论文部分内容阅读
摘要该研究用二苯基苦基肼自由基试验法对牯牛降30种主要经济林树木鲜叶提取物的清除DPPH·活性进行了研究，发现供试的树木鲜叶提取物都有一定的清除自由基活性，其中板栗和杨梅等叶子的甲醇提取物清除自由基能力较强，它们对DPPH·的半数清除浓度分别为0.36和0.39 mg/ml。研究还发现不同植物样品的自由基清除能力与样品的浓度都呈明显的正相关，样品浓度越高其自由基清除率越高；不同类经济林树种鲜叶的自由基清除能力没有明显的规律，其中木本干果类、木本水果类、木本油料类、木本香料类等都分别有些高活性和低活性的树种。比较甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性可知，板栗叶中主要活性成分为极性较大的物质，结合相关报道可初步推断可能以鞣质为主；杨梅叶中同时存在极性较大和较小物质，可能以黄酮类物质为主，但具体化合物组成尚需进一步研究。
关键词经济林；清除自由基；1，1二苯基2苦基肼自由基
中图分类号S759.3文献标识码A文章编号0517-6611（2014）21-07067-03
Radical Scavenging Activity Comparison of Extracts from Leaves of Economic Trees—A Case Study of Guniujiang Nature Reserve
BAO Jinfang（Management Committee of Scenic Spots for Guniujiang， Shitai， Anhui 245113）
Abstract A DPPH· assay was employed to test radical scavenging activity of extracts from leaves of economic trees in Guniujiang. The results showed that all extrats tested had radical scavenging activity， and extracts from Castanea mollissima and Myrica rubra had strong free radical scavenging activity. Their IC50 against DPPH radicals were 0.36 and 0.39 mg/ml. Tests showed that the free radical scavenging activities of different plants extracts were different and had positive relationship with their concentration. The scavenging activity differences between the tested economic trees exhibited no obvious rule. Comparison of methanol and ethylacetate extracts from Castanea mollissima revealed that its active constituent was polar compounds which could be deduced as tannins. The active constituents of Myrica rubra were flavones. The specific compounds still need futher research.
Key words Economic tree； Scavenging free radical； 1，1Diphenyl2picrylhydrazyl （DPPH·）
自由基是指含未配对电子的基团、原子或分子。自由基清除剂是指能与自由基反应并使之还原成非自由基化合物的物质。自由基清除剂常常也是抗氧化剂，由于自由基清除剂具有广泛的生理活性，因而其有关研究受到世界各国的重视[1-12]。目前在发达国家，自由基清除剂筛选模型已成为药物开发的常规筛选模型之一。筛选对象已从欧美常见药用植物转移到亚非传统药用植物；由陆生生物转向海洋生物；由常见生物转向稀有生物。目前已发现了大量的自由基清除剂，有些已开发成药品、保健品和化妆品等。已发现的天然自由基清除剂主要包括酶和非酶两大类，酶类如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）等；非酶类如还原性谷胱甘肽、血浆铜蓝蛋白、铁传递蛋白等；其他类如尿酸、胆红素、辅酶Q-10、硒等；外源性小分子化合物类如抗坏血酸、生育酚、胡萝卜素、多酚类化合物、黄酮及类黄酮、甙类、生物碱及含氮杂环类、苯丙素类、萜类等[13-27]。其中大部分小分子自由基清除剂都是用DPPH·等法筛选出来。另外还有大量有关蔬菜、药材等粗提物对DPPH有机自由基清除活性的一般比较研究。由于小分子化合物的产生常常涉及到多步生化反应，涉及多个酶系，它们一般受多基因控制，目前还难以用分子生物学的手段进行构建和生产，因此从天然植物中筛选仍必不可少。
该研究以经济林树种为研究对象，分析树木鲜叶提取物的清除DPPH自由基活性，以期为经济林树种的选择及应用提供一定的参考资料。
1材料与方法
1.1供试材料
1.1.1植物样品。供试样品为2012年6月采自安徽石台牯牛降30种主要经济林树木鲜叶。样品为成熟的新叶。
1.1.2化学药品。1，1二苯基2苦基肼自由基（DPPH·）从Sigma公司购买；水为膜过滤纯净水；溶剂甲醇为国产分析纯。
1.1.3主要仪器。Spectra Max M2全波长扫描酶标仪（美国Molecular Device公司）；KH5200数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器公司）；AE200梅特勒电子天平（上海分析仪器厂）。 1.2试验方法
（3）不同树种的自由基清除能力相差很大，但不同类经济林树种鲜叶的自由基清除能力没有明显的规律，其中木本干果类、木本水果类、木本油料类、木本香料类等都分别有些高活性和低活性的树种。
（4）比较甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性可知，板栗叶中主要活性成分为极性较大的物质，结合相关报道可初步推断可能以鞣质为主；杨梅叶中同时存在极性较大和较小的物质，可能以黄酮类物质为主，但具体化合物组成尚需进一步研究。
参考文献
[1] CATELLE N.Antioxidant propecties of Hydroxyflavones [J].Free Radical Biology & Medicine，1996，20（1）：35-43.
