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四川省德阳市人民医院心胸外科，四川绵竹 618000
【摘要】结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，好发于15岁到35岁的青少年。其潜伏期为4～8周，其中80%发生在肺部，其它部位（颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼）也可继发感染。人与人之间呼吸道传播是主要传播方式。我国是全球22个结核病流行最严重的国家之一。早发现、早诊断、早治疗是控制结核病情的根本所在，本文就T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用进行阐述。
【关键词】T细胞γ干扰素释放实验；诊断； 潜伏性结核感染
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）12-0083-02
1.传统检验方法
1.1涂片检测
将患者的痰液或是其它部位的体液制成涂片在镜下检测患者的阴、阳性。
1.2 X线检查
可早期发现结核，而且可对病灶的部位、范围、性质、发展情况和效果作出诊断。
1.3结核菌素试验（PPD试验）
（1）阳性 表示结核感染，但并不一定患病。皮试呈阳性者，常提示体内有活动性结核灶。
（2）阴性 提示没有结核菌感染。但仍要排除下列情况。①结核菌感染后，需4～8周变态反应才能充分建立；所以在变态反应前期，结素试验可为阴性。②应用糖皮质激素等免疫抑制剂者营养不良以及麻疹、百日咳患者，结素反应可暂时消失。③严重结核病和各种危重患者对结素无反应。④其它：如淋巴免疫系统缺陷（白血病、结节病）患者和老年人的结素反应也常为阴性。
由于我国几乎所有人群均有卡介苗（ BCG ）接种史，PPD结果不准确，仅供于筛查。传统的诊断方法检测率相对低且肺外结核诊断困难、常有“假阴/阳性”出现，延误了早期发现及早期治疗的最佳时机，随着对IFN-γ在调节结核感染引起的细胞介导的免疫反应中起到的关键性作用的不断了解，人们逐步认识到γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assays， IGRAs）可用于结核感染的诊断1。资料显示，IGRA特异性为98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA（T-SPOT.TB和QFT-G-IT）对2年内进展为结核的阴性预测值（NPV）分别为97.8%和99.8%；当免疫诊断检测不局限于既往其他检测阳性受试人群时，在随访19～24个月IGRA阳性者中结核进展率处于8%～15%，并且高于TST相关结果2。
2.T细胞γ-干扰素释放试验（IGRAs）
2.1原理
γ-干扰素释放试验是利用结核分枝杆菌特异或非特异抗原在体外刺激受检者全血或外周血单个核细胞（PBMC），使T淋巴细胞产生大量IFN-γ，然后用酶联免疫吸附法（ELISA）或酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测IFN-γ浓度或计数分泌IFN-γ细胞的方法。国际上广泛使用的IGRA有两种，即澳大利亚产的QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）和英国产的T-SPOT.TB。我国各地医院应用最为普遍的是T-SPOT.TB。目前IGRA 已经开始在英、美、日本等国用于活动性结核病和潜伏性结核感染者的诊断， HIV 合并结核感染的检测， 区别结核感染者与BCG 接种以及耐药结核菌感染的快速检测等3。
2.2临床意义
阴性结果 提示患者体内可能不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，基本可以排除结核杆菌感染的可能。
阳性结果 提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。T-SPOT.TB能更加准确地诊断潜伏性结核感染，对预测结核发病风险方面有一定意。
2.3临床应用：
