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摘要：目的 对比呼吸道感染患者中肺炎支原体抗体效价检测同被动颗粒凝集检测结果的一致性及其在肺炎支原体诊断中的价值。方法 选择我院2011年5月至2013年5月收治的155例呼吸道感染的患者作为研究对象，分别采用肺炎支原体抗体分型及被动颗粒凝集法检测患者血清IgG，IgM，IgA，.对所得结果进行对比。秩和检验分析各抗体亚型在凝集法滴度组间和患者年龄组的差异.结果 两种方法检测的一致性好。凝集法不同滴度组间IgM，IgA的检出率具有统计学差异；IgM于青少年及幼儿的检出率高，而IgG，IgA在老年中检出率高。结论 抗体分型检测与被动颗粒凝集检测具有较好的一致性，实际诊断肺炎支原体感染的患者应当在结合二者的同时根据患者病史、发病时间、用药情况等因素进行综合诊断。
关键词：呼吸道感染；肺炎支原体；被动凝集法；抗体分型
肺炎支原体是人体主要的呼吸道病原体，它是一种介于细菌与病毒间的微生物，是人类能在无生命培养基上生长繁殖的最小原核微生物。感染后其病理改变主要以间质性肺炎为主，它是社区获得性肺炎的主要致病源。肺炎支原体的感染可发生在任何年龄段，但5～20岁感染率较高【1】。感染后引起肺炎支原体肺炎，并会在3～5年出现一次大流行。肺炎支原体实验室诊断主要依靠血清学检测，目前为止血清学检测以被动颗粒凝集法和ELISA方法使用最为广泛【2】，其中被动凝集法检测的抗体水平是各类亚型抗体总和，ELISA法检测是特异性的针对IgM，IgG，IgA抗体进行检测。事实上实际临床工作中两种方法所得IgM阳性结果一致性不好，临床诊断方面具有一定不确定性。相当一部分学者认为颗粒法检测肺炎支原体抗体的阳性率高，且检测肺炎支原体抗体的有效界值过低，应当将1：40的阳性界值提高，但在实际诊断中发现对于成人支原体感染诊断效能并未提高。而特异性抗体亚型同病程间具有良好的关系，通常情况下肺炎支原体感染后特异性抗体IgM出现最早故可以被认为是急性感染的标志【3】。IgA继IgM后出现但持续时间较长，IgG抗体是在发病后1个月产生可终生免疫。一般情况下选择IgM抗体可提示早期感染，IgG可提示为既往感染但是抗体均为阳性时可能为初次感染或现症感染。临床中虽然单独检测IgG并无太大诊断价值，但可用于实验室病原学检测，在检测的双份血清中抗体于2～4周变化显著，对于临床确诊有较大作用。本研究对155例疑似肺炎支原体感染的患者进行颗粒凝集法和ELISA检测对结果进行比较，评价两种诊断方法的检测效能。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2011年5月至2013年5月收治的155例呼吸道感染的患者作为研究对象，男性78例，女性77例。平均年龄32.1±19.4岁。病例入选标准：标本采集时间于肺炎支原体感染高发期。患者接受治疗前出现明显咳嗽发热，体征和临床表现为疑似肺炎支原体感染。患者于初诊时采集血样，将无污染标本置于-20℃保存。
1.2 方法
肺炎支原体抗体效价检测：使用日本富士瑞欧株式会社生产的MP抗体试剂盒SERODLA-MYCOⅡ，具体操作见试剂盒。阳性抗体效价为1：160.以滴度表示。
抗肺炎支原体抗体亚型检测：运用ELISA法检测肺炎支原体IgM，IgG，IgA，抗体试剂盒购自德国欧盟。严格按照试剂盒操作说明进行。检测结果IgM，IgG，IgA任意一项为阳性则结果为阳性。以样本吸光度值/标准品吸光度值大于或等于1.1为界值。可疑样本于一周后重复检测。
不同滴度各抗体亚型分布的分析：颗粒凝集法检测结果为阳性标本分为3个滴度组，分别为高、中、低组，不同滴度组下各亚型阳性率进行统计学检测。高滴度组浓度≥1：2560，中滴度组（1：640～1：1280），低滴度组（1：160～1：320）。分析在高滴度组下IgM阳性结果同颗粒凝集法的关系，结合临床判断诊断价值。
将不同年龄组各抗体亚型分布进行分析：将所有阳性患者按年龄组分为4组，分别为幼儿组，青年组，成人组，老年组。
两种检测方法的一致性检验：将每个标本分别进行抗肺炎支原体抗体颗粒凝集法及抗体亚型检测对结果进行一致性检验。
1.3 统计学方法
使用SPSS15.0统计学软件对所得数据进行统计分析，对两种诊断结果进行一致性检验（Kappa检验），当Kappa≥0.7为一致性良好，0.4 2 结果
2.1颗粒凝集法同ELISA法检测的一致性
本试验凝集法抗体滴度1：160为急性感染，1：40为抗体阳性。凝集法结果显示155例患者中112例为支原体阳性（72.25%），33例为支原体阴性（21.29%）；ELISA法结果为105例阳性，17例阴性，检测kappa=0.678，总符合率87.5%一致性好。具有相关性（r=0.559P<0.05）具体数据见表1.
