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为了提高青霉素G酰化酶(PGA)在酸性及有机溶剂中的稳定性,以大肠杆菌的晶体结构为模板,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构并且选择PGA分子表面的合适碱性氨基酸突变为丙氨酸.通过三种不同的快速PCR介导定点突变的方法,将位于PGA的α亚基21位、128位和β亚基492位、512位的赖氨酸残基分别突变为丙氨酸,获得四个突变酶Kα021A、Kα128A、Kβ492A和Kβ512A.其中Kα128A和Kβ512A保持与野生型相近的酶活力,其动力学性质如最适温度、最适pH、Km及