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摘要：目的：研究姜黄素对人类结肠癌Lovo细胞的作用效果。方法：使用不同浓度（0 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L） 的姜黄素对2014年8月——2014年12月由中南大学提供结肠癌细胞株Lovo进行24 h的处理，并且用Real-time PCR来检测姜黄素对人类结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF mRNA表达的作用效果，采用Western blot 来检测姜黄素对结肠癌细胞的VEGF蛋白表达的变化。结果：人类结肠癌Lovo细胞在经过姜黄素治疗24小时后，5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 的姜黄素的VEGF mRNA和蛋白表达都出现了显著降低，这和对照组相比具有明显的统计学差异（P < 0.05）。结论：姜黄素能够降低人类结肠癌Lovo细胞VEGF的表达，并且对姜黄素的剂量有一定的依赖性，这是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖和表达的有效方式之一。
关键词：姜黄素；肠癌细胞；作用
姜黄素是从姜科姜黄属植物提取出来的一种天然活性成分，其具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用，其还有较低的毒性，具有非常良好的临床应用潜力。姜黄素具有一定的抗肿瘤效应，这就引起了国内外的广泛关注。结肠癌是一种非常常见的恶性肿瘤，尽管近年来许多患者经过手术、化疗、放疗、免疫和其他综合治疗以后，治疗效果取得了一定的进展，但是其死亡率仍非常高。本次实验是采用2014年8月- 2014年2月由中南大学提供结肠癌Lovo细胞作为研究对象，并且对不同浓度的姜黄素对结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响进行观察，从多角度研究姜黄素对结肠癌细胞的作用效果，这样就能够为结肠癌临床治疗提供一些理论基础结肠癌，现报道如下。
1.资料和方法
1.1一般资料
人类结肠癌Lovo细胞是由中南大学肿瘤研究所提取出来的，实验中的姜黄素是从Sigma公司购买的，区3.684mg的姜黄素充分溶解在1毫升的DMSO溶液当中，得到最终的浓度为10 mmol/ L母液，在细胞培养基稀释到使用时所需的浓度。Trizol、逆转录试剂盒都是从大连宝生物公司提供的，引物也是由大连宝生物公司进行合成的。蛋白质提取液和ECL 发光试剂盒是从Pierce公司购买的，兔抗人VEGF多克隆抗体和羊抗兔二抗lgG都是从Santa Cruz公司购买的。
1.2细胞培养和处理
人类结肠癌Lovo细胞接种在含有10%的胎牛血清1640培养基当中，并且在37℃和5%的二氧化碳以及饱和湿度培养箱中进行培养，隔天需要更换液体，保持细胞对数生长期长，用0.25%胰蛋白酶进行消化传代。在对数期Lovo细胞进行分组，对照组是使用姜黄素0 μmol/L，加入等量DMSO，实验组为含有姜黄素5 μmol/L，10 μmol/L，20 μmol/L，40 μmol/L 组，在37℃和5%二氧化碳的环境下进行处理后，在饱和湿度中进行细胞培养24h。
1.3 Real-time PCR
采用Trizo1试剂一步法来提取细胞总RNA，利用紫外分光光度计来测定细胞的总RNA浓度，计算OD260/280，RNA的比值在1.8 ～ 2.0的标本能够进行反转录。总RNA需要按照说明书合成cDNA逆转录产品cDNA是用于Real-time-PCR进行扩增。VEGF的引物：5 '端：5' 端：5' -GGGGGATCCGCCTCCGAA-ACCATGAACTT -3' 及3' 端：5' -CCCGAATTCTCCTGGTGAGAGA-TCTGGTT-3'，变性、退火温度分别为94℃和72℃，并且需要进行40个循环，并且根据样例CT值来计算样品中模板的数量。
1.4统计方法
使用SPSS13.0软件对数据进行分析，并且利用方差分析和t进行检验，P < 0.05时具有明显的统计学差异性。
2.结果
2.1不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞表达的影响
分别使用Primer 3.0 软件设计VEGF和GAPDHmRNA的引物， 利用Real-time PCR来检测VEGF mRNA的表达效果，如表1所示。姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 组与对照组进行比较，VEGF mRNA的表达出现了显著降低，具有明显的统计学差异性（P < 0.05）。
