【摘 要】
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目的构建小鼠NF-κBp65亚基真核表达质粒。方法从培养的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,逆转录得到DNA,利用PCR方法钓取目的基因,将目的基因与目的载体pcDNA3.1（-）分别进
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目的构建小鼠NF-κBp65亚基真核表达质粒。方法从培养的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,逆转录得到DNA,利用PCR方法钓取目的基因,将目的基因与目的载体pcDNA3.1（-）分别进行酶切。酶切产物电泳回收后进行定向连接,其产物转化细菌感受态。对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的即为构建成功的目的质粒。结果经过PCR鉴定和酶切鉴定,证实DNA片段长度和序列正确。结论通过RT-PCR克隆出小鼠NF-κBp65亚基基因,并成功连接于目的载体
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