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摘 要：探讨不同提取方法和提取条件对葛根中葛根素提取率的影响，找到葛根素的最佳提取方法和条件，为葛根素产品的生产提供理论基础。研究表明：1.在4种提取方法中，醇加热回流法是最佳的葛根素提取方法；2.比较不同的提取条件，葛根素提取的最佳实验条件为：乙醇体积分数为60%，提取温度为80℃，提取时间为60min，料液比为1：8，提取次数为3次。
关键词：葛根；葛根素；提取率
中图分类号：R965
文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2013）05-0062-02
葛根（Pueraria DC）又名葛藤、野葛、粉葛等，是豆科多年生木质藤本植物，产我国南北各地，除新疆、青海及西藏外，分布全国。其中野葛（Pueraria lobata Willd.Ohwi）有很好的生津止渴、解表退热、止泻的功能。葛根中含有淀粉、人体必需的13种氨基酸（包括赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、等）、微量元素（锌、锗、铁、硒、钙等）和黄酮类物质（包括黄豆苷元、黄豆苷、葛根素、等）。其中葛根素具有降血压、降血糖、促进心脑血管流动、抗氧化、解酒、解热、增强机体免疫力和提高学习记忆力等功能，有极高的研究开发价值。本文以葛根为原料，通过比较不同的提取方法和提取条件对葛根中葛根素提取的影响，找到提取葛根素的最佳提取方法和提取条件，提高现有方法的提取效率，为葛根素产品的生产提供最佳方法，为更好的控制葛根药材的质量提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 实验仪器 戴安U3000高效液相色谱仪，Welch materials C18色谱柱（5 μm，4.6×250 mm），电子天平（Startorius），去离子水制备系统（ELGA 公司），电子分析天平（METTLERTOLEDO），超声波清洗仪（上海声源超声波仪器设备），旋转蒸发仪R-215（B CHI），水浴锅（余姚市亚星仪器仪表有限公司），Research纯水仪（上海和泰仪器有限公司）。
1.2 实验材料 葛根样品，采购于云南省菊花村药材市场。葛根素标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110752-200912），甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯，水为超纯水。
2 实验方法
2.1 葛根素的检测条件 色谱条件：色谱柱：Kromasil ODS（4.6 mm×250 mm，5μm（Wasters））；流动相：甲醇-水（体积比：38∶72）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：250 nm；进样量：20 μL
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品10 mg，用30%乙醇溶液溶解，定容到10 mL的容量瓶中，得1 mg/mL的葛根素标准溶液。
标准曲线的绘制：精密吸取葛根素对照品标准溶液1，2.5，5，10，20 μL，在上述色谱条件下依次进样，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，葛根素含量（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=64.604X-0.2211（R2=0.9998，n=5），葛根素检测含量在1～20 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
2.2 提取方法
2.2.1 水加热回流提取 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，水加热回流提取3 次，溶剂用量为40 mL，提取时间为1 h，抽滤，合并3次滤液。
2.2.2 乙醇加热回流提取 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂加热回流提取3 次，溶液用量分别为40 mL，提取时间分别为1 h。抽滤，合并3 次滤液。
2.2.3 渗漉法提取 称取葛根药材（粉碎后过20目筛）10 g，60%乙醇作为渗漉溶剂（用量为药材干质量的20倍），以2.0 mL/min 的体积流量渗漉24 h，收集渗漉液。
2.2.4 超临界CO2流体萃取法提取 称取葛根药材（粉碎后过40 目筛）150 g投入萃取釜中，95%乙醇作为夹带剂，分别对萃取釜、分离釜进行加热，使萃取温度为40 ℃，分离釜温度为45℃，压力为25MPa。当温度达到要求时开启CO2钢瓶，通过加压泵对系统加压，静态提取1 h，CO2循环提取1 h，收集并合并萃取液。
2.3 提取条件
2.3.1 不同提取溶剂 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，10、20、30、40、50、60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，加热回流提取3 次，提取时间分别为1 h。抽滤，合并3次滤液。
2.3.2 提取温度 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，水浴加热，温度分别为40、50、60、70、80℃，提取时间为2 h，提取3次，抽滤，合并3 次滤液。
2.3.3 提取时间 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，水浴加热，温度分别为80℃，提取时间为15、30、60、120 min，提取3次，抽滤，合并3次滤液。
2.3.4 提取溶剂 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为20、30、40、50 mL，水浴加热，温度分别为80℃，提取时间为1 h，提取3次，抽滤，合并3 次滤液。
3 结果与讨论
3.1 不同提取方法对葛根素纯度、提取率、出膏率的影响
本实验通过高效液相色色谱法研究不同提取方法对葛根中葛根素的纯度、提取率、出膏率的影响，结果发现用超临界CO2流体萃取法提取的葛根素总量和纯度高于其他提取方法，但转移率和出膏率很低，可见在提取过程中，造成了大量损失。而醇加热回流提取法的葛根素总量、纯度仅次于超临界CO2流体萃取法，提取效果第二，且转移率和出膏率为4种方法中最高的，综合考虑，醇加热回流法是以上四种葛根素的提取方法中最佳的一种，值得推广应用，见表1。
3.2 不同提取条件对葛根素的含量、纯度和提取率的影响
根据不同提取方法的结果，本实验利用醇加热法，研究不同提取条件对葛根中葛根素的含量、纯度和提取率的影响。从结果可知，乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比及提取次数对葛根中葛根素的含量、纯度及提取率均有影响，根据实验结果可以确定葛根中葛根素提取的最佳实验条件为：乙醇体积分数为60%，提取温度为80℃，提取时间为60 min，料液比为1∶8，提取次数为3次。见图1～5。
