组大鼠睾丸组织Bax蛋白表达水平(0.194±0.018、0.209±0.012)均高于对照组和低氟组(0.145±0.007、0.161±0.012,P均< 0.05);在180 d,对照组、低、中、高氟组大鼠睾丸组织Bax蛋白表达水平(0.145±0.009、0.185±0.013、0.207±0.011、0.230±0.014)依次增多(P均< 0.05)。在120 d,对照组、低、中、高氟组大鼠睾丸组织Bcl-2/bax蛋白表达比值(1.264±0.044、1.028±0.096、0.788±0.060、0.688±0.064)依次降低(P均< 0.05);在180 d,对照组、低、中氟组大鼠睾丸组织Bcl-2/bax比值(1.277±0.100、0.865±0.066、0.731±0.045)均高于高氟组(0.592±0.031,P均< 0.05),对照组高于中氟组(P< 0.05)。
结论燃煤污染型氟中毒可导致睾丸生精细胞凋亡指数升高、Bcl-2表达降低、Bax表达增强、Bcl-2/Bax比值降低;燃煤污染型氟中毒可能通过对凋亡相关基因调控参与雄性大鼠睾丸生殖损害机制。