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摘要：目的 比较黄芩不同溶剂提取物的抗氧化活性，并测定其黄酮含量。方法 利用比色法测定黄芩不同溶剂提取物中的总黄酮含量，利用1，1-二苯基-2-苦苯肼（DPPH）自由基体系对黄芩不同溶剂提取物的抗氧化活性进行评价。结果 黄芩不同溶剂提取物均具有一定的抗氧化活性，其中乙醇提取物清除DPPH自由基的能力最强，且总黄酮含量最高。结论 黄芩的抗氧化活性受到不同溶剂的影响，并且与其含的黄酮含量成正相关。
关键词：黄芩；提取物；抗氧化活性；总黄酮；1，1-二苯基-2-苦苯肼
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0078-02
现代研究表明，黄芩活性物质具有抗氧化自由基作用，同时又能抑制黑色素的生成，具有防晒、祛斑、美白、抗过敏和抗菌杀菌的作用。自由基是生命活动过程中生物化学反应的中间产物。在正常情况下，机体内自由基的产生和清除处于动态平衡之中，若体内自由基产生过多或清除过慢，就会在分子水平、细胞水平以及器官水平给机体造成损伤，并可加快机体的衰老过程[1-2]。本试验对黄芩不同极性溶剂的提取物中黄酮含量进行了测定，并对黄芩不同溶剂提取物抗氧化能力进行研究，为黄芩更好地应用于化妆品中提供依据。
1 仪器与试药
TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），Al204型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），GKC-11-CR2电热恒温水浴箱（上海科技试验仪器厂）。
黄芩购于长春宏检中药材批发公司；经鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi.的干燥根。1，1-二苯基-2-苦苯肼（DPPH）自由基；抗坏血酸（Vc）；芦丁对照品（批号10080-200707，购于中国药品生物制品检定所）；氯化铁、铁氰化钾亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芩不同极性溶剂提取制备方法
分别称取10.0 g干燥黄芩粉末，按固液比1∶10比例分别加入100 mL 95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂，60 ℃恒温水浴回流提取2次，每次1 h。过滤，合并滤液，旋转蒸发浓缩，浓缩液挥干溶剂。制得95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂的提取物（W1、W2、W3、W4、W5），置于4 ℃冰箱保存备用。
2.2 总黄酮含量测定方法
2.2.1 供试品溶液的制备 分别称取95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂的提取物，分别用95%乙醇溶解，定容至10 mL容量瓶中，即得W1、W2、W3、W4、W5的供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品，精密称定10.24 mg，置25 mL量瓶中，加水适量使溶解，加水定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液（每1 mL中含芦丁0.409 6 mg）。
2.2.3 标准曲线绘制 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 mL，分别置25 mL量瓶中，用水补足至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4.3%氢氧化钠试液10 mL，加水定容至刻度，摇匀。以相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅤA]在508 nm波长处测定吸收度值，绘制标准曲线[3]。得回归方程Y=10.846X+0.0735 （r=0.999 3）。结果表明，在0.016～0.082 mg/mL范围内与吸收度有良好的线性关系。
2.2.4 黄芩总黄酮含量测定 精密量取供试品溶液1 mL，置于25 mL容量瓶中，按照“2.2.3”项下方法显色后，于508 nm波长处测定吸收度值，根据回归方程计算含量。根据线性回归方程计算黄芩不同溶剂提取物中总黄酮的含量。
2.3 黄芩不同溶剂提取物对1，1-二苯基-2-苦苯肼自由基清除能力的影响
以抗氧化剂Vc为阳性对照，精密称取0.100 0 g Vc，用蒸馏水溶解并定容至50 mL容量瓶中，备用。
分别加入5种溶剂W1、W2、W3、W4、W5提取物2 mL于10 mL具塞试管中，加入4 mL DPPH溶液，充分混匀，静置30 min，用分光光度计在517 nm测定其吸光度（As）；取4 mL DPPH溶液和2 mL 95%乙醇溶液，混匀，测吸光度（Ao）；4种溶剂提取液各取2 mL与4 mL 95%乙醇溶液，混匀，测吸光度（Ar）。平行测定3次，取平均值，根据以下公式计算抑制率[4-5]。以样品浓度和抑制率计算半数抑制率（IC50）。