2.2 不同滴度抗体亚型分布
将凝集法检测阳性标本按照滴度不同区分为3组，ELISA检测不同滴度组间IgM，IgA的检出率具有统计学差异；随抗体滴度的升高，IgM，IgA亚型阳性比例增加，具体数据见表2
2.3 不同抗体亚型在不同年龄段中的分布
IgM于幼儿组（42.5%）、青年组（35.1%）的检出率高在老年组检出率（1.2%），而IgG，IgA在老年中检出率高分别为98.2%和89.3%
3 讨论
肺炎支原体是引发儿童成人呼吸道感染的首要原因，既往研究表明肺炎支原体多感染儿童但近年流行病学表明肺炎支原体感染可在15～45岁人群中。肺炎支原体是一类对大环内酯类药物敏感但常规药物耐受的细菌体。其治疗受到临床广泛关注。目前肺炎支原体感染的检测方法有3种包括病原体分离与培养，PCR诊断以及血清学检测【4】。我们认为肺炎支原体分类培养虽然是诊断的金标准但标本含量少，且呼吸道感染细菌较多，难以将特定的细菌分离开来，耗时较长，给操作带来不便。另外由于标本检测所需时间较长，造成污染的杂菌较多导致检测阳性率低。所以并不适应于短期诊断肺炎支原体感染的患者。而PCR诊断方法的检出率较高，但特异性较差【5】，在临床的使用还是受到了限制。因此选用肺炎支原体抗体可以作为辅助诊断肺炎支原体感染的重要方法。 其中颗粒凝集法在日常检测中已广泛使用，相比较ELISA法可以弥补其无法鉴别抗体的不足，本研究显示两种方法检测结果的一致性较高，总符合率87.5%，两种检测结果一致。
ELISA分型研究结果表明，凝集法阳性标本检测到的特异性主要是IgG，同以往研究不同。涂少华【6】对102名疑似肺炎支原体感染患者进行ELISA分型检测发现阳性标本中主要抗体亚型是IgM。但IgM抗体可以提示为患者现症感染，故由凝集法结果代表的IgM抗体阳性会造成临床较高的误诊率，这是造成血清学检测假阳性率较高的主要因素。
本组研究通过对各个亚型阳性标本在4个年龄组的比较发现，IgM于幼儿组（42.5%）、青年组（35.1%）的检出率高于在老年组检出率（1.2%），而IgG，IgA在老年组中检出率高分别为98.2%和89.3%。季伟【7】等比较肺炎支原体抗体各亚型阳性的标本在4个年龄组的比例发现老年组特异IgA抗体阳性率为66.7%，高于青年组、成年组、少年组，与本研究结果一致。原因可能是近期感染的老年或成人，仅存在IgG，但IgM，IgA在感染后相当一段时间均为阴性，另外当患者出现症状就诊时，IgM抗体可能为高水平，也可能含量较低，所以临床需要确诊肺炎支原体感染应当结合个体的差异，了解疾病人群并联合检测支原体抗体IgM，IgG，IgA。
综上所述，肺炎支原体抗体是反应人体对支原体感染后的反应性并非检测肺炎支原体本身，即使感染后IgM抗体为阴性也不能排除感染，应当严格按照肺炎支原体感染诊断原则，动态检测IgG，IgA，或抗体效价，结合患者病史、发病时间等综合因素全面分析肺炎支原体抗体的临床意义。
参考文献：
[1] 刘杨，张泓，叶信予等.2005-2008年上海分离肺炎支原体对抗菌药物的敏感性及对大环内酯类的耐药机制研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2009，29（12）：1110-1113.
[2] 廖春盛，戴小波，刘建军等.呼吸道感染患者肺炎支原体检测的临床意义[J].国际检验医学杂志，2011，32（13）：1474-1475，1477.
[3] 薛一鸣，林丽星，陈婧等.兰州地区儿童呼吸道感染常见病毒和肺炎支原体检测及分析[J].临床荟萃，2012，27（9）：751-754.
[4] 董燕芬，马玲娣.肺炎支原体检测及临床应用进展[J].国际检验医学杂志，2010，31（3）：269-270.
