【摘 要】
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目的 检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性.方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院普通外科
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目的 检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性.方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500μmol/L) CoCl2对LoVo细胞活力以及增殖的影响.收集前期已包装成功的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和人端粒酶催化亚单位启动子hTERTp联合调控CDX2表达的慢病毒表达载体pLVX-5H RE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5 HhC)病毒液,感染hTERT+ LoVo细胞及hTERT-HK-2细胞,细胞免疫组化法验证该治疗载体的靶向性;复苏前期筛选的稳定表达5HhC的LoVo细胞(5HhC/LoVo),用缺氧模拟剂CoCl2模拟缺氧微环境,Western blot和RT-PCR分别检测缺氧调控下CDX2的表达水平.结果 结肠癌细胞株LoVo在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力及增殖均受到抑制,在高浓度(300、400、500 μmol/L)作用下抑制效果更加明显;5HhC病毒成功感染hTERT+LoVo细胞,而在hTERT-HK-2细胞中不表达;Western blot和RT-PCR证实缺氧可上调5HhC/LoVo细胞中CDX2蛋白和mRNA的表达,且在300 μmol/L CoCl2作用24 h其蛋白表达量最高.结论 缺氧微环境可明显上调hTER-Tp靶向性的治疗载体5HhC中抑癌基因CDX2的表达.
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