宫颈组织中脆性组氨酸三联体基因和凋亡抑制蛋白的表达及临床意义

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  【摘要】目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT)蛋白和凋亡抑制蛋白(survivin)在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达情况,探讨两者在宫颈癌早期诊断和发生发展中的临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测20例正常宫颈组织;20例宫颈CINⅠ级、25例CINⅡ/Ⅲ级;60例宫颈癌组织中的FHIT蛋白和凋亡抑制蛋白的表达。结果FHIT蛋白在正常宫颈组、宫颈CIN组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组中的阴性率分别为0%(0/20)、24.4%(11/45)、10.0%(2/20)、36.0%(9/25)和66.7%(40/60),各组间阴性率比较差异有统计学意义(P<0.05);凋亡抑制蛋白在正常宫颈组织、宫颈CIN组、宫颈癌组中的阳性率分别是20.0%(4/20)、31.1%(14/45)和95.0%(57/60),各组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);在宫颈CIN和宫颈癌中,FHIT和凋亡抑制蛋白的表达有一定的相关性(P<0.05)。结论检测宫颈CIN中的FHIT蛋白表达情况,可用作高级别的CIN筛查或预测。FHIT和凋亡抑制蛋白对于宫颈癌前期病变和宫颈癌的筛查和早期诊断具有一定的临床 参考 价值。 
  【关键词】宫颈上皮内瘤变;宫颈癌组氨酸三联体;凋亡抑制蛋白;免疫组织化学;早期诊断
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  Expression and clinical significance of fragile histidine triad gene and inhibitor of apoptosis protein in cervical tissue
  
  OUYANG Lu-lu.The Departmentof Obstetrics and Gynecology,Shengli Hospital of Zhongyuan Oil Field General Hospital,Henan Puyang 457003,China
  
  【Abstract】ObjectiveTo study the expression of fragile histidine triad(FHIT)and survivin in normal cervix,cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and cervical cancer.To discuss the potential involvement of FHIT and survivin in tumorigenesis,metastasis in cervical cancer; to discuss the significance of FHIT and survivin in early diagnosis of cervical cancer.MethodsThe expressions of FHIT protein and survivin were detected by immunohistochemistry in 20 cases of normal cervix,20 cases of CINⅠ,25 cases of CINⅡ/Ⅲ,60 cases of cervical cancer.ResultsThe percentages of negative expression of FHIT protein in normal tissues were 0%(0/20),24.4%(11/45)in CIN group,10.0%(2/20)in CINⅠgroup,36.0%(9/25)in CINⅡ/Ⅲ group and 66.7%(40/60)in cervical cancer group.There were significant differences between groups(Chi-square test,P<0.05).The positive expression rate of survivin wase 20.0%(4/20)in normal group,31.1%(14/45)in CIN group,and 95.0%(57/60)in cervical cancer group.There was significant difference between groups(Chi-square test,P<0.05).FHIT protein expression and survivin expression were negatively related(P<0.05)in CIN and cervical cancer.ConclusionSince the expression level of FHIT is associated with the grade of CIN,it can be used to screen or forecasting higher-grade-group of CIN.FHIT and survivin has clinical reference value for screening and early diagnosis of cervical lesions and cervical cancer.
  【Key words】
  Cervical intraepithelial neoplasia(CIN)Cervical carcinoma; Fragile histidine triad(FHIT); Survivin; Immunohistochemistry; Early diagnosis
  
  宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,在全球妇女恶性肿瘤中居第2位,占所有妇科恶性肿瘤的10%~12%[1]。脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)是一候选抑癌基因,许多研究报道多种肿瘤细胞系和原发性肿瘤中均发现有FHIT基因的异常转录和表达,包括宫颈癌。凋亡抑制蛋白(survivin)基因是近年来发现的一个调节细胞程序性死亡(即凋亡)的蛋白质家族IAPS(inhibitor of apoptosis proteins)8个成员中的一个,是至今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一[2]。两种基因均与肿瘤的发生、发展和预后相关。本研究应用免疫组化技术检测FHIT和survivin在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中的表达情况,探讨其临床意义。
  
  1资料与方法
  
  1.1一般资料收集2007年1月至2008年12月,河南濮阳中原油田总医院病理科保存的石蜡包埋组织标本,共125例。其中正常宫颈组织20例,宫颈CINⅠ级20例,CINⅡ/Ⅲ级25例,宫颈癌60例。正常组20例为因子宫良性病变而行子宫全切的正常宫颈组织标本。CIN组45例均为门诊宫颈活检标本。宫颈癌标本均为宫颈癌住院患者手术后标本,术前均未接受放、化疗及其他辅助治疗。
  1.2方法全部标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,4 μm连续切片2张。采用免疫组化SP法检测,根据说明书进行常规操作。高压锅喷气进行抗原修复。兔抗人FHIT多克隆抗体、浓缩型兔抗人survivin多克隆抗体(RAB0536)为美国Santa Cruz公司产品,购自北京中山生物技术有限公司;SP免疫组织化学超敏染色试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。
  1.3结果判断染色结果判定由两位经验丰富的妇科病理医生盲法独立阅片完成,核对结果,取得共识。FHIT表达结果判定:FHIT蛋白以胞浆和/或胞核内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。在400倍显微镜下选10个视野,共计数1000个细胞。FHIT表达的判断标准[3]:①根据染色强度:不染色或弱染色(浅黄色)为1分;中度染色(棕黄色)为2分;强染色(棕褐色)为3分;②根据染色范围:阳性细胞百分比<10%为1分,10%~50%为2分,>50%为3分。将上述两种得分相乘,≤3分为FHIT表达缺失,记为阴性(-),>3分为表达正常,记为阳性(+)。survivin阳性以细胞核或细胞质呈现棕黄色颗料状染色为标准。计算阳性细胞百分率:A 0~25%;B 26%~50%;C 51%~75%;D>75%。肿瘤显色深浅按:(a)阳性细胞呈淡黄色云雾状为1分;(b)阳性细胞呈黄色颗粒状为2分;(c)阳性细胞呈深黄色为3分。计算两者乘积,以得分≤1分为阴性,>1分为阳性。。
  1.4统计学方法所有数据输入EXCEL进行整理,统计处理均用SPSS for windows 11.5统计软件进行。免疫组化的阳性表达率为计数资料,采用四格表或列联表χ2检验。设定P<0.05为有统计学意义。
  