[2] CHUNG K T，WONG T Y，WEI C I，et al.Tannins and human health：a review [J].Trends Food Sci Technol，1998（9）：168.
[3] COTELLE J A，BERNIER J L，CATTEAU J B，et al.Antioxidant properties of hydroxyflavones[J].Free Rad Biol Med，1996，20：35.
[4] HATANO T，OGAWA A N，AKIRA R，et al.Tannins of Cornaceous plants.I.Cornusiins A，B and C，dimeric monomeric and trimeric hydrolyzable tannins from Cornus officinalis，and orientation of valoneoyl group in related tannins[J].Chem Pharm Bull，1989，37（8）：1083-1090.
[5] HIRANO R.Antioxidant ability of various flavonoids against DPPH radicals and LDL oxidation[J].J Nutr Sci Vitaminol，2001，47（5）：357-362.
[6] HU F L，HAMBURGER M，LI Z Z.Radical scavengers from the entomogenous deuteromycete Beauveria amorpha[J].Planta Medica，2002，68：64-66.
[7] MANGURO L O，MIDIWO J O，KRAUS W.Phenolics of Moringa oleifera leaves[J].Nat Prod Res，2007，21（1）：56-68.
[8] NANJO F.Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].Free Radic Biol Med，1996，21（6）：895-902.
[9] RIEDL K M，HAGERMAN A E.Tanninprotein complexes as radical scavengers and radical sinks[J].J Agric Food Chem，2001，49（10）：4917-4923.
[10] STEFFEN Y，GRUBER C，SCHEWE T，et al.MonoOmethylated flavanols and other flavonoids as inhibitors of endothelial NADPH oxidase[J].Arch Biochem Biophys，2008，469（2）：209-219.
[11] TAKAKO Y.In vitro and in vivo studies on the radical scavengering activity of tea[J].J Agric Food Chem，1998，46：2143-2150.
[12] YOKOZAWA T.Study on the inhibitory effect of tannins and flavonoids against the 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].BiochenPharmacol，1998，56（2）：213-222.
[13] 方允中，郑荣梁.自由基生物学的理论与应用[M].北京：科学出版社，2002.
[14] 高永贵.茶叶抗氧化剂的制备方法综述[J].茶叶，1996，22（2）：44-47.
[15] 郭长江，韦京豫，葛玉章，等.坚果类食物清除ROO·的作用[J].食品科学，2000，21（1）：42-43.
[16] 郭剑利.从自由基学说看水果蔬菜的抗衰老作用[J].卫生研究，1999，28（3）：190-192.
[17] 郝晓丽，许申鸿，杭瑚，等.用两种方法评价四种食品抗氧化剂的抗氧化活性[J].食品科学，2003，24（2）：23-26.
[18] 胡丰林，陆瑞利.尼日利亚螫毛果（Cnestis ferruginca）中一种具有清除自由基活性的次生代谢产物的制备和结构鉴定[J].武汉植物学研究，2000，20（4）：311-316.
[19] 林植芳，彭长连，林桂珠.兼性CAM植物长叶景天叶片在C3和CAM型时的光氧化作用[J].植物学报，2003，45（3）：301-306.
[20] 卢大用，陈恩鸿.自由基在生物体内的功能和抑制剂[J].生物学杂志，1999，16（3）：48.
[21] 孟洁，杭瑚.柯子抗氧化作用的研究[J].食品科学，2000，21（2）：9-12.
[22] 唐霖，张莉静，王明谦.杨梅中活性成分杨梅素的研究进展[J].中成药，2006，28（1）：121-122.
[23] 石阶平，韩雅珊，蒋修学.桂皮抗氧化成分的研究[J].食品与发酵工业，1995（2）：36-39.