（收稿日期：2013-03-12）
关键词：葛根；葛根素；提取率
中图分类号：R965
文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2013）05-0062-02
葛根（Pueraria DC）又名葛藤、野葛、粉葛等，是豆科多年生木质藤本植物，产我国南北各地，除新疆、青海及西藏外，分布全国。其中野葛（Pueraria lobata Willd.Ohwi）有很好的生津止渴、解表退热、止泻的功能。葛根中含有淀粉、人体必需的13种氨基酸（包括赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、等）、微量元素（锌、锗、铁、硒、钙等）和黄酮类物质（包括黄豆苷元、黄豆苷、葛根素、等）。其中葛根素具有降血压、降血糖、促进心脑血管流动、抗氧化、解酒、解热、增强机体免疫力和提高学习记忆力等功能，有极高的研究开发价值。本文以葛根为原料，通过比较不同的提取方法和提取条件对葛根中葛根素提取的影响，找到提取葛根素的最佳提取方法和提取条件，提高现有方法的提取效率，为葛根素产品的生产提供最佳方法，为更好的控制葛根药材的质量提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 实验仪器 戴安U3000高效液相色谱仪，Welch materials C18色谱柱（5 μm，4.6×250 mm），电子天平（Startorius），去离子水制备系统（ELGA 公司），电子分析天平（METTLERTOLEDO），超声波清洗仪（上海声源超声波仪器设备），旋转蒸发仪R-215（B CHI），水浴锅（余姚市亚星仪器仪表有限公司），Research纯水仪（上海和泰仪器有限公司）。
1.2 实验材料 葛根样品，采购于云南省菊花村药材市场。葛根素标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110752-200912），甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯，水为超纯水。
2 实验方法
2.1 葛根素的检测条件 色谱条件：色谱柱：Kromasil ODS（4.6 mm×250 mm，5μm（Wasters））；流动相：甲醇-水（体积比：38∶72）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：250 nm；进样量：20 μL
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品10 mg，用30%乙醇溶液溶解，定容到10 mL的容量瓶中，得1 mg/mL的葛根素标准溶液。
标准曲线的绘制：精密吸取葛根素对照品标准溶液1，2.5，5，10，20 μL，在上述色谱条件下依次进样，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，葛根素含量（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=64.604X-0.2211（R2=0.9998，n=5），葛根素检测含量在1～20 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
2.2 提取方法
2.2.1 水加热回流提取 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，水加热回流提取3 次，溶剂用量为40 mL，提取时间为1 h，抽滤，合并3次滤液。
2.2.2 乙醇加热回流提取 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂加热回流提取3 次，溶液用量分别为40 mL，提取时间分别为1 h。抽滤，合并3 次滤液。
2.2.3 渗漉法提取 称取葛根药材（粉碎后过20目筛）10 g，60%乙醇作为渗漉溶剂（用量为药材干质量的20倍），以2.0 mL/min 的体积流量渗漉24 h，收集渗漉液。
2.2.4 超临界CO2流体萃取法提取 称取葛根药材（粉碎后过40 目筛）150 g投入萃取釜中，95%乙醇作为夹带剂，分别对萃取釜、分离釜进行加热，使萃取温度为40 ℃，分离釜温度为45℃，压力为25MPa。当温度达到要求时开启CO2钢瓶，通过加压泵对系统加压，静态提取1 h，CO2循环提取1 h，收集并合并萃取液。
2.3 提取条件
2.3.1 不同提取溶剂 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，10、20、30、40、50、60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，加热回流提取3 次，提取时间分别为1 h。抽滤，合并3次滤液。
2.3.2 提取温度 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，水浴加热，温度分别为40、50、60、70、80℃，提取时间为2 h，提取3次，抽滤，合并3 次滤液。
2.3.3 提取时间 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为40 mL，水浴加热，温度分别为80℃，提取时间为15、30、60、120 min，提取3次，抽滤，合并3次滤液。
2.3.4 提取溶剂 称取葛根药材10 g，置于圆底烧瓶中，60%乙醇为溶剂，溶剂用量为20、30、40、50 mL，水浴加热，温度分别为80℃，提取时间为1 h，提取3次，抽滤，合并3 次滤液。
3 结果与讨论
3.1 不同提取方法对葛根素纯度、提取率、出膏率的影响
本实验通过高效液相色色谱法研究不同提取方法对葛根中葛根素的纯度、提取率、出膏率的影响，结果发现用超临界CO2流体萃取法提取的葛根素总量和纯度高于其他提取方法，但转移率和出膏率很低，可见在提取过程中，造成了大量损失。而醇加热回流提取法的葛根素总量、纯度仅次于超临界CO2流体萃取法，提取效果第二，且转移率和出膏率为4种方法中最高的，综合考虑，醇加热回流法是以上四种葛根素的提取方法中最佳的一种，值得推广应用，见表1。
3.2 不同提取条件对葛根素的含量、纯度和提取率的影响
根据不同提取方法的结果，本实验利用醇加热法，研究不同提取条件对葛根中葛根素的含量、纯度和提取率的影响。从结果可知，乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比及提取次数对葛根中葛根素的含量、纯度及提取率均有影响，根据实验结果可以确定葛根中葛根素提取的最佳实验条件为：乙醇体积分数为60%，提取温度为80℃，提取时间为60 min，料液比为1∶8，提取次数为3次。见图1～5。
（收稿日期：2013-03-12）