【摘 要】
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目的 检测结核分枝杆菌的利福平耐药情况，分析耐药突变位点及比率，评估高分辨率熔解曲线法对利福平耐药性检测的效能。方法 采用比例法药敏试验对菌株的利福平耐药性进行检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,对RpoB基因进行PCR扩增，将PCR扩增产物测序，应用DNAman软件分析菌株的利福平耐药突变位点；采用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术对结核分枝杆菌利福平耐药性进行敏感性检测。结果 药敏试验显示，8
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（No.2018YFD0500902）； 河西学院博士启动基金项目（No.KYQD2020001）；
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目的 检测结核分枝杆菌的利福平耐药情况，分析耐药突变位点及比率，评估高分辨率熔解曲线法对利福平耐药性检测的效能。方法 采用比例法药敏试验对菌株的利福平耐药性进行检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,对RpoB基因进行PCR扩增，将PCR扩增产物测序，应用DNAman软件分析菌株的利福平耐药突变位点；采用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术对结核分枝杆菌利福平耐药性进行敏感性检测。结果 药敏试验显示，84株结核分枝杆菌中利福平耐药24株，敏感60株；对目的基因PCR产物测序分析，显示84株菌株RpoB基因RRDR区共存在7个突变位点，分别为511、513、516、526、531、533、535位密码子，突变形式分为单位点突变、双位点联合突变和三位点联合突变。耐药株突变率为95.83%,且以531位密码子单位点突变为主，占耐药菌株的62.5%。HRM检测结果显示有23株峰型与对照组不一致，判断为耐药株，敏感株61株。以药敏结果为参照，DNA测序法检测菌株利福平耐药性的敏感性为95.83%、特异性为100%,具有高度一致性（Kapaa=0.97）;以药敏结果为参照，HRM检测菌株利福平耐药性的敏感性为83.33%、特异性为95%,具有高度一致性（Kapaa=0.793）;以DNA测序结果为参照，HRM检测出基因突变的敏感性为86.96%,特异性为95.09%,具有高度一致性（Kapaa=0.82）。结论 RpoB基因突变是导致结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因，采用HRM分析法对结核分枝杆菌利福平耐药性进行快速检测具有较高的灵敏性和特异性，可为耐药结核病早期诊断及时合理用药提供理论基础。
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