【摘 要】
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目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度血液HBV DNA提取方法（以下简称磁珠法），为用于临床自动化定量检测的核酸诊断试剂研发提供技术支持。方法用科华生物公司内部5份HBV强阳性血清标本，先通过磁珠的磁性、悬浮性、HBV DNA提取效果等对4种磁珠（A～D磁珠）进行筛选，并对磁珠用量（1～1.75 μl/ml）、裂解液pH值(4～9)、洗涤液中是否加入乙醇和洗脱液带磁珠扩增等条件进行系统优化；
【机 构】
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200237上海，华东理工大学生物工程学院（陆佳飞）；上海科华生物工程股份有限公司（周科隆、王缦）,,
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目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度血液HBV DNA提取方法（以下简称磁珠法），为用于临床自动化定量检测的核酸诊断试剂研发提供技术支持。
方法用科华生物公司内部5份HBV强阳性血清标本，先通过磁珠的磁性、悬浮性、HBV DNA提取效果等对4种磁珠（A～D磁珠）进行筛选，并对磁珠用量（1～1.75 μl/ml）、裂解液pH值(4～9)、洗涤液中是否加入乙醇和洗脱液带磁珠扩增等条件进行系统优化；并对建立的磁珠法线性范围、精密度、灵敏度、抗污染和抗干扰能力等技术性能进行评价。然后，分别用磁珠法与国内成熟的煮沸法定量检测100份HBV血清标本，用磁珠法与国际“金标准”Roche COBAS TaqMan Test（以下简称Roche法）定量检测50份HBV血清标本，并比较分析3种方法的相关性。
结果通过实验条件优选试验确定超顺磁A磁珠在物理性能和DNA提取效果都优于其他3种磁珠，磁珠最佳使用量为1.25 μl/ml，裂解液最佳pH值为7~8，洗涤液中可去除乙醇成分，并可直接带磁珠进行扩增反应。通过平行检测5份公司内部HBV强阳性血清标本以及梯度稀释的血清标本确定磁珠法的线性范围为4×101~4×108 IU/ml，煮沸法为4×102~4×108 IU/ml；磁珠法检测灵敏度为30 IU/ml，高于煮沸法（100 IU/ml）；在低浓度HBV血清标本检测中，磁珠法的精密度（CV为6.0%）优于煮沸法（CV为11.9%）；磁珠法检测的假阳性率为0，而煮沸法假阳性率为3.1%，磁珠法抗污染能力优于煮沸法；煮沸法在标本中肝素钠含量达到62.5 U/ml时，检出血清中HBV DNA含量明显下降，当肝素钠达1000 U/ml时，无法检出HBV DNA，而肝素钠对磁珠法几乎无影响。同时，磁珠法和煮沸法平行检测100份临床HBV血清标本，磁珠法的阳性率（86%）高于煮沸法（74%），且2种方法的相关性较好（R2=0.948，P＜0.05）；磁珠法和Roche法平行检测50份临床HBV血清标本，磁珠法检出阳性率［95%（49/50）］与Roche法［100%(50/50)］接近，2种方法间有显著相关性（R2=0.963，P＜0.05）。
结论建立的磁珠法定量检测HBV DNA的得率高，具有较宽的检测范围、定量准确、操作简单，可作为实验室首选的核酸提取方法用于临床乙型肝炎诊断。(中华检验医学杂志，2012,35：843-850)
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