[24] 彭长连，陈少薇，林植芳.用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力[J].生物化学与生物物理进展，2000，27（6）：658-661.
[25] 孙存普，张建中，段绍瑾.自由基生物学导论[M].合肥：中国科学技术大学出版社，1999.
[26] 肖纯，张凯农.茶内含物抗氧化作用机理的研究概况[J].福建茶叶，1994（2）：39-41.
[27] 郑荣梁.自由基医学与农学基础[M].北京：原子能出版社，2001.
关键词经济林；清除自由基；1，1二苯基2苦基肼自由基
中图分类号S759.3文献标识码A文章编号0517-6611（2014）21-07067-03
Radical Scavenging Activity Comparison of Extracts from Leaves of Economic Trees—A Case Study of Guniujiang Nature Reserve
BAO Jinfang（Management Committee of Scenic Spots for Guniujiang， Shitai， Anhui 245113）
Abstract A DPPH· assay was employed to test radical scavenging activity of extracts from leaves of economic trees in Guniujiang. The results showed that all extrats tested had radical scavenging activity， and extracts from Castanea mollissima and Myrica rubra had strong free radical scavenging activity. Their IC50 against DPPH radicals were 0.36 and 0.39 mg/ml. Tests showed that the free radical scavenging activities of different plants extracts were different and had positive relationship with their concentration. The scavenging activity differences between the tested economic trees exhibited no obvious rule. Comparison of methanol and ethylacetate extracts from Castanea mollissima revealed that its active constituent was polar compounds which could be deduced as tannins. The active constituents of Myrica rubra were flavones. The specific compounds still need futher research.
Key words Economic tree； Scavenging free radical； 1，1Diphenyl2picrylhydrazyl （DPPH·）
自由基是指含未配对电子的基团、原子或分子。自由基清除剂是指能与自由基反应并使之还原成非自由基化合物的物质。自由基清除剂常常也是抗氧化剂，由于自由基清除剂具有广泛的生理活性，因而其有关研究受到世界各国的重视[1-12]。目前在发达国家，自由基清除剂筛选模型已成为药物开发的常规筛选模型之一。筛选对象已从欧美常见药用植物转移到亚非传统药用植物；由陆生生物转向海洋生物；由常见生物转向稀有生物。目前已发现了大量的自由基清除剂，有些已开发成药品、保健品和化妆品等。已发现的天然自由基清除剂主要包括酶和非酶两大类，酶类如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）等；非酶类如还原性谷胱甘肽、血浆铜蓝蛋白、铁传递蛋白等；其他类如尿酸、胆红素、辅酶Q-10、硒等；外源性小分子化合物类如抗坏血酸、生育酚、胡萝卜素、多酚类化合物、黄酮及类黄酮、甙类、生物碱及含氮杂环类、苯丙素类、萜类等[13-27]。其中大部分小分子自由基清除剂都是用DPPH·等法筛选出来。另外还有大量有关蔬菜、药材等粗提物对DPPH有机自由基清除活性的一般比较研究。由于小分子化合物的产生常常涉及到多步生化反应，涉及多个酶系，它们一般受多基因控制，目前还难以用分子生物学的手段进行构建和生产，因此从天然植物中筛选仍必不可少。
该研究以经济林树种为研究对象，分析树木鲜叶提取物的清除DPPH自由基活性，以期为经济林树种的选择及应用提供一定的参考资料。
1材料与方法
1.1供试材料
1.1.1植物样品。供试样品为2012年6月采自安徽石台牯牛降30种主要经济林树木鲜叶。样品为成熟的新叶。
1.1.2化学药品。1，1二苯基2苦基肼自由基（DPPH·）从Sigma公司购买；水为膜过滤纯净水；溶剂甲醇为国产分析纯。
1.1.3主要仪器。Spectra Max M2全波长扫描酶标仪（美国Molecular Device公司）；KH5200数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器公司）；AE200梅特勒电子天平（上海分析仪器厂）。 1.2试验方法
（3）不同树种的自由基清除能力相差很大，但不同类经济林树种鲜叶的自由基清除能力没有明显的规律，其中木本干果类、木本水果类、木本油料类、木本香料类等都分别有些高活性和低活性的树种。
（4）比较甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性可知，板栗叶中主要活性成分为极性较大的物质，结合相关报道可初步推断可能以鞣质为主；杨梅叶中同时存在极性较大和较小的物质，可能以黄酮类物质为主，但具体化合物组成尚需进一步研究。
参考文献
[1] CATELLE N.Antioxidant propecties of Hydroxyflavones [J].Free Radical Biology & Medicine，1996，20（1）：35-43.