2.2不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞VEGF蛋白表达的影响
不同剂量姜黄素对Lovo细胞进行处理，并且需要收集细胞的总蛋白质，利用Western Blot 对VEGF 蛋白的表达效果进行检测，姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 组与对照组进行比较，VEGF mRNA的表达出现了显著降低，具有明显的统计学差异性（P < 0.05），并且对姜黄素的剂量具有明显的依赖性。
3.讨论
血管内皮生长因子VEGF的表达会随着肿瘤的增殖、侵袭和转移而发生显著增加。VEGF信号还和淋巴管、淋巴结肿瘤细胞入侵和远端转移存在密切的关系。VEGF表达水平和结肠直肠癌组织学分化程度、浸润深度以及TNM分期存在一定的相关性。临床观察发现结直肠癌患者术前血清VEGF水平与结直肠癌的入侵和转移也存在密切的关系。研究人员利用同源重组将结直肠癌细胞系结肠VEGF -A进行敲除以后，发现当细胞VEGF信号消失以后，抑制细胞生长就会比较明显，而且细胞化疗药物5 -氟尿嘧啶的敏感性也会不断增强，而且在临床上通过阻断VEGF受体来对结肠癌的细胞治疗效果也是有限的。
通过目前的研究可以发现，姜黄素可以对消化系肿瘤起到很好的抑制作用，主要的藥理活性就是能够削减核转录因子的活动，这样就能够诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，还能够抑制血管生成。在人类结肠癌HCT116细胞中，姜黄素能够有效抑制结肠癌细胞群体的生长和入侵。不同浓度的姜黄素对人类结肠癌细胞的作用效果也是不一样的。通过对多个结肠癌细胞株进行分析，研究已经证实，姜黄素能够有效降低VEGF的表达。
4.总结
VEGF是进行癌症药物治疗的新靶点，景观姜黄素作用以后，结肠癌Lovo细胞的VEGF水平也会出现下降，姜黄素能够有效降低VEGF的表达效果，而且还能够抑制VEGF促进肿瘤血管生成的作用，这样就能够进一步抑制结肠癌的扩散和转移。本研究对于姜黄素的临床应用提供一些新的理论依据，其对于姜黄素应用于结肠癌治疗中具有很大的指导意义。
参考文献：
[1]何利兵，王险峰，王红胜，杜军，张继民. 姜黄素衍生物体外抑制结肠癌细胞增殖侵袭作用[J]. 中国癌症杂志，2013（01）.
[2]张璐璐，谭欣，孙虓，何灏澜. 姜黄素联合奥沙利铂对肠癌RKO细胞增殖的抑制和凋亡的诱导[J]. 世界华人消化杂志，2013（24）.
[3]吴亚丽，谢俊霞，卢楠，郭立达，梁世中. 姜黄素对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用研究[J]. 现代食品科技，2014（04）.
[4]王奕智，张宁. 姜黄素抗肿瘤作用的研究进展[J]. 宝鸡文理学院学报（自然科学版），2015（01）.
关键词：姜黄素；肠癌细胞；作用
姜黄素是从姜科姜黄属植物提取出来的一种天然活性成分，其具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用，其还有较低的毒性，具有非常良好的临床应用潜力。姜黄素具有一定的抗肿瘤效应，这就引起了国内外的广泛关注。结肠癌是一种非常常见的恶性肿瘤，尽管近年来许多患者经过手术、化疗、放疗、免疫和其他综合治疗以后，治疗效果取得了一定的进展，但是其死亡率仍非常高。本次实验是采用2014年8月- 2014年2月由中南大学提供结肠癌Lovo细胞作为研究对象，并且对不同浓度的姜黄素对结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响进行观察，从多角度研究姜黄素对结肠癌细胞的作用效果，这样就能够为结肠癌临床治疗提供一些理论基础结肠癌，现报道如下。
1.资料和方法
1.1一般资料
人类结肠癌Lovo细胞是由中南大学肿瘤研究所提取出来的，实验中的姜黄素是从Sigma公司购买的，区3.684mg的姜黄素充分溶解在1毫升的DMSO溶液当中，得到最终的浓度为10 mmol/ L母液，在细胞培养基稀释到使用时所需的浓度。Trizol、逆转录试剂盒都是从大连宝生物公司提供的，引物也是由大连宝生物公司进行合成的。蛋白质提取液和ECL 发光试剂盒是从Pierce公司购买的，兔抗人VEGF多克隆抗体和羊抗兔二抗lgG都是从Santa Cruz公司购买的。
1.2细胞培养和处理