抑制率=[1-（As-Ar）/Ao]×100%
IC50=50%×消耗的DPPH质量/加入样品溶液中溶质的质量
结果表明，溶质质量所需浓度越低，说明IC50越高，即该样品对DPPH自由基清除能力越强。黄芩不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力的影响。结果见表1。可见，黄芩的5种溶剂提取物中，总黄酮的含量按由高到低的顺序为：95%乙醇提取物>70%乙醇提取物>正丁醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物。Vc的IC50值为6.78 μg/mL，除了氯仿提取物外，不同溶剂黄芩提取物对DPPH自由基均有较显著清除作用，其强弱顺序为：Vc>95%乙醇提取物>70%乙醇提取物>正丁醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物，且与总黄酮含量成明显正相关（r=0.9127），用95%乙醇提取得到的提取物抗氧化效果最好。
3 讨论
本试验采用DPPH法结合总黄酮的含量对黄芩不同溶剂提取物进行体外抗氧化活性研究。实验结果表明，黄芩的95%乙醇、70%乙醇、正丁醇提取物均有较强的清除DPPH自由基活性，而氯仿提取物活性明显较低，而且不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力与总黄酮的含量成明显的正相关，这表明黄芩抗氧化活性成分可能是一些极性较大的黄酮类物质成分。因此，有必要对黄芩不同溶剂提取物抗氧化活性成分进行深入的研究，且95%乙醇提取物和70%乙醇提取物所含黄酮含量无明显差异，考虑节约能源的因素，可用70%乙醇提取黄芩得到抗氧化活性成分。另外，本研究表明，该方法灵敏、快速。
总之，黄芩中黄酮类成分具有较好的清除DPPH自由基活性。从黄芩资源综合开发利用的角度出发，黄芩总黄酮可作为一种优良的天然抗氧化剂的新资源。
参考文献：
[1] 郭少英，程发峰，钟相根，等.黄芩苷的体外抗氧化研究[J].时珍国医国药，2011，22（1）：9-11.
[2] 盛雪飞，彭燕，陈健初.天然抗氧化剂之间的协同作用研究进展[J].食品工业科技，2010（7）：414-417.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：257.
[4] 王笑晴.基于DPPH自由基清除能力的姜黄提取物抗氧化活性评价[J].药物评价研究，2011，34（5）：360-363.
[5] 王丽，张丽，康文艺，等.芦丁清除DPPH自由基分光光度法与微量法抗氧化活性研究[J].中成药，2009，31（11）：1785-1787.
（收稿日期：2013-08-01，编辑：陈静）
关键词：黄芩；提取物；抗氧化活性；总黄酮；1，1-二苯基-2-苦苯肼
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0078-02
现代研究表明，黄芩活性物质具有抗氧化自由基作用，同时又能抑制黑色素的生成，具有防晒、祛斑、美白、抗过敏和抗菌杀菌的作用。自由基是生命活动过程中生物化学反应的中间产物。在正常情况下，机体内自由基的产生和清除处于动态平衡之中，若体内自由基产生过多或清除过慢，就会在分子水平、细胞水平以及器官水平给机体造成损伤，并可加快机体的衰老过程[1-2]。本试验对黄芩不同极性溶剂的提取物中黄酮含量进行了测定，并对黄芩不同溶剂提取物抗氧化能力进行研究，为黄芩更好地应用于化妆品中提供依据。
1 仪器与试药
TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），Al204型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），GKC-11-CR2电热恒温水浴箱（上海科技试验仪器厂）。
黄芩购于长春宏检中药材批发公司；经鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi.的干燥根。1，1-二苯基-2-苦苯肼（DPPH）自由基；抗坏血酸（Vc）；芦丁对照品（批号10080-200707，购于中国药品生物制品检定所）；氯化铁、铁氰化钾亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芩不同极性溶剂提取制备方法
分别称取10.0 g干燥黄芩粉末，按固液比1∶10比例分别加入100 mL 95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂，60 ℃恒温水浴回流提取2次，每次1 h。过滤，合并滤液，旋转蒸发浓缩，浓缩液挥干溶剂。制得95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂的提取物（W1、W2、W3、W4、W5），置于4 ℃冰箱保存备用。
2.2 总黄酮含量测定方法
