摘 要：目的：探究积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用。方法：将流动相设定乙腈-水，应用C18柱，采用阶梯式进行脱洗，实施波长205nm检测。结果：所选取的四组三萜类化合物，在回收率上，积雪草苷平均回收率为97.62%，羟基积雪草苷平均回收率为98.96%。结论：将HPLC应用到积雪草中三萜类化合物含量的测定中，方法简单容易操作，得出的测定结果也较为精确，因此，该方法得到了普遍的认可，在积雪草药材以及制剂的质量控制上有着重要的应用价值。
　　关键词：积雪草；三萜类化合物；含量；测定；HPLC；运用
　　所谓的积雪草就是一种伞状类的植物，其属于全草类型。一般来说，积雪草中包含各种各样的三萜类化合物，其中主要有积雪草苷和羟基积雪草苷。这种积雪草在实际的应用中，具有消毒解热以及消肿的作用。这种积雪草在我国有着悠久的药用历史。在临床中，积雪草中发挥药用价值的就是积雪草总苷。本文就主要针对积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用进行了简要的研究分析，现将具体报道如下。
　　1 材料与仪器
　　仪器型号：安捷伦1200高效液相色谱仪；G1311A四元梯度泵；G1314B紫外检测器。
　　材料：积雪草生药采自贵州、湖北、广西三省；积雪草苷、羟基积雪草苷对照品源自中检所。液相的有机流动相为乙腈（LiChrosolv），水为桂林娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　选择C18作为色谱柱，而乙腈水则作为流动性，采用的梯度最好控制在0-40min的范围内，乙腈由原本的5%增长到100%，波长设定为205nm进行检测，将流动相的流速控制在为每分钟0.6ml，其中柱温要求控制为30℃，而需要将灵敏度控制为0.05Aufs。
　　2.2 选择吸收的波长
　　选取一定分量的积雪草苷，将其作为对照品，然后加入乙腈进行充分融合，再利用光波长度在200-300nm之间的紫外线进行配置溶液扫描，所得的曲线图可以详见图1。
　　图1 雪草苷紫外扫描图谱
　　从上图中就可以看出，曲线最高点为就是吸收的峰值，最高峰值为205nm，所以，205nm就可以被看做是检验的波长。
　　2.3 标准曲线的绘制
　　准确的选取10mg的积雪草苷，然后再准确的称取40mg的羟基积雪草苷，将所选取的材料全部放置到已选取好的10ml容量瓶中，加入少量的甲醇，进行充分的摇匀，配置长溶液，然后利用超声的方式使得各种成分均得到充分的溶解，将流水温度保持在室温的水平上，加入容量瓶中加入甲醇，将溶液控制在标准的刻度上。采用微量进样器来进行溶液的吸取，并分别按照2.5μl、5μl、7.5μl、10μl、12.5μl、15μl吸取对照溶液，实施分别进样，同时针对扫描所得的峰值进行详尽的记录。将微克数作为横轴，而将峰面积作为纵轴，这样就可以进行扫描曲线图谱的绘制。
　　2.4 测定样品
　　将积雪草制作成生药粉，选取其中的5.0g，将其放置到提取器中，然后加入石油醚脱脂300ml，进行溶解，时间控制为3h，然后静置，直到溶液干燥。将干燥后的配置物利用甲醇来进行提取，甲醇量为100ml，提取期限规定为5h，将所提取出来的溶液进行压缩，将其压缩为10ml，然后导入已选定的25ml的容量瓶中，利用甲醇来对容器壁进行清洗。静置一段时间，将容量瓶中溶液的温度降低到室温水平后，加入甲醇，直到标准刻度。进行充分的搅拌，再利用滤膜实施过滤处理，针对过滤后溶液进行进样选取，并实施测定，所选取的两组对照品中，具体测定含量可详见表2，HPLC图谱见图2和图3。
　　1羟基积雪草苷；2积雪草苷
　　图2 积雪草混合对照品的HPLC图谱
　　2.5 精密度试验
　　精密吸收各对照品溶液10μl，重复进样5次，记录峰面积，则羟基积雪草苷、积雪草苷的RSD分别为0.54%、1.38%。
　　2.6 重现性试验
　　对同一编号的样品进行3次测定，计算含量，则羟基积雪草苷、积雪草苷的RSD分别为1.80%、2.11%。
　　2.7 回收率试验
　　精密称取已测含量的积雪草药粉4.0g，分别加入两种三萜化合物的对照品溶液10ml，按样品测定项下处理，然后再取10μl进样测定，则羟基积雪草苷、积雪草苷的平均回收率分别为98.96%、97.62%；RSD分别为2.01%、1.95%。
　　3 结论
　　3.1 积雪草，多年生草本，茎匍匐，细长，节上生根。叶片膜质至草质，圆形、肾形或马蹄形，长1-2.8厘米，宽1.5-5厘米，边缘有钝锯齿，基部阔心形，两面无毛或在背面脉上疏生柔毛；掌状脉5-7，两面隆起，脉上部分叉；叶柄长1.5-27厘米，无毛或上部有柔毛，基部叶鞘透明，膜质。这类植物多分布于陕西、江苏、安徽、浙江、江西、湖南、湖北、福建、台湾、广东、广西、海南、四川、云南等省区。
　　3.2 通过相关的文献资料可以了解到，积雪草中三萜草苷在进行含量测定的时候，一般采用的测定方法主要是应用的传统的对滴定分析法，这样的测定方法在实际的应用中，既复杂又不具备较强的灵敏度，在试验结果的测定上也相对较为马虎，并不能够提供精确的测定结果，这样就使得含量的测定工作开展并不顺利，而为了能够使得积雪草中三萜类化合物含量测定的结果保持精确性，本文就采用了高效液相分析法来展开测定工作，这样的测定方法有效的彌补了传统测定方法在实际应用中存在不足，同时其也能够精确的对各种不同的三萜类成分实施精确的测定，在药材的质量控制上有着广泛的应用价值。
　　3.3 根据本文对样品测定的结果来进行分析，积雪草中的羟基积雪草苷所含有的成分量相较于积雪草苷的含量来说要更多，并且每种的积雪草中所含的成分均来自不同的区域，就算是含有的三萜成分，各种不同的成分之间也有着明显的不同。
　　参考文献
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