人类结肠癌Lovo细胞接种在含有10%的胎牛血清1640培养基当中，并且在37℃和5%的二氧化碳以及饱和湿度培养箱中进行培养，隔天需要更换液体，保持细胞对数生长期长，用0.25%胰蛋白酶进行消化传代。在对数期Lovo细胞进行分组，对照组是使用姜黄素0 μmol/L，加入等量DMSO，实验组为含有姜黄素5 μmol/L，10 μmol/L，20 μmol/L，40 μmol/L 组，在37℃和5%二氧化碳的环境下进行处理后，在饱和湿度中进行细胞培养24h。
1.3 Real-time PCR
采用Trizo1试剂一步法来提取细胞总RNA，利用紫外分光光度计来测定细胞的总RNA浓度，计算OD260/280，RNA的比值在1.8 ～ 2.0的标本能够进行反转录。总RNA需要按照说明书合成cDNA逆转录产品cDNA是用于Real-time-PCR进行扩增。VEGF的引物：5 '端：5' 端：5' -GGGGGATCCGCCTCCGAA-ACCATGAACTT -3' 及3' 端：5' -CCCGAATTCTCCTGGTGAGAGA-TCTGGTT-3'，变性、退火温度分别为94℃和72℃，并且需要进行40个循环，并且根据样例CT值来计算样品中模板的数量。
1.4统计方法
使用SPSS13.0软件对数据进行分析，并且利用方差分析和t进行检验，P < 0.05时具有明显的统计学差异性。
2.结果
2.1不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞表达的影响
分别使用Primer 3.0 软件设计VEGF和GAPDHmRNA的引物， 利用Real-time PCR来检测VEGF mRNA的表达效果，如表1所示。姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 组与对照组进行比较，VEGF mRNA的表达出现了显著降低，具有明显的统计学差异性（P < 0.05）。
2.2不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞VEGF蛋白表达的影响
不同剂量姜黄素对Lovo细胞进行处理，并且需要收集细胞的总蛋白质，利用Western Blot 对VEGF 蛋白的表达效果进行检测，姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 组与对照组进行比较，VEGF mRNA的表达出现了显著降低，具有明显的统计学差异性（P < 0.05），并且对姜黄素的剂量具有明显的依赖性。
3.讨论
血管内皮生长因子VEGF的表达会随着肿瘤的增殖、侵袭和转移而发生显著增加。VEGF信号还和淋巴管、淋巴结肿瘤细胞入侵和远端转移存在密切的关系。VEGF表达水平和结肠直肠癌组织学分化程度、浸润深度以及TNM分期存在一定的相关性。临床观察发现结直肠癌患者术前血清VEGF水平与结直肠癌的入侵和转移也存在密切的关系。研究人员利用同源重组将结直肠癌细胞系结肠VEGF -A进行敲除以后，发现当细胞VEGF信号消失以后，抑制细胞生长就会比较明显，而且细胞化疗药物5 -氟尿嘧啶的敏感性也会不断增强，而且在临床上通过阻断VEGF受体来对结肠癌的细胞治疗效果也是有限的。
通过目前的研究可以发现，姜黄素可以对消化系肿瘤起到很好的抑制作用，主要的藥理活性就是能够削减核转录因子的活动，这样就能够诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，还能够抑制血管生成。在人类结肠癌HCT116细胞中，姜黄素能够有效抑制结肠癌细胞群体的生长和入侵。不同浓度的姜黄素对人类结肠癌细胞的作用效果也是不一样的。通过对多个结肠癌细胞株进行分析，研究已经证实，姜黄素能够有效降低VEGF的表达。
4.总结
VEGF是进行癌症药物治疗的新靶点，景观姜黄素作用以后，结肠癌Lovo细胞的VEGF水平也会出现下降，姜黄素能够有效降低VEGF的表达效果，而且还能够抑制VEGF促进肿瘤血管生成的作用，这样就能够进一步抑制结肠癌的扩散和转移。本研究对于姜黄素的临床应用提供一些新的理论依据，其对于姜黄素应用于结肠癌治疗中具有很大的指导意义。
参考文献：
[1]何利兵，王险峰，王红胜，杜军，张继民. 姜黄素衍生物体外抑制结肠癌细胞增殖侵袭作用[J]. 中国癌症杂志，2013（01）.
[2]张璐璐，谭欣，孙虓，何灏澜. 姜黄素联合奥沙利铂对肠癌RKO细胞增殖的抑制和凋亡的诱导[J]. 世界华人消化杂志，2013（24）.
[3]吴亚丽，谢俊霞，卢楠，郭立达，梁世中. 姜黄素对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用研究[J]. 现代食品科技，2014（04）.
[4]王奕智，张宁. 姜黄素抗肿瘤作用的研究进展[J]. 宝鸡文理学院学报（自然科学版），2015（01）.