论文部分内容阅读
【摘要】目的：建立用HPLC法测定跌打生骨胶囊中丹参酮ⅡA的含量及含量均匀度的方法。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（46×250mm，5μm），以甲醇-水（80∶[KG-*2]20）为流动相；柱温为室温，流速为1ml/min，检测波长为270nm，进样量为20μl。结果：以丹参酮ⅡA对照品的进样量为横坐标，丹参酮ⅡA对照品峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=278×106C-143×104 r=10000，结果表明丹参酮ⅡA在进样量3011～6627μg/ml范围内线性关系良好。结论：该方法简便、准确，可用于跌打生骨胶囊中丹参酮ⅡA的质量控制。
【关键词】丹参酮ⅡA；跌打生骨胶囊；HPLC；含量测定
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）12-0012-02
Abstract：ObjectiveTo establish method for determining the content and uniformity of tanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules by HPLC.MethodsThe Agilent Eclipse XDB-C18（46×250mm， 5μm） was used and mobile phase was methanol： water （80∶[KG-*2]20）， and its temperature was used at room temperature， with the flow rate of 10ml/min and the wavelength of detection of 270 nm， and the injection amount of 20μl.ResultsTanshinonellⅡA maleat showed a good linear relationship in the range of 3011-6627μg/ml， Y=278×106C-143×104 r=10000.ConclusionsThe method is simple， accurate， and can be used to determine the content assaying of TanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules.
Keywords：
跌打生骨胶囊由卫生部药品标准中药成方制剂跌打生骨片改剂而成的胶囊，是由战骨、肿节风、自然铜、丹参、延胡索、牛膝、杜仲等七味药组成的复方制剂，具有活血祛瘀、消肿止痛、强筋健骨的功效，用于骨折等症。为控制跌打生骨胶囊质量，保证药品的安全、有效，本文采用HPLC法测定了丹参中主要成份丹参酮ⅡA的含量及含量均匀度。
1仪器与试药
LC-10AP型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-10Avp紫外-可见检测器；LC-10ATVP7725（i）型手动进样器；威玛龙色谱数据工作站；Aglient 8456紫外可见分光光度计；kh-250db型超声处理器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
丹参酮ⅡA（批号：100047-201001，中国药品生物制品检定所）；跌打生骨胶囊（购自A厂，共10批）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（46×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：1ml/min；检测波长：270nm；柱温：室温；进样量：20μl，理论塔板数按丹参酮Ⅱ峰计算不低于5000。在上述色谱条件下，供试品中丹参酮Ⅱ能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠。
22对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含丹参酮ⅡA16μg）。精密称取绿原酸对照品1048mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液。精密量取该液5ml加甲醇稀释至25ml，制成每1ml约含20μg的溶液，即得。
23供试品溶液的制备避光操作。取本品装量差异项下的内容物，研细，取约075g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，通过已处理好的中性氧化铝柱（100～200目，3g，内径8～10mm），再用甲醇20ml洗脱，合并洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（045μm）滤过，即得。
取本品10包，研细，精密称定，称取适量（约相当028g），置50ml的容量瓶中，加入甲醇约35ml，超声处理30分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定，根据丹参酮ⅡA面积，以外标法计算供试品中丹参酮ⅡA含量。
25线性关系考察精密称密量取丹参酮ⅡA对照品1182mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精取1、2、5、2、3、4ml，分别加甲醇稀释至50、50、50、10、10、10ml，分别精密吸取上述对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按拟定的条件测定。以丹参酮ⅡA对照品的进样量为横坐标，丹参酮ⅡA对照品峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=269×106C-143×104，r=10000，结果表明丹参酮ⅡA在进样量3011～6627μg/ml范围内线性关系良好。
26精密度试验取供试品溶液（批号20100601），连续进样6次，测定丹参酮ⅡA的峰面积。6次测定结果RSD为038%（n=6），表明仪器精密度良好。
27稳定性试验精密吸取供试品溶液（批号：20100602）10μl，分别于0、4、8、12、24小时进行测定，其峰面积RSD为045%，表明供试品溶液在24h内稳定。
28阴性对照试验按处方比例制成缺丹参的阴性样品，按上述供试品制备方法制成缺丹参阴性溶液。按上述色谱条件进行测定，结果在丹参酮ⅡA出峰位置无其它干扰峰，表明处方中其它成分对测定无干扰。
29重复性试验取样品（批号：20100602）按样品溶液制备项下的方法制备供试品溶液6份，进样20μl，按上述色谱条件测定，计算含量，求得丹参酮ⅡA平均含量为1677 mg/g，RSD为135%（n=6），表明重复性良好。
210加样回收率试验采用加样回收试验的方法。取20100601批供试品，研细，备用。精密称取上述细粉约0375g共9份，置具塞锥形瓶中，依次精密加入丹参酮ⅡA对照品溶液（2403μg/ml）3、3、3、5、5、5、7、7、7ml，再依次精密加入甲醇的溶液27、27、27、25、25、25、23、23、23ml，密塞，称定重量，照上述测定法测定丹参酮ⅡA的含量，计算回收率。由表1可得，本方法测定丹参酮ⅡA的含量准确度高。
3讨论
31波长的选择依据《中国药典》2010年版一部，丹参酮ⅡA在本品中270nm[1]有最大吸收波长；故选择270nm作为本品的检验波长。
32流动相的选择本品为复方制剂，含有多种成分，杂质组分较多，曾采用甲醇-水（85∶[KG-*2]15）[2]作为流动相，但分离效果不理想，后采用甲醇-水（80∶[KG-*2]20）作为流动相，结果表明丹参酮ⅡA的峰型和分离度较好。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]谭生建，陈培让，王建社，等.RP-HPLC法测定抗栓保心片中丹参酮ⅡA的含量[J].中国中药杂志，1999，24（3）：154.