[5] 张敏，张萍，付蓉等.探讨两种肺炎支原体检测法的临床检测时机[J].临床医学，2011，31（2）：94-95
[6] 涂少华，叶元康，沈昭在等.双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立[J].检验医学，2005，20（3）：214-216.
[7] 季伟，陈正荣，张爱丽等.荧光PCR和定量ELISA在呼吸道肺炎支原体感染诊断中的应用[J].临床儿科杂志，2009，27（7）：625-628
关键词：呼吸道感染；肺炎支原体；被动凝集法；抗体分型
肺炎支原体是人体主要的呼吸道病原体，它是一种介于细菌与病毒间的微生物，是人类能在无生命培养基上生长繁殖的最小原核微生物。感染后其病理改变主要以间质性肺炎为主，它是社区获得性肺炎的主要致病源。肺炎支原体的感染可发生在任何年龄段，但5～20岁感染率较高【1】。感染后引起肺炎支原体肺炎，并会在3～5年出现一次大流行。肺炎支原体实验室诊断主要依靠血清学检测，目前为止血清学检测以被动颗粒凝集法和ELISA方法使用最为广泛【2】，其中被动凝集法检测的抗体水平是各类亚型抗体总和，ELISA法检测是特异性的针对IgM，IgG，IgA抗体进行检测。事实上实际临床工作中两种方法所得IgM阳性结果一致性不好，临床诊断方面具有一定不确定性。相当一部分学者认为颗粒法检测肺炎支原体抗体的阳性率高，且检测肺炎支原体抗体的有效界值过低，应当将1：40的阳性界值提高，但在实际诊断中发现对于成人支原体感染诊断效能并未提高。而特异性抗体亚型同病程间具有良好的关系，通常情况下肺炎支原体感染后特异性抗体IgM出现最早故可以被认为是急性感染的标志【3】。IgA继IgM后出现但持续时间较长，IgG抗体是在发病后1个月产生可终生免疫。一般情况下选择IgM抗体可提示早期感染，IgG可提示为既往感染但是抗体均为阳性时可能为初次感染或现症感染。临床中虽然单独检测IgG并无太大诊断价值，但可用于实验室病原学检测，在检测的双份血清中抗体于2～4周变化显著，对于临床确诊有较大作用。本研究对155例疑似肺炎支原体感染的患者进行颗粒凝集法和ELISA检测对结果进行比较，评价两种诊断方法的检测效能。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2011年5月至2013年5月收治的155例呼吸道感染的患者作为研究对象，男性78例，女性77例。平均年龄32.1±19.4岁。病例入选标准：标本采集时间于肺炎支原体感染高发期。患者接受治疗前出现明显咳嗽发热，体征和临床表现为疑似肺炎支原体感染。患者于初诊时采集血样，将无污染标本置于-20℃保存。
1.2 方法
肺炎支原体抗体效价检测：使用日本富士瑞欧株式会社生产的MP抗体试剂盒SERODLA-MYCOⅡ，具体操作见试剂盒。阳性抗体效价为1：160.以滴度表示。
抗肺炎支原体抗体亚型检测：运用ELISA法检测肺炎支原体IgM，IgG，IgA，抗体试剂盒购自德国欧盟。严格按照试剂盒操作说明进行。检测结果IgM，IgG，IgA任意一项为阳性则结果为阳性。以样本吸光度值/标准品吸光度值大于或等于1.1为界值。可疑样本于一周后重复检测。
不同滴度各抗体亚型分布的分析：颗粒凝集法检测结果为阳性标本分为3个滴度组，分别为高、中、低组，不同滴度组下各亚型阳性率进行统计学检测。高滴度组浓度≥1：2560，中滴度组（1：640～1：1280），低滴度组（1：160～1：320）。分析在高滴度组下IgM阳性结果同颗粒凝集法的关系，结合临床判断诊断价值。
将不同年龄组各抗体亚型分布进行分析：将所有阳性患者按年龄组分为4组，分别为幼儿组，青年组，成人组，老年组。
两种检测方法的一致性检验：将每个标本分别进行抗肺炎支原体抗体颗粒凝集法及抗体亚型检测对结果进行一致性检验。
1.3 统计学方法
使用SPSS15.0统计学软件对所得数据进行统计分析，对两种诊断结果进行一致性检验（Kappa检验），当Kappa≥0.7为一致性良好，0.4
2.1颗粒凝集法同ELISA法检测的一致性
本试验凝集法抗体滴度1：160为急性感染，1：40为抗体阳性。凝集法结果显示155例患者中112例为支原体阳性（72.25%），33例为支原体阴性（21.29%）；ELISA法结果为105例阳性，17例阴性，检测kappa=0.678，总符合率87.5%一致性好。具有相关性（r=0.559P<0.05）具体数据见表1.