[2] CHUNG K T，WONG T Y，WEI C I，et al.Tannins and human health：a review [J].Trends Food Sci Technol，1998（9）：168.
[3] COTELLE J A，BERNIER J L，CATTEAU J B，et al.Antioxidant properties of hydroxyflavones[J].Free Rad Biol Med，1996，20：35.
[4] HATANO T，OGAWA A N，AKIRA R，et al.Tannins of Cornaceous plants.I.Cornusiins A，B and C，dimeric monomeric and trimeric hydrolyzable tannins from Cornus officinalis，and orientation of valoneoyl group in related tannins[J].Chem Pharm Bull，1989，37（8）：1083-1090.
[5] HIRANO R.Antioxidant ability of various flavonoids against DPPH radicals and LDL oxidation[J].J Nutr Sci Vitaminol，2001，47（5）：357-362.
[6] HU F L，HAMBURGER M，LI Z Z.Radical scavengers from the entomogenous deuteromycete Beauveria amorpha[J].Planta Medica，2002，68：64-66.
[7] MANGURO L O，MIDIWO J O，KRAUS W.Phenolics of Moringa oleifera leaves[J].Nat Prod Res，2007，21（1）：56-68.
[8] NANJO F.Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].Free Radic Biol Med，1996，21（6）：895-902.
[9] RIEDL K M，HAGERMAN A E.Tanninprotein complexes as radical scavengers and radical sinks[J].J Agric Food Chem，2001，49（10）：4917-4923.
[10] STEFFEN Y，GRUBER C，SCHEWE T，et al.MonoOmethylated flavanols and other flavonoids as inhibitors of endothelial NADPH oxidase[J].Arch Biochem Biophys，2008，469（2）：209-219.
[11] TAKAKO Y.In vitro and in vivo studies on the radical scavengering activity of tea[J].J Agric Food Chem，1998，46：2143-2150.
[12] YOKOZAWA T.Study on the inhibitory effect of tannins and flavonoids against the 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].BiochenPharmacol，1998，56（2）：213-222.
[13] 方允中，郑荣梁.自由基生物学的理论与应用[M].北京：科学出版社，2002.
[14] 高永贵.茶叶抗氧化剂的制备方法综述[J].茶叶，1996，22（2）：44-47.
[15] 郭长江，韦京豫，葛玉章，等.坚果类食物清除ROO·的作用[J].食品科学，2000，21（1）：42-43.
[16] 郭剑利.从自由基学说看水果蔬菜的抗衰老作用[J].卫生研究，1999，28（3）：190-192.
[17] 郝晓丽，许申鸿，杭瑚，等.用两种方法评价四种食品抗氧化剂的抗氧化活性[J].食品科学，2003，24（2）：23-26.
[18] 胡丰林，陆瑞利.尼日利亚螫毛果（Cnestis ferruginca）中一种具有清除自由基活性的次生代谢产物的制备和结构鉴定[J].武汉植物学研究，2000，20（4）：311-316.
[19] 林植芳，彭长连，林桂珠.兼性CAM植物长叶景天叶片在C3和CAM型时的光氧化作用[J].植物学报，2003，45（3）：301-306.
[20] 卢大用，陈恩鸿.自由基在生物体内的功能和抑制剂[J].生物学杂志，1999，16（3）：48.
[21] 孟洁，杭瑚.柯子抗氧化作用的研究[J].食品科学，2000，21（2）：9-12.
[22] 唐霖，张莉静，王明谦.杨梅中活性成分杨梅素的研究进展[J].中成药，2006，28（1）：121-122.
[23] 石阶平，韩雅珊，蒋修学.桂皮抗氧化成分的研究[J].食品与发酵工业，1995（2）：36-39.
[24] 彭长连，陈少薇，林植芳.用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力[J].生物化学与生物物理进展，2000，27（6）：658-661.
[25] 孙存普，张建中，段绍瑾.自由基生物学导论[M].合肥：中国科学技术大学出版社，1999.
[26] 肖纯，张凯农.茶内含物抗氧化作用机理的研究概况[J].福建茶叶，1994（2）：39-41.
[27] 郑荣梁.自由基医学与农学基础[M].北京：原子能出版社，2001.