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【中图分类号】R364 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2013）11-0525-02
【摘要】目的：通过观察黄芪对损伤血瘀证早期IL6的影响，了解IL6动态变化规律及黄芪对其干预的作用。方法：将家兔分为21个组别，每组8只，分别观察大腿内侧定量砸伤后1H、8H、24H、48H、72H、120H、168H空白组、损伤组、损伤灌药组IL6的变化情况。结果：黄芪可以有效控制损伤早期（72H）IL6的增长趋势。结论：黄芪对于免疫双重效应的IL6具有稳定作用，从而抑制炎性反应。
【关键词】黄芪；损伤血瘀证；IL6
“损伤血瘀证”表现为外部损伤引起皮肤、肌肉产生瘀血。以往中医常认为“损伤血瘀证”是一种血液及血管病变为病机的证。
研究者曾从血管类基因角度出发，发现血凝类指标在72小时恢复正常，基因表达不显著。使用活血化瘀类药物具有改善损伤造成的全身免疫紊乱，但原理不甚明确，能否直接在损伤早期使用补气类中药用以改善免疫状况，扩大临床用药的范围，成为一个必须深入研究的问题。
大量研究[1]表明黄芪水浸剂及其提取物具有抗氧化，抗水肿，调节机体细胞免疫的作用。研究者利用能改善免疫能力的 “补气类”中药黄芪水浸剂干预“损伤血瘀证”，观察IL6动态变化规律及黄芪对其干预的作用。
1. 实验方法
1.1. 实验对象
实验用家兔168只。雌、雄各半，体重为2kg-3kg，由简阳达硕动物公司提供。适应喂养一周，喂养期间按照家兔饲养环境设定温度与湿度（湿度65%～80%，温度控制25-28摄氏度）。将168只家兔标记。计算机系统制作随机表，将家兔随机分为21个组别，每组8只，分别观察大腿内侧定量砸伤后1H、8H、24H、48H、72H、120H、168H空白组、损伤组、损伤灌药组IL6的变化情况。
1.2. 动物模型
利用飞利浦动物剃毛机，剔除家兔左后肢大腿内侧中上部的兔毛，动作轻柔，不造成破皮或产生其他损伤。“定量化重力击打法”是成熟的制造损伤血瘀证的方法：固定家兔上下肢体，将PVC管的紧靠家兔已经剃毛的部位。另一实验者从PVC管上方下落重锤，重锤初速度为0，打击锤质量250g，打击面积2.5cm2，以重力转化的定量动能直接打击家兔的大腿内群肌肉。
1.3.标本采集
家兔心脏采血，与第4肋间缝隙插入家兔心脏，采血5ml，收集的血液静置后离心10min，30×100r/min，用移液枪取上层的黄色清亮液至EP管中，编号后放置在-20℃冰箱中备用。
1.4.实验步骤（采用Elisa法）
①在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体工作液50gl。
②振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。
③将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
④除空白孔外，加入酶结合物工作液100u1。
⑤振荡混匀，置20～25℃环境中温育30min。
⑥将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
⑦每孔加人显色剂A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。
⑧加入终止液50gl后，轻轻振荡混匀。用酶标仪（450nm波长）测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL6值。
2. 结果
空白组不同时间点之间横向比较IL-6的水平，各个组别之间均未出现统计学差异（P>0.05），说明喂养时间、剃毛过程和恐吓等外在刺激没有对家兔IL-6产生任何作用。
损伤组IL-6的变化趋势呈现持续上升趋势，在损伤的第7天（168H）仍然处于较高的阶段，说明整个损伤后其异常增长的趋势一直没有得到有效的控制。
损伤灌药组IL-6在损伤后逐步下降，至第3天（72H）下降明显，后面趋于稳定。说明补益药黄芪对于损伤早期（72H）有促进IL-6迅速下降的功效。
3.结论
损伤早期IL6可能具有促炎因子属性，损伤中后期具有抑制其他炎性因子的属性[2]。黄芪水浸剂可以则扭转了损伤早期3天（72H）的IL6升高趋势，3天后抑制作用消失可能意味着IL6的生理作用已经转化为抗炎因素，说明黄芪具有良好的协调平衡IL6的能力，最终达到控制损伤血瘀证炎性反应的目的。项目来源：国家自然科学基金 损伤血瘀证细胞凋亡、免疫状态变化规律及黄芪对其干预作用研究
参考文献
[1] 吴瑕，杨薇，张磊，等.不同分子量段黃芪多糖对整体及黏膜免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18） ： 169-172.
[2] 高鹏，毛立群，王越，郭纯等，IL-6/IL-6受体与相关临床疾病的研究进展[J]. 武警后勤学院学报（医学版），2012，10（21）：821-822.