⑴. 结核病诊断与鉴别诊断、抗结核治疗的疗效评价；⑵. 免疫力低下/受抑制患者的结核诊断/感染筛查；使用生物制剂或免疫抑制剂患者的结核感染筛查：⑶ HIV感染者/肾透析患者/器官移植患者；⑷. 儿童结核病的辅助诊断4；⑸.结核密切接触者/高危人群的结核感染筛查；⑹. 密切接触者追踪等。
3.标本采集与处理、注意事项
本实验引进英国牛津原装进口试剂，基于牛津大学研发的特异性T细胞反应技术平台。
3.1抽血时间：星期一至五上午，当天11：00前统一收集。
3.2采集外周全血，无需空腹，需用专用绿色帽肝素（肝素钠或肝素锂）抗凝采血管采集，不得使用EDTA抗凝。
3.3采血量要求：
⑴ 2岁以下儿童 3-4ml （用一支5ml绿色帽肝素管）
⑵ 其它患者 6-8ml （用两支5ml绿色帽肝素管）
⑶ 免疫力低下/受抑制患者 8-12ml （用两支5ml绿色帽肝素管）
（免疫力低下/受抑制患者：白细胞数WBC<5.0×10*9/L）
3.4样本室温（15-25℃）保存与运输，不得冷冻/冷藏，样本采集后4小时内送到实验室，以便尽快完成检测。
3.5 10天内做过PET-CT或一周内有使用升高白细胞药物的患者，会影响血液中淋巴细胞的分离，建议一周后再行检测。
3.6 保存及运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。
3.7 48小时送出报告单（因细胞培养时间需要24小时）。
T细胞γ干扰素释放实验具有较高的特异性和敏感性，是当前快速检测结核感染和健康人群筛查潜伏性结核感染较有潜力的新方法。然而也存在操作技术要求高，试剂盒价格昂贵等缺点，限制了其在经济发展水平低的发展中国家的应用。
参考文献：
[1]肖倩，黄旭峰. T-SPOT TB试验快速检测结核杆菌感染的临床应用研究[J]实验与检验医学，2009，27（3）：272-274
[2]高晓方，γ-干扰素释放试验研究进展 ，中国医学论坛报 ，2011 ，1（7 ）：33-34
[3]张晶，刘威龙，周伯平，等. 结核分枝杆菌ESAT-6 蛋白的高效表达及在结核菌特异性细胞免疫检测中的应用[J].中华结核和呼吸杂志，2009，32（1）：55-59.
[4]张卫平 韩 文 白玉峡， 等. 结核感染T细胞斑点试验辅助诊断小儿肺结核的临床研究.[J]临床儿科杂志，2009，27（7）：635-637
【摘要】结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，好发于15岁到35岁的青少年。其潜伏期为4～8周，其中80%发生在肺部，其它部位（颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼）也可继发感染。人与人之间呼吸道传播是主要传播方式。我国是全球22个结核病流行最严重的国家之一。早发现、早诊断、早治疗是控制结核病情的根本所在，本文就T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用进行阐述。
【关键词】T细胞γ干扰素释放实验；诊断； 潜伏性结核感染
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）12-0083-02
1.传统检验方法
1.1涂片检测
将患者的痰液或是其它部位的体液制成涂片在镜下检测患者的阴、阳性。
1.2 X线检查
可早期发现结核，而且可对病灶的部位、范围、性质、发展情况和效果作出诊断。
1.3结核菌素试验（PPD试验）
（1）阳性 表示结核感染，但并不一定患病。皮试呈阳性者，常提示体内有活动性结核灶。
（2）阴性 提示没有结核菌感染。但仍要排除下列情况。①结核菌感染后，需4～8周变态反应才能充分建立；所以在变态反应前期，结素试验可为阴性。②应用糖皮质激素等免疫抑制剂者营养不良以及麻疹、百日咳患者，结素反应可暂时消失。③严重结核病和各种危重患者对结素无反应。④其它：如淋巴免疫系统缺陷（白血病、结节病）患者和老年人的结素反应也常为阴性。
