【摘 要】
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目的 采用两种方法提取血浆外泌体,比较不同试剂盒所提取外泌体质量的差异及不同贮存条件对外泌体稳定性的影响.方法 收集健康志愿者血浆,在常温、4℃、-20℃、-80℃下,存放0
【机 构】
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湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院,湖北省帕金森病临床医学研究中心,武当特色中药研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000
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目的 采用两种方法提取血浆外泌体,比较不同试剂盒所提取外泌体质量的差异及不同贮存条件对外泌体稳定性的影响.方法 收集健康志愿者血浆,在常温、4℃、-20℃、-80℃下,存放0h、24 h、1周、1月,使用ExoQuickTM和Umibio试剂盒提取外泌体.透射电镜观察外泌体形态,二辛可宁酸(BCA)法进行外泌体蛋白质定量,Western blot法检测外泌体标志蛋白CD9和筏蛋白1(flotillin-1)的表达,纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测外泌体形态和粒径.结果 电镜观察到典型的呈圆形或椭圆形的外泌体,直径为30～ 150 nm;ExoQuickTM提取的外泌体总蛋白含量显著高于Umibio试剂盒.与ExoQuickTM比较,Umibio提取的外泌体CD9及flotillin-1表达更高,但该法耗时更长.常温保存条件下的外泌体粒子浓度明显低于在4℃、-20℃和-80℃,且外泌体直径随温度而改变.结论 与ExoQuickTM提取法相比,Umibio提取法耗时较长,但外泌体纯度较高,低温储存对血浆外泌体稳定性影响较小,但温度过低会影响粒径大小.
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