【摘要】目的：通过观察黄芪对损伤血瘀证早期IL6的影响，了解IL6动态变化规律及黄芪对其干预的作用。方法：将家兔分为21个组别，每组8只，分别观察大腿内侧定量砸伤后1H、8H、24H、48H、72H、120H、168H空白组、损伤组、损伤灌药组IL6的变化情况。结果：黄芪可以有效控制损伤早期（72H）IL6的增长趋势。结论：黄芪对于免疫双重效应的IL6具有稳定作用，从而抑制炎性反应。
【关键词】黄芪；损伤血瘀证；IL6
“损伤血瘀证”表现为外部损伤引起皮肤、肌肉产生瘀血。以往中医常认为“损伤血瘀证”是一种血液及血管病变为病机的证。
研究者曾从血管类基因角度出发，发现血凝类指标在72小时恢复正常，基因表达不显著。使用活血化瘀类药物具有改善损伤造成的全身免疫紊乱，但原理不甚明确，能否直接在损伤早期使用补气类中药用以改善免疫状况，扩大临床用药的范围，成为一个必须深入研究的问题。
大量研究[1]表明黄芪水浸剂及其提取物具有抗氧化，抗水肿，调节机体细胞免疫的作用。研究者利用能改善免疫能力的 “补气类”中药黄芪水浸剂干预“损伤血瘀证”，观察IL6动态变化规律及黄芪对其干预的作用。
1. 实验方法
1.1. 实验对象
实验用家兔168只。雌、雄各半，体重为2kg-3kg，由简阳达硕动物公司提供。适应喂养一周，喂养期间按照家兔饲养环境设定温度与湿度（湿度65%～80%，温度控制25-28摄氏度）。将168只家兔标记。计算机系统制作随机表，将家兔随机分为21个组别，每组8只，分别观察大腿内侧定量砸伤后1H、8H、24H、48H、72H、120H、168H空白组、损伤组、损伤灌药组IL6的变化情况。
1.2. 动物模型
利用飞利浦动物剃毛机，剔除家兔左后肢大腿内侧中上部的兔毛，动作轻柔，不造成破皮或产生其他损伤。“定量化重力击打法”是成熟的制造损伤血瘀证的方法：固定家兔上下肢体，将PVC管的紧靠家兔已经剃毛的部位。另一实验者从PVC管上方下落重锤，重锤初速度为0，打击锤质量250g，打击面积2.5cm2，以重力转化的定量动能直接打击家兔的大腿内群肌肉。
1.3.标本采集
家兔心脏采血，与第4肋间缝隙插入家兔心脏，采血5ml，收集的血液静置后离心10min，30×100r/min，用移液枪取上层的黄色清亮液至EP管中，编号后放置在-20℃冰箱中备用。
1.4.实验步骤（采用Elisa法）
①在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体工作液50gl。
②振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。
③将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
④除空白孔外，加入酶结合物工作液100u1。
⑤振荡混匀，置20～25℃环境中温育30min。
⑥将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
⑦每孔加人显色剂A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。
⑧加入终止液50gl后，轻轻振荡混匀。用酶标仪（450nm波长）测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL6值。
2. 结果
空白组不同时间点之间横向比较IL-6的水平，各个组别之间均未出现统计学差异（P>0.05），说明喂养时间、剃毛过程和恐吓等外在刺激没有对家兔IL-6产生任何作用。
损伤组IL-6的变化趋势呈现持续上升趋势，在损伤的第7天（168H）仍然处于较高的阶段，说明整个损伤后其异常增长的趋势一直没有得到有效的控制。
损伤灌药组IL-6在损伤后逐步下降，至第3天（72H）下降明显，后面趋于稳定。说明补益药黄芪对于损伤早期（72H）有促进IL-6迅速下降的功效。
3.结论
损伤早期IL6可能具有促炎因子属性，损伤中后期具有抑制其他炎性因子的属性[2]。黄芪水浸剂可以则扭转了损伤早期3天（72H）的IL6升高趋势，3天后抑制作用消失可能意味着IL6的生理作用已经转化为抗炎因素，说明黄芪具有良好的协调平衡IL6的能力，最终达到控制损伤血瘀证炎性反应的目的。项目来源：国家自然科学基金 损伤血瘀证细胞凋亡、免疫状态变化规律及黄芪对其干预作用研究
参考文献
[1] 吴瑕，杨薇，张磊，等.不同分子量段黃芪多糖对整体及黏膜免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18） ： 169-172.
[2] 高鹏，毛立群，王越，郭纯等，IL-6/IL-6受体与相关临床疾病的研究进展[J]. 武警后勤学院学报（医学版），2012，10（21）：821-822.