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摘 要：目的：探讨种植体龈沟液菌落培养能否早期诊断种植体周围炎。方法：提取91例种植患者在戴牙后的龈沟液，在兼性厌氧环境下培养48小时，对菌落计数及革兰氏染色。结果：91例患者龈沟液菌落培养，其中7例患者菌落染色为革兰氏染色阴性菌，这5例患者相继在5个月到12个月期间出现了种植体周围炎的症状。结论：种植体龈沟液菌落培养可以对种植体周围炎进行初步早期诊断。
关键词：种植体周围炎；早期诊断；菌落培养
种植体周围炎是发生在种植体周围组织的炎症， 造成种植体周围骨组织浅碟状的损害，最终使种植体松动脱落。国内外研究表明种植体周围炎是导致种植体失败的最主要原因之一[1、2]。临床上对其主要的诊断方法包括影像学检查、种植体龈沟探诊、种植体牙龈出血指数检查及种植体动度检测等，但这些方法在确诊种植体周围炎时种植体周围往往已经有大量骨吸收，使得治疗效果欠佳。因此若能早期诊断种植体周围炎，临床意义十分重大。
1对象与方法
1.1研究对象
2013年5月至2014年1月对十堰市东风口腔医院修复科完成种植修复的91例患者进行定期复查。其中男性52例，女性39例。研究对象纳入标准：（1）身体健康，无糖尿病等其他系统性疾病及牙周病，非妊娠哺乳期妇女（2）观察期间未服用抗生素和免疫抑制剂。（3）观察期间认真刷牙，但未进行专业口腔洁治护理。（4）口腔卫生状况良好。
1.2研究方法
91列患者种植戴牙时取种植体周围龈沟液在厌氧环境下进行细菌培养，并进行临床检查包括：种植体探诊深度，牙龈探诊出血指数及影像学检查（X线片）。1.3.6个月分三个阶段进行细菌培养和临床检查。
1.2.1采用自身前后对照 测定戴牙当天、3个月、6个月不同时期龈沟液中菌群变化情况，前后进行对照；
1.2.1标本的采集和处理
（1）对标本瓶和微量加样器枪头进行高温灭菌；
（2）于标本瓶注入100ul的生理盐水，密闭瓶口；
（3）采集标本前患者用生理盐水漱口2次，用无菌吸潮纸尖浸入种植体龈沟内采集标本，每个牙位取六个点（颊舌侧近中、正中、远中）；
（4）将采集的标本装入密闭的含有生理盐水的标本瓶中，立即送往实验室；
（5）在超净台上将采集的标本接种在牛心脑浸汁血琼脂含维生素K（简称BHI-S培养基）培养皿表面，用涂布棒将其均匀涂布于培养皿表面；
1.2.3细菌的培养和鉴定
（1）将已接种的BHI-S培养基和厌氧发生剂同时放入厌氧袋（日本三菱）中；
（2）厌氧袋放入到恒温箱中厌氧环境下37℃培养48小时；
（3）进行革兰氏染色并在显微镜下观察菌落着色情况和形态；
1.3.1在提取龈沟液后进行临床检查，记录种植体颊舌向近中、远中、正中六个点探诊深度、牙龈出血情况。对探诊出血的患者摄X线片，确定种植体周围牙槽骨是否吸收。
2结果
91例患者其中8例患者下菌落着色为红色。这7例患者戴牙5个月到12个月出现了种植体周围炎的症状，通过革兰染色发现这7例患者龈下菌群主要为核酸杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普氏菌。随着时间的延长G-厌氧菌逐渐的增多。核酸杆菌的形态为具核梭杆菌菌落直径1-2mm，突起垫状，半透明，有恶臭味，通过斜射光线菌落有斑点。牙龈卟啉单胞菌菌落：在血琼脂表面形成直径为1-2mm、凸起、有光泽、表面光滑的黑色菌落（图1、图2、图3）。图示如下：
图1 菌落培养革兰氏阴性菌
图2 对照组无任何菌落
图3 革兰氏阴性菌染色显微镜下照片
3讨论
随着种植体在临床应用日益广泛，学者们对种植体的相关研究也更加深入。种植体与牙槽骨直接结合没有牙周膜，防御屏障较天然牙弱，一旦发生炎症，更容易发生骨吸收[3]。
当前研究表明，导致牙种植体周围炎的原因主要包括生物力学和细菌感染。其中微生物学研究发现种植体周围炎的致病微生物是由口腔厌氧茵引起。Mombelli[4]等比较研究同一患者口内失败与成功种植体龈下微生物构成发现：失败种植体中41%以上G—厌氧杆菌、兼性厌氧杆菌和梭形杆菌明显增高。XieP[5]对13名患者19个失败种植体周龈下菌斑培养发现G—杆菌占50%，其中核酸杆菌占10.4%，牙龈卟啉单胞菌占6.5%，中间普氏菌占8.5%，螺旋体占5.6%。因此可以通过对种植体龈沟液细菌培养，早期诊断种植体是否发生感染，提高种植体成功率。
3.1关于病例选择
作为本研究对象的91例患者，从十堰市东风总医院口腔医院行牙种植修复的患者中随机选择出来，排除了系统疾病及牙周炎的患者。
3.2种植体龈沟液菌落培养可以对种植体周围炎进行早期诊断