2.2 不同滴度抗体亚型分布
将凝集法检测阳性标本按照滴度不同区分为3组，ELISA检测不同滴度组间IgM，IgA的检出率具有统计学差异；随抗体滴度的升高，IgM，IgA亚型阳性比例增加，具体数据见表2
2.3 不同抗体亚型在不同年龄段中的分布
IgM于幼儿组（42.5%）、青年组（35.1%）的检出率高在老年组检出率（1.2%），而IgG，IgA在老年中检出率高分别为98.2%和89.3%
3 讨论
肺炎支原体是引发儿童成人呼吸道感染的首要原因，既往研究表明肺炎支原体多感染儿童但近年流行病学表明肺炎支原体感染可在15～45岁人群中。肺炎支原体是一类对大环内酯类药物敏感但常规药物耐受的细菌体。其治疗受到临床广泛关注。目前肺炎支原体感染的检测方法有3种包括病原体分离与培养，PCR诊断以及血清学检测【4】。我们认为肺炎支原体分类培养虽然是诊断的金标准但标本含量少，且呼吸道感染细菌较多，难以将特定的细菌分离开来，耗时较长，给操作带来不便。另外由于标本检测所需时间较长，造成污染的杂菌较多导致检测阳性率低。所以并不适应于短期诊断肺炎支原体感染的患者。而PCR诊断方法的检出率较高，但特异性较差【5】，在临床的使用还是受到了限制。因此选用肺炎支原体抗体可以作为辅助诊断肺炎支原体感染的重要方法。 其中颗粒凝集法在日常检测中已广泛使用，相比较ELISA法可以弥补其无法鉴别抗体的不足，本研究显示两种方法检测结果的一致性较高，总符合率87.5%，两种检测结果一致。
ELISA分型研究结果表明，凝集法阳性标本检测到的特异性主要是IgG，同以往研究不同。涂少华【6】对102名疑似肺炎支原体感染患者进行ELISA分型检测发现阳性标本中主要抗体亚型是IgM。但IgM抗体可以提示为患者现症感染，故由凝集法结果代表的IgM抗体阳性会造成临床较高的误诊率，这是造成血清学检测假阳性率较高的主要因素。
本组研究通过对各个亚型阳性标本在4个年龄组的比较发现，IgM于幼儿组（42.5%）、青年组（35.1%）的检出率高于在老年组检出率（1.2%），而IgG，IgA在老年组中检出率高分别为98.2%和89.3%。季伟【7】等比较肺炎支原体抗体各亚型阳性的标本在4个年龄组的比例发现老年组特异IgA抗体阳性率为66.7%，高于青年组、成年组、少年组，与本研究结果一致。原因可能是近期感染的老年或成人，仅存在IgG，但IgM，IgA在感染后相当一段时间均为阴性，另外当患者出现症状就诊时，IgM抗体可能为高水平，也可能含量较低，所以临床需要确诊肺炎支原体感染应当结合个体的差异，了解疾病人群并联合检测支原体抗体IgM，IgG，IgA。
综上所述，肺炎支原体抗体是反应人体对支原体感染后的反应性并非检测肺炎支原体本身，即使感染后IgM抗体为阴性也不能排除感染，应当严格按照肺炎支原体感染诊断原则，动态检测IgG，IgA，或抗体效价，结合患者病史、发病时间等综合因素全面分析肺炎支原体抗体的临床意义。
参考文献：
[1] 刘杨，张泓，叶信予等.2005-2008年上海分离肺炎支原体对抗菌药物的敏感性及对大环内酯类的耐药机制研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2009，29（12）：1110-1113.
[2] 廖春盛，戴小波，刘建军等.呼吸道感染患者肺炎支原体检测的临床意义[J].国际检验医学杂志，2011，32（13）：1474-1475，1477.
[3] 薛一鸣，林丽星，陈婧等.兰州地区儿童呼吸道感染常见病毒和肺炎支原体检测及分析[J].临床荟萃，2012，27（9）：751-754.
[4] 董燕芬，马玲娣.肺炎支原体检测及临床应用进展[J].国际检验医学杂志，2010，31（3）：269-270.
[5] 张敏，张萍，付蓉等.探讨两种肺炎支原体检测法的临床检测时机[J].临床医学，2011，31（2）：94-95
[6] 涂少华，叶元康，沈昭在等.双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立[J].检验医学，2005，20（3）：214-216.
[7] 季伟，陈正荣，张爱丽等.荧光PCR和定量ELISA在呼吸道肺炎支原体感染诊断中的应用[J].临床儿科杂志，2009，27（7）：625-628