由于我国几乎所有人群均有卡介苗（ BCG ）接种史，PPD结果不准确，仅供于筛查。传统的诊断方法检测率相对低且肺外结核诊断困难、常有“假阴/阳性”出现，延误了早期发现及早期治疗的最佳时机，随着对IFN-γ在调节结核感染引起的细胞介导的免疫反应中起到的关键性作用的不断了解，人们逐步认识到γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assays， IGRAs）可用于结核感染的诊断1。资料显示，IGRA特异性为98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA（T-SPOT.TB和QFT-G-IT）对2年内进展为结核的阴性预测值（NPV）分别为97.8%和99.8%；当免疫诊断检测不局限于既往其他检测阳性受试人群时，在随访19～24个月IGRA阳性者中结核进展率处于8%～15%，并且高于TST相关结果2。
2.T细胞γ-干扰素释放试验（IGRAs）
2.1原理
γ-干扰素释放试验是利用结核分枝杆菌特异或非特异抗原在体外刺激受检者全血或外周血单个核细胞（PBMC），使T淋巴细胞产生大量IFN-γ，然后用酶联免疫吸附法（ELISA）或酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测IFN-γ浓度或计数分泌IFN-γ细胞的方法。国际上广泛使用的IGRA有两种，即澳大利亚产的QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）和英国产的T-SPOT.TB。我国各地医院应用最为普遍的是T-SPOT.TB。目前IGRA 已经开始在英、美、日本等国用于活动性结核病和潜伏性结核感染者的诊断， HIV 合并结核感染的检测， 区别结核感染者与BCG 接种以及耐药结核菌感染的快速检测等3。
2.2临床意义
阴性结果 提示患者体内可能不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，基本可以排除结核杆菌感染的可能。
阳性结果 提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。T-SPOT.TB能更加准确地诊断潜伏性结核感染，对预测结核发病风险方面有一定意。
2.3临床应用：
⑴. 结核病诊断与鉴别诊断、抗结核治疗的疗效评价；⑵. 免疫力低下/受抑制患者的结核诊断/感染筛查；使用生物制剂或免疫抑制剂患者的结核感染筛查：⑶ HIV感染者/肾透析患者/器官移植患者；⑷. 儿童结核病的辅助诊断4；⑸.结核密切接触者/高危人群的结核感染筛查；⑹. 密切接触者追踪等。
3.标本采集与处理、注意事项
本实验引进英国牛津原装进口试剂，基于牛津大学研发的特异性T细胞反应技术平台。
3.1抽血时间：星期一至五上午，当天11：00前统一收集。
3.2采集外周全血，无需空腹，需用专用绿色帽肝素（肝素钠或肝素锂）抗凝采血管采集，不得使用EDTA抗凝。
3.3采血量要求：
⑴ 2岁以下儿童 3-4ml （用一支5ml绿色帽肝素管）
⑵ 其它患者 6-8ml （用两支5ml绿色帽肝素管）
⑶ 免疫力低下/受抑制患者 8-12ml （用两支5ml绿色帽肝素管）
（免疫力低下/受抑制患者：白细胞数WBC<5.0×10*9/L）
3.4样本室温（15-25℃）保存与运输，不得冷冻/冷藏，样本采集后4小时内送到实验室，以便尽快完成检测。
3.5 10天内做过PET-CT或一周内有使用升高白细胞药物的患者，会影响血液中淋巴细胞的分离，建议一周后再行检测。
3.6 保存及运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。
3.7 48小时送出报告单（因细胞培养时间需要24小时）。
T细胞γ干扰素释放实验具有较高的特异性和敏感性，是当前快速检测结核感染和健康人群筛查潜伏性结核感染较有潜力的新方法。然而也存在操作技术要求高，试剂盒价格昂贵等缺点，限制了其在经济发展水平低的发展中国家的应用。
参考文献：
[1]肖倩，黄旭峰. T-SPOT TB试验快速检测结核杆菌感染的临床应用研究[J]实验与检验医学，2009，27（3）：272-274
[2]高晓方，γ-干扰素释放试验研究进展 ，中国医学论坛报 ，2011 ，1（7 ）：33-34
[3]张晶，刘威龙，周伯平，等. 结核分枝杆菌ESAT-6 蛋白的高效表达及在结核菌特异性细胞免疫检测中的应用[J].中华结核和呼吸杂志，2009，32（1）：55-59.
[4]张卫平 韩 文 白玉峡， 等. 结核感染T细胞斑点试验辅助诊断小儿肺结核的临床研究.[J]临床儿科杂志，2009，27（7）：635-637