通过培养种植修复患者戴牙时的龈沟液，进行革兰氏染色。其中有7例患者在显微镜下根据染色颜色和细菌形态可以辨别出其中有核酸杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普氏菌这几种典型的种植体周围炎可疑致病菌，且数目较多。有4例患者戴牙5个月到12个月出现了种植体周围炎症。从而说明了种植体龈沟液菌落培养可以对种植体周围炎进行早期诊断。
3.3对种植体周围炎进行早期诊断的展望
有相关报道种植体周围炎的患者龈沟液中采用细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）的种类及含量有明显变化[6]。因此可以通过ELISA法检测种植患者龈沟液中的细胞因子的变化，从而对种植体周围炎进行早期诊断，然而该类研究尚未见报道，今后可以通过进一步的实验观察来证实。
参考文献
（1）Behneke A ， Behneke N， d Hoedt B， et al. Treament of Peri-implantitis defeets with autogenous bone grafts Six month to 3 year results of a Pros Peetive study in 17 patients Int J Oral Maxillofac Implants， 2000， 15（1）：125
（2）Lenng KC， Chow TW， W at PY et al. Peri-implantitis bone loss managernent of a patient Int J Oral Maxillofac Implants， 2001， 16（2）： 273
（3）徐欣.口腔种植失败病例原因分析.[J]中国实用口腔科杂志，2009，2（11）：17—19
（4）Monbelli A， van Oosten MAC， Schurch E. Oral Microbiol Immunol， 1987，2：145
（5）Xie P， Deng LX， Gong P， Ding Y， Tang XH. Expression of HMGB1 and HMGN2 in gingival tissues， GCF and PICF of periodontitis patients and peri-implantitis.[J] Braz J Microbiol. 2011 Jul； 42（3）：1213-9
（6）汪文君；刘向辉；细胞因子与种植体周围炎相关性的研究进展.[J]口腔医学，2012，06：378-380
关键词：种植体周围炎；早期诊断；菌落培养
种植体周围炎是发生在种植体周围组织的炎症， 造成种植体周围骨组织浅碟状的损害，最终使种植体松动脱落。国内外研究表明种植体周围炎是导致种植体失败的最主要原因之一[1、2]。临床上对其主要的诊断方法包括影像学检查、种植体龈沟探诊、种植体牙龈出血指数检查及种植体动度检测等，但这些方法在确诊种植体周围炎时种植体周围往往已经有大量骨吸收，使得治疗效果欠佳。因此若能早期诊断种植体周围炎，临床意义十分重大。
1对象与方法
1.1研究对象
2013年5月至2014年1月对十堰市东风口腔医院修复科完成种植修复的91例患者进行定期复查。其中男性52例，女性39例。研究对象纳入标准：（1）身体健康，无糖尿病等其他系统性疾病及牙周病，非妊娠哺乳期妇女（2）观察期间未服用抗生素和免疫抑制剂。（3）观察期间认真刷牙，但未进行专业口腔洁治护理。（4）口腔卫生状况良好。
1.2研究方法
91列患者种植戴牙时取种植体周围龈沟液在厌氧环境下进行细菌培养，并进行临床检查包括：种植体探诊深度，牙龈探诊出血指数及影像学检查（X线片）。1.3.6个月分三个阶段进行细菌培养和临床检查。
1.2.1采用自身前后对照 测定戴牙当天、3个月、6个月不同时期龈沟液中菌群变化情况，前后进行对照；
1.2.1标本的采集和处理
（1）对标本瓶和微量加样器枪头进行高温灭菌；
（2）于标本瓶注入100ul的生理盐水，密闭瓶口；
（3）采集标本前患者用生理盐水漱口2次，用无菌吸潮纸尖浸入种植体龈沟内采集标本，每个牙位取六个点（颊舌侧近中、正中、远中）；
（4）将采集的标本装入密闭的含有生理盐水的标本瓶中，立即送往实验室；
（5）在超净台上将采集的标本接种在牛心脑浸汁血琼脂含维生素K（简称BHI-S培养基）培养皿表面，用涂布棒将其均匀涂布于培养皿表面；
1.2.3细菌的培养和鉴定
（1）将已接种的BHI-S培养基和厌氧发生剂同时放入厌氧袋（日本三菱）中；
（2）厌氧袋放入到恒温箱中厌氧环境下37℃培养48小时；
（3）进行革兰氏染色并在显微镜下观察菌落着色情况和形态；
