siRNA蛋白抑制对LNCaP细胞增殖的影响作用

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目的筛选针对α甲基-辅酶A消旋酶(AMACR)的小分子干扰RNA(siRNA),探讨该蛋白抑制后对前列腺癌细胞系LNCaP增殖的影响。方法设计并合成3对针对AMACR的siRNA序列,通过siPORTTMNeoFXTM转染LNCaP细胞;RT-PCR检测siRNA作用后AMACRmRNA的表达,Westernblot检测AMACR蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡。结果通过测定条带灰度值并分析,编号21030的siRNA可有效抑制AMACR表达约77%,有效抑制AM-ACRmRNA水平约60%,编号为113442和21203的siRNA均不能有效抑制AMACR表达。转染编号21030的siRNA可抑制LNCaP细胞增殖,但未发现明显的细胞凋亡。结论编号21030的siRNA可特异有效下调LNCaPAMACR基因表达,该蛋白抑制后可抑制LNCaP细胞增殖,为前列腺癌基因治疗提供新的思路。 Objective To screen small interfering RNA (siRNA) directed against α-methyl-CoA racemase (AMACR) and investigate its effect on the proliferation of prostate cancer cell line LNCaP. Methods Three siRNA sequences against AMACR were designed and synthesized. The siRNA was transfected into LNCaP cells by siPORTTMNeoFXTM. The expression of AMACR mRNA was detected by RT-PCR. The expression of AMACR protein was detected by Western blot. The proliferation of cells was detected by CCK-8. Apoptosis. Results The siRNA of No. 21030 effectively inhibited AMACR expression by about 77% and inhibited AM-ACR mRNA expression by about 60%. The siRNAs numbered 113442 and 21203 could not inhibit AMACR expression effectively. Transfection of siRNA No. 21030 inhibited LNCaP cell proliferation, but no significant apoptosis was found. Conclusion siRNA of No. 21030 can downregulate the expression of LNCaPAMACR gene specifically and effectively. This protein can inhibit the proliferation of LNCaP cells and provide a new idea for gene therapy of prostate cancer.
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