【摘 要】
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【目的】克隆骆驼补体C3d基因，分析序列特征，为其佐剂效应研究提供依据。【方法】利用Trizol试剂，从骆驼肝脏组织提取总RNA,并反转录获得cDNA。设计C3d特异引物，应用PCR技术扩增C3d序列，构建到pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态菌株并双酶切鉴定。使用ClustW,DNAstar, Swiss-Model软件对构建的重组C3d基因序列进行同源性比对，建立系统进化树并对其二级和三级
【基金项目】
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国家自然科学基金“基于高通量测序对骆驼抗体库的多样性分析和数据挖掘及新纳米抗体的发现”（31570935）～～；
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【目的】克隆骆驼补体C3d基因，分析序列特征，为其佐剂效应研究提供依据。【方法】利用Trizol试剂，从骆驼肝脏组织提取总RNA,并反转录获得cDNA。设计C3d特异引物，应用PCR技术扩增C3d序列，构建到pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态菌株并双酶切鉴定。使用ClustW,DNAstar, Swiss-Model软件对构建的重组C3d基因序列进行同源性比对，建立系统进化树并对其二级和三级结构进行预测和分析。【结果】采用骆驼C3d特异引物，PCR扩增获得大小为909 bp的骆驼补体C3d基因。构建至T载体并转入大肠杆菌，获得阳性转化克隆。克隆的新疆双峰驼C3d序列与骆驼科C3d基因之间的同源性在97%以上，与牛和猪C3d基因同源性为88%,与兔和人的C3d基因同源性为83%。对骆驼C3d蛋白采用Swiss-Model软件进行序列分析，预测该蛋白质的二级结构主要由α-螺旋和β-折叠组成，该蛋白可能具有良好的免疫原性和免疫结合活性。【结论】C3d基因在进化中较为保守，在骆驼免疫中可以采用亲缘关系较近的其他动物来源的C3d作为分子佐剂从而增强骆驼免疫效果。
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