  2结果
  
  2.1不同病变宫颈组织中FHIT的表达在正常宫颈组织中FHIT阴性率为0。CIN组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组中FHIT的阴性率分别为24.4%(11/45)、10.0%(2/20)、36.0%(9/25)和66.7%(40/60)。运用列联表χ2检验,对各组间阴性率进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。正常组与CIN组、与宫颈癌组比较,CINⅠ组与CINⅡ/Ⅲ组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。
  2.2不同宫颈组织中survivin的表达在正常宫颈组织、宫颈CIN组、宫颈癌组中survivin的阳性率分别是20.0%(4/20)、31.1%(14/45)和95.0%(57/60),运用列联表χ2检验,对各组间阳性率进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
  2.3FHIT与survivin表达之间的关系在宫颈CIN和宫颈癌中,FHIT表达阴性而survivin表达阳性的患者为51例,FHIT表达阳性而PCNA表达阴性的患者为4例。两个指标的表达同时为阳性的患者为50例,而两个指标的表达同时为阴性的患者为0例。应用配对四格表χ2检验,差异有统计学意义。
  
  3讨论
  
  宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌。宫颈癌有较长的癌前病变阶段,约为10年。早期检查,尽早发现癌前病变是预防宫颈癌的最有效手段[4]。脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是在染色体3p区域发现的候选抑癌基因,已有研究发现该基因与多种肿瘤的发生发展有关[5]。survivin是一个新克隆的凋亡抑制基因,是IAP家族的一个新成员。IAP家族一般含有2~3个棒状病毒重复结构(buculovirus IAP repeat BIR)和羧基末端锌指结构,其中主要是BIR结构发挥抗凋亡作用,而survivin只含有一个BIR结构,羧基末端缺乏锌指结构,代以交织螺旋结构。其选择性表达常见于恶性肿瘤,而在癌旁正常组织和成人终末分化组织几乎不表达。
  研究表明,FHIT蛋白的C末端部分与酵母泛素结合酶9相互作用,参与S期及M期细胞周期蛋白的降解,进一步调控细胞周期[6]。Ishii等将FHIT基因导入7个食管癌细胞系(其中的5个不表达内源性FHIT蛋白),结果有2个细胞系发生了明显的凋亡(TE4和TE14),同样,在低水平表达内源性FHIT蛋白的Hela细胞系中也有类似的现象[7]。Greenspan等发现6/7宫颈鳞癌细胞系和68%原发性宫颈鳞癌检测不到FHIT转录产物或检测到异常产物,而相应在正常宫颈上皮则表现为FHIT的强表达[8]。FHIT蛋白在肿瘤中的作用尚不完全清楚,一般认为存在以下机制:①调控细胞周期[8];②诱导细胞凋亡;③Ap3A水解酶活性;④FHIT底物复合物的作用;⑤Asish等[9]发现FHIT蛋白可与tubulin结合,后者为形成微管的主要成分,从而抑制细胞的分裂与增生;⑥mRNA脱帽功能;⑦FHIT基因失活还与DNA损伤后修复能力增加相关,提示FHIT基因依赖的DNA损伤修复反应可能在肿瘤进展中起一定作用[10]。
  FHIT和survivin在宫颈癌中表达有一定相关性。宫颈癌的发生如同其他的恶性肿瘤一样,是多因素损伤的复杂过程。分子遗传学研究发现,宫颈癌细胞在3号染色体短臂尤其是3P1321.1区域有着高频率等位基因缺失。FHIT基因起始编码外显子E5与着丝粒侧发现了高危型HPV整合点,而HPV是已经明确的宫颈鳞癌的致病因素之一。由此可见,宫颈癌中FHIT蛋白表达的检测对探讨宫颈鳞癌的发病机制、早期诊断有明确的意义。凋亡抑制蛋白(IAP)是细胞内固有的、在进化上极具保守性的一组蛋白质,具有抑制凋亡的作用。越来越多的证据表明,survivin参与细胞分裂的调控。本研究结果显示,在宫颈CIN和宫颈癌中,FHIT和凋亡抑制蛋白的表达有一定的相关性(P<0.05)。
  总之,肿瘤的发生、发展是一个多步骤的过程,是在致病因素作用同时,多种基因同时或先后协同作用的结果。本研究表明,FHIT和survivinA均参与了宫颈癌前病变和宫颈癌的发生、发展。因此,笔者认为,FHIT和survivin对于宫颈癌前病变和宫颈癌的筛查及早期诊断具有一定的临床应用价值。
  
  参考文献
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