【摘 要】
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根据Gene Bank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB2006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点
【机 构】
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河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;郑州大学医学院,郑州,450001
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根据Gene Bank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB2006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点和肠激酶识别位点,构建成重组表达载体pET-32a(+)-Exendin-4,转化大肠杆菌BL21(DE3).在30℃条件下1 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%.利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得纯度98%的融合蛋白6.44mg.利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-4 1.59 mg.腹腔注射糖尿病基因小鼠(BKS.Cg-m+/+Lepr db/J鼠),血糖浓度下降极显著,最佳用量为7μg/kg,注射后4 h血糖降低达51.93%.
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