（收稿日期：20140325）
【关键词】丹参酮ⅡA；跌打生骨胶囊；HPLC；含量测定
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）12-0012-02
Abstract：ObjectiveTo establish method for determining the content and uniformity of tanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules by HPLC.MethodsThe Agilent Eclipse XDB-C18（46×250mm， 5μm） was used and mobile phase was methanol： water （80∶[KG-*2]20）， and its temperature was used at room temperature， with the flow rate of 10ml/min and the wavelength of detection of 270 nm， and the injection amount of 20μl.ResultsTanshinonellⅡA maleat showed a good linear relationship in the range of 3011-6627μg/ml， Y=278×106C-143×104 r=10000.ConclusionsThe method is simple， accurate， and can be used to determine the content assaying of TanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules.
Keywords：
跌打生骨胶囊由卫生部药品标准中药成方制剂跌打生骨片改剂而成的胶囊，是由战骨、肿节风、自然铜、丹参、延胡索、牛膝、杜仲等七味药组成的复方制剂，具有活血祛瘀、消肿止痛、强筋健骨的功效，用于骨折等症。为控制跌打生骨胶囊质量，保证药品的安全、有效，本文采用HPLC法测定了丹参中主要成份丹参酮ⅡA的含量及含量均匀度。
1仪器与试药
LC-10AP型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-10Avp紫外-可见检测器；LC-10ATVP7725（i）型手动进样器；威玛龙色谱数据工作站；Aglient 8456紫外可见分光光度计；kh-250db型超声处理器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
丹参酮ⅡA（批号：100047-201001，中国药品生物制品检定所）；跌打生骨胶囊（购自A厂，共10批）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（46×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：1ml/min；检测波长：270nm；柱温：室温；进样量：20μl，理论塔板数按丹参酮Ⅱ峰计算不低于5000。在上述色谱条件下，供试品中丹参酮Ⅱ能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠。
22对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含丹参酮ⅡA16μg）。精密称取绿原酸对照品1048mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液。精密量取该液5ml加甲醇稀释至25ml，制成每1ml约含20μg的溶液，即得。
23供试品溶液的制备避光操作。取本品装量差异项下的内容物，研细，取约075g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，通过已处理好的中性氧化铝柱（100～200目，3g，内径8～10mm），再用甲醇20ml洗脱，合并洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（045μm）滤过，即得。
取本品10包，研细，精密称定，称取适量（约相当028g），置50ml的容量瓶中，加入甲醇约35ml，超声处理30分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定，根据丹参酮ⅡA面积，以外标法计算供试品中丹参酮ⅡA含量。
25线性关系考察精密称密量取丹参酮ⅡA对照品1182mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精取1、2、5、2、3、4ml，分别加甲醇稀释至50、50、50、10、10、10ml，分别精密吸取上述对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按拟定的条件测定。以丹参酮ⅡA对照品的进样量为横坐标，丹参酮ⅡA对照品峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=269×106C-143×104，r=10000，结果表明丹参酮ⅡA在进样量3011～6627μg/ml范围内线性关系良好。
26精密度试验取供试品溶液（批号20100601），连续进样6次，测定丹参酮ⅡA的峰面积。6次测定结果RSD为038%（n=6），表明仪器精密度良好。
27稳定性试验精密吸取供试品溶液（批号：20100602）10μl，分别于0、4、8、12、24小时进行测定，其峰面积RSD为045%，表明供试品溶液在24h内稳定。
28阴性对照试验按处方比例制成缺丹参的阴性样品，按上述供试品制备方法制成缺丹参阴性溶液。按上述色谱条件进行测定，结果在丹参酮ⅡA出峰位置无其它干扰峰，表明处方中其它成分对测定无干扰。
29重复性试验取样品（批号：20100602）按样品溶液制备项下的方法制备供试品溶液6份，进样20μl，按上述色谱条件测定，计算含量，求得丹参酮ⅡA平均含量为1677 mg/g，RSD为135%（n=6），表明重复性良好。
210加样回收率试验采用加样回收试验的方法。取20100601批供试品，研细，备用。精密称取上述细粉约0375g共9份，置具塞锥形瓶中，依次精密加入丹参酮ⅡA对照品溶液（2403μg/ml）3、3、3、5、5、5、7、7、7ml，再依次精密加入甲醇的溶液27、27、27、25、25、25、23、23、23ml，密塞，称定重量，照上述测定法测定丹参酮ⅡA的含量，计算回收率。由表1可得，本方法测定丹参酮ⅡA的含量准确度高。
3讨论
31波长的选择依据《中国药典》2010年版一部，丹参酮ⅡA在本品中270nm[1]有最大吸收波长；故选择270nm作为本品的检验波长。
32流动相的选择本品为复方制剂，含有多种成分，杂质组分较多，曾采用甲醇-水（85∶[KG-*2]15）[2]作为流动相，但分离效果不理想，后采用甲醇-水（80∶[KG-*2]20）作为流动相，结果表明丹参酮ⅡA的峰型和分离度较好。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]谭生建，陈培让，王建社，等.RP-HPLC法测定抗栓保心片中丹参酮ⅡA的含量[J].中国中药杂志，1999，24（3）：154.
（收稿日期：20140325）