研究大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞株法尼醇X受体(FXR)通路的调节作用。
方法模型组采用孕二烯二酮(Guggulsterones)对L02细胞株的FXR基因干预，根据大黄素剂量分为高剂量、中剂量、低剂量组(50.0 μmol/L、25.0 μmol/L、12.5 μmol/L)，另设对照组。采用实时荧光定量PCR与Western blot检测FXR及下游小异源二聚体伴侣受体(SHP)、尿苷二磷酸葡萄糖苷酸转移酶2B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP) mRNA及蛋白表达。
结果1．模型组FXR mRNA及蛋白相对表达量(0.240±0.021、0.385±0.119)较对照组(1.000±0.088、1.000±0.223)显著降低，差异均有统计学意义(t＝14.62、4.21，均P<0.01)；与模型组比较，大黄素高、中、低剂量组FXR mRNA相对表达量(0.755±0.083、0.817±0.097、0.547±0.080)显著升高，差异均有统计学意义(t＝10.42、10.03、6.39，均P<0.01)；中剂量组FXR蛋白相对表达量(0.865±0.203)显著升高，差异有统计学意义(t＝3.53，P<0.01)；高、中剂量组FXR mRNA相对表达量(0.755±0.083、0.817±0.097)均高于低剂量组(0.547±0.080)，差异均有统计学意义(t＝3.11、3.70，均P<0.01)。2.模型组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白相对表达量(0.148±0.025、0.205±0.039、0.184±0.020，0.458±0.130、0.255±0.170、0.303±0.100)较对照组(1.000±0.099、1.000±0.104、1.000±0.125，1.000±0.129、1.000±0.157、1.000±0.162)显著降低，差异均有统计学意义(t＝14.50、12.44、11.19、5.13、5.57、6.33，均P<0.01)。高、中、低剂量组SHP、UGT2B4、BSEP mRNA相对表达量(0.610±0.058、0.514±0.041、0.707±0.062，0.755±0.108、0.800±0.086、0.727±0.076，0.470±0.070、0.582±0.050、0.500±0.108)较模型组(0.148±0.025、0.205±0.039、0.184±0.020)显著升高，差异均有统计学意义(t＝12.75、9.38、13.94、9.46、10.90、11.96、7.53、10.31、5.00，均P<0.01)；高、中剂量组SHP、UGT2B4、BSEP蛋白相对表达量(0.658±0.091、0.624±0.113、0.607±0.097，0.868±0.194、0.883±0.099、0.913±0.131)较模型组(0.458±0.130、0.255±0.170、0.303±0.100)显著升高，差异均有统计学意义(t＝2.18、3.13、3.78、3.05、5.53、6.41，均P<0.01)，低剂量组SHP、BSEP蛋白相对表达量(0.645±0.135、0.572±0.076)不同程度升高，差异均有统计学意义(t＝1.73，P<0.05，t＝3.72，P<0.01)。大黄素高、中剂量组BSEP蛋白相对表达量(0.607±0.097、0.913±0.131)均高于低剂量组(0.572±0.076)，差异均有统计学意义(t＝1.99、3.90，均P<0.01)；高、低剂量组SHP、UGT2B4 mRNA相对表达量(0.610±0.058、0.470±0.070，0.514±0.041、0.582±0.050)均低于中剂量组(0.800±0.086)，差异均有统计学意义(t＝3.75、6.47、3.83、3.42，均P<0.01)；高、低剂量组UGT2B4、BSEP蛋白表达量(0.624±0.113、0.644±0.097，0.607±0.097、0.572±0.076)均低于中剂量组(0.883±0.099、0.913±0.131)，差异均有统计学意义(t＝4.27、2.98、6.30、3.90，均P<0.01)。
结论Guggulsterones能抑制L02细胞株FXR及下游SHP、UGT2B4、BSEP基因表达，大黄素可通过对FXR基因表达上调，促进SHP、UGT2B4、BSEP基因表达上调，抑制胆汁淤积通路来保护肝细胞，但有剂量差异。