1.3.1在提取龈沟液后进行临床检查，记录种植体颊舌向近中、远中、正中六个点探诊深度、牙龈出血情况。对探诊出血的患者摄X线片，确定种植体周围牙槽骨是否吸收。
2结果
91例患者其中8例患者下菌落着色为红色。这7例患者戴牙5个月到12个月出现了种植体周围炎的症状，通过革兰染色发现这7例患者龈下菌群主要为核酸杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普氏菌。随着时间的延长G-厌氧菌逐渐的增多。核酸杆菌的形态为具核梭杆菌菌落直径1-2mm，突起垫状，半透明，有恶臭味，通过斜射光线菌落有斑点。牙龈卟啉单胞菌菌落：在血琼脂表面形成直径为1-2mm、凸起、有光泽、表面光滑的黑色菌落（图1、图2、图3）。图示如下：
图1 菌落培养革兰氏阴性菌
图2 对照组无任何菌落
图3 革兰氏阴性菌染色显微镜下照片
3讨论
随着种植体在临床应用日益广泛，学者们对种植体的相关研究也更加深入。种植体与牙槽骨直接结合没有牙周膜，防御屏障较天然牙弱，一旦发生炎症，更容易发生骨吸收[3]。
当前研究表明，导致牙种植体周围炎的原因主要包括生物力学和细菌感染。其中微生物学研究发现种植体周围炎的致病微生物是由口腔厌氧茵引起。Mombelli[4]等比较研究同一患者口内失败与成功种植体龈下微生物构成发现：失败种植体中41%以上G—厌氧杆菌、兼性厌氧杆菌和梭形杆菌明显增高。XieP[5]对13名患者19个失败种植体周龈下菌斑培养发现G—杆菌占50%，其中核酸杆菌占10.4%，牙龈卟啉单胞菌占6.5%，中间普氏菌占8.5%，螺旋体占5.6%。因此可以通过对种植体龈沟液细菌培养，早期诊断种植体是否发生感染，提高种植体成功率。
3.1关于病例选择
作为本研究对象的91例患者，从十堰市东风总医院口腔医院行牙种植修复的患者中随机选择出来，排除了系统疾病及牙周炎的患者。
3.2种植体龈沟液菌落培养可以对种植体周围炎进行早期诊断
通过培养种植修复患者戴牙时的龈沟液，进行革兰氏染色。其中有7例患者在显微镜下根据染色颜色和细菌形态可以辨别出其中有核酸杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普氏菌这几种典型的种植体周围炎可疑致病菌，且数目较多。有4例患者戴牙5个月到12个月出现了种植体周围炎症。从而说明了种植体龈沟液菌落培养可以对种植体周围炎进行早期诊断。
3.3对种植体周围炎进行早期诊断的展望
有相关报道种植体周围炎的患者龈沟液中采用细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）的种类及含量有明显变化[6]。因此可以通过ELISA法检测种植患者龈沟液中的细胞因子的变化，从而对种植体周围炎进行早期诊断，然而该类研究尚未见报道，今后可以通过进一步的实验观察来证实。
参考文献
（1）Behneke A ， Behneke N， d Hoedt B， et al. Treament of Peri-implantitis defeets with autogenous bone grafts Six month to 3 year results of a Pros Peetive study in 17 patients Int J Oral Maxillofac Implants， 2000， 15（1）：125
（2）Lenng KC， Chow TW， W at PY et al. Peri-implantitis bone loss managernent of a patient Int J Oral Maxillofac Implants， 2001， 16（2）： 273
（3）徐欣.口腔种植失败病例原因分析.[J]中国实用口腔科杂志，2009，2（11）：17—19
（4）Monbelli A， van Oosten MAC， Schurch E. Oral Microbiol Immunol， 1987，2：145
（5）Xie P， Deng LX， Gong P， Ding Y， Tang XH. Expression of HMGB1 and HMGN2 in gingival tissues， GCF and PICF of periodontitis patients and peri-implantitis.[J] Braz J Microbiol. 2011 Jul； 42（3）：1213-9
（6）汪文君；刘向辉；细胞因子与种植体周围炎相关性的研究进展.[J]口腔医学，2012，06：378-380