2.2.1 供试品溶液的制备 分别称取95%乙醇、70%乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇5种溶剂的提取物，分别用95%乙醇溶解，定容至10 mL容量瓶中，即得W1、W2、W3、W4、W5的供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品，精密称定10.24 mg，置25 mL量瓶中，加水适量使溶解，加水定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液（每1 mL中含芦丁0.409 6 mg）。
2.2.3 标准曲线绘制 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 mL，分别置25 mL量瓶中，用水补足至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4.3%氢氧化钠试液10 mL，加水定容至刻度，摇匀。以相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅤA]在508 nm波长处测定吸收度值，绘制标准曲线[3]。得回归方程Y=10.846X+0.0735 （r=0.999 3）。结果表明，在0.016～0.082 mg/mL范围内与吸收度有良好的线性关系。
2.2.4 黄芩总黄酮含量测定 精密量取供试品溶液1 mL，置于25 mL容量瓶中，按照“2.2.3”项下方法显色后，于508 nm波长处测定吸收度值，根据回归方程计算含量。根据线性回归方程计算黄芩不同溶剂提取物中总黄酮的含量。
2.3 黄芩不同溶剂提取物对1，1-二苯基-2-苦苯肼自由基清除能力的影响
以抗氧化剂Vc为阳性对照，精密称取0.100 0 g Vc，用蒸馏水溶解并定容至50 mL容量瓶中，备用。
分别加入5种溶剂W1、W2、W3、W4、W5提取物2 mL于10 mL具塞试管中，加入4 mL DPPH溶液，充分混匀，静置30 min，用分光光度计在517 nm测定其吸光度（As）；取4 mL DPPH溶液和2 mL 95%乙醇溶液，混匀，测吸光度（Ao）；4种溶剂提取液各取2 mL与4 mL 95%乙醇溶液，混匀，测吸光度（Ar）。平行测定3次，取平均值，根据以下公式计算抑制率[4-5]。以样品浓度和抑制率计算半数抑制率（IC50）。
抑制率=[1-（As-Ar）/Ao]×100%
IC50=50%×消耗的DPPH质量/加入样品溶液中溶质的质量
结果表明，溶质质量所需浓度越低，说明IC50越高，即该样品对DPPH自由基清除能力越强。黄芩不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力的影响。结果见表1。可见，黄芩的5种溶剂提取物中，总黄酮的含量按由高到低的顺序为：95%乙醇提取物>70%乙醇提取物>正丁醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物。Vc的IC50值为6.78 μg/mL，除了氯仿提取物外，不同溶剂黄芩提取物对DPPH自由基均有较显著清除作用，其强弱顺序为：Vc>95%乙醇提取物>70%乙醇提取物>正丁醇提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物，且与总黄酮含量成明显正相关（r=0.9127），用95%乙醇提取得到的提取物抗氧化效果最好。
3 讨论
本试验采用DPPH法结合总黄酮的含量对黄芩不同溶剂提取物进行体外抗氧化活性研究。实验结果表明，黄芩的95%乙醇、70%乙醇、正丁醇提取物均有较强的清除DPPH自由基活性，而氯仿提取物活性明显较低，而且不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力与总黄酮的含量成明显的正相关，这表明黄芩抗氧化活性成分可能是一些极性较大的黄酮类物质成分。因此，有必要对黄芩不同溶剂提取物抗氧化活性成分进行深入的研究，且95%乙醇提取物和70%乙醇提取物所含黄酮含量无明显差异，考虑节约能源的因素，可用70%乙醇提取黄芩得到抗氧化活性成分。另外，本研究表明，该方法灵敏、快速。
总之，黄芩中黄酮类成分具有较好的清除DPPH自由基活性。从黄芩资源综合开发利用的角度出发，黄芩总黄酮可作为一种优良的天然抗氧化剂的新资源。
参考文献：
[1] 郭少英，程发峰，钟相根，等.黄芩苷的体外抗氧化研究[J].时珍国医国药，2011，22（1）：9-11.
[2] 盛雪飞，彭燕，陈健初.天然抗氧化剂之间的协同作用研究进展[J].食品工业科技，2010（7）：414-417.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：257.
[4] 王笑晴.基于DPPH自由基清除能力的姜黄提取物抗氧化活性评价[J].药物评价研究，2011，34（5）：360-363.
[5] 王丽，张丽，康文艺，等.芦丁清除DPPH自由基分光光度法与微量法抗氧化活性研究[J].中成药，2009，31（11）：1785-1787.
（收稿日期：2013-08-01，编辑：陈静）