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摘要：宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，死亡率占中国女性癌症的第2位。Bosch等[1]用PCR技术代替原位杂交，对22个国家1035例宫颈癌患者进行HPV检测，发现高危型包括HPV16与宫颈癌的发病有关，然而病毒感染后直至肿瘤发生是一个十分缓慢的过程，其致癌机制尚未完全阐明。本课题的目的是探讨HPV16 E6基因状态在宫颈癌前病变及早期浸润癌的表达，探讨发现早期病变的方法。
关键词：HPV16 E6基因状态宫颈癌高危病变相关性研究
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.099【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）09-0066-02
宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，死亡率占中国女性癌症的第2位。Bosch等[1]用PCR技术代替原位杂交，对22个国家1035例宫颈癌患者进行HPV检测，发现高危型包括HPV16与宫颈癌的发病有关，然而病毒感染后直至肿瘤发生是一个十分缓慢的过程，其致癌机制尚未完全阐明。本课题的目的是探讨HPV16 E6基因状态在宫颈癌前病变及早期浸润癌的表达，探讨发现早期病变的方法。
1材料与方法
1.1患者资料。就我院2011年7月至2013年12月在我院妇产科门诊常规宫颈细胞学检查者中，将其中细胞学结果为鳞状上皮内病变和早期浸润癌共66例，作为研究组。其中CINⅠ～Ⅱ 29例，CIN Ⅲ 20例，早期浸润癌 17例。取材前均未进行放化疗或免疫治疗。随机选取同期33例细胞学阴性患者作为对照组。
1.2病理学筛检。首先进行液基细胞学检查，细胞学结果异常者，须阴道镜下的宫颈活检、组织病理学检查。组织病理学结果为CIN2者行宫颈环行电切术（LEEP），CINⅢ或早期浸润癌患者行LEEP或全子宫切除术。
1.3HPV16 E6基因状态检测。
1.3.1标本收集：宫颈液基细胞学标本收集后，固定液固定，4℃保存备用。
1.3.2DNA的提取及PCR扩增。消化活组织或培养细胞后，氯仿法抽提DNA放入-70℃保存备用。参考外文文献[2]，通过primer 5.0引物设计软件和dnaman基因分析软件，对照已有的HPV DNA全系列，找出引物的位置，筛选出评分高，目的片段小的引物。
1.4统计学处理。应用SAS 9.2统计软件进行，所得资料应用t检验或X2检验，选P<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1HPV16感染：研究组66例患者中HPV16阳性患者为34例，阳性率51.52%；对照组中HPV16阳性3例，阳性率为9.09%。
2.2HPV16 E6感染状态：CINⅠ～Ⅱ中10例HPV16阳性患者检出1例整合型（10.00%），CINⅢ中检出HPV16 阳性10例，其中整合型3例（30.00%），早期浸润癌14例HPV16阳性患者，检出6例整合型（42.86%），两两比较差异有显著性（P<0.01）。对照组例HPV16患者均为游离状态，无整合型。
3讨论
HPV DNA与宿主染色体的整合是宫颈癌发生及恶性进展的一个重要标志，表达整合病毒基因组的细胞比表达游离病毒基因组的细胞具有更强的生长优势。对HPV物理状态进行检测，可提前预知宫颈癌的发生，将有望成为宫颈癌的早期检测指标。
研究表明[3]，HPV16整合现象与宫颈病变程度有密切相关性：随着宫颈损伤级别的升高，HPV16整合率也呈增长趋势。我们采用多重PCR技术，通过比较HPV16阳性标本E2/E6值，发现HPV16阳性标本组，随着宫颈病变级别的增高，HPV DNA整合率逐渐升高，各病变损伤组间整合率差别有显著性意义（P<0.01），提示高危型HPV DNA整合导致的E2基因完整性斷裂是宫颈癌演变的重要标志。
本研究应用分子生物学技术，在HPV16阳性的CIN病变已检测出HPV16整合状态，在宫颈癌前病变已达到一定比例（CINⅢ整合型达30%），即使CINⅠ～Ⅱ期已出现，而在早期浸润癌HPV16病毒阳性的病历中，整合型的达42.86%。结果提示HPV整合状态是宫颈病变快速发展到宫颈癌的标志，提示HPV16病毒整合状态成为宫颈癌的高危因素。因此，对HPV16 E6基因状态的检测，有利于筛检宫颈癌高危患者。
参考文献
[1]Bosch TX，Manos MM，Munoz N，et al.Prevalence of Human Papillomavirus in cervical cancer：a worldwide perspective[J].J Nat lCancer Inst，1995，87（10）：796-801
[2]Park JS，Hwang ES，Park SN，et al.Physical status and expression of HPV genes in cervical cancers.Gynecol Oncol.1997，65（1）：121-129
[3]Hopman A，Smedts F，Dignef W，et al.Transition of high-grade cervical intraepithelial neoplasia to micro-invasive carcinoma is characterized by integration of HPV16/18 and numerical chromosome abnormalities.J Pathol，2004，202：23-33
关键词：HPV16 E6基因状态宫颈癌高危病变相关性研究
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.099【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）09-0066-02
宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，死亡率占中国女性癌症的第2位。Bosch等[1]用PCR技术代替原位杂交，对22个国家1035例宫颈癌患者进行HPV检测，发现高危型包括HPV16与宫颈癌的发病有关，然而病毒感染后直至肿瘤发生是一个十分缓慢的过程，其致癌机制尚未完全阐明。本课题的目的是探讨HPV16 E6基因状态在宫颈癌前病变及早期浸润癌的表达，探讨发现早期病变的方法。
1材料与方法
1.1患者资料。就我院2011年7月至2013年12月在我院妇产科门诊常规宫颈细胞学检查者中，将其中细胞学结果为鳞状上皮内病变和早期浸润癌共66例，作为研究组。其中CINⅠ～Ⅱ 29例，CIN Ⅲ 20例，早期浸润癌 17例。取材前均未进行放化疗或免疫治疗。随机选取同期33例细胞学阴性患者作为对照组。
1.2病理学筛检。首先进行液基细胞学检查，细胞学结果异常者，须阴道镜下的宫颈活检、组织病理学检查。组织病理学结果为CIN2者行宫颈环行电切术（LEEP），CINⅢ或早期浸润癌患者行LEEP或全子宫切除术。
1.3HPV16 E6基因状态检测。
1.3.1标本收集：宫颈液基细胞学标本收集后，固定液固定，4℃保存备用。
1.3.2DNA的提取及PCR扩增。消化活组织或培养细胞后，氯仿法抽提DNA放入-70℃保存备用。参考外文文献[2]，通过primer 5.0引物设计软件和dnaman基因分析软件，对照已有的HPV DNA全系列，找出引物的位置，筛选出评分高，目的片段小的引物。
1.4统计学处理。应用SAS 9.2统计软件进行，所得资料应用t检验或X2检验，选P<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1HPV16感染：研究组66例患者中HPV16阳性患者为34例，阳性率51.52%；对照组中HPV16阳性3例，阳性率为9.09%。
2.2HPV16 E6感染状态：CINⅠ～Ⅱ中10例HPV16阳性患者检出1例整合型（10.00%），CINⅢ中检出HPV16 阳性10例，其中整合型3例（30.00%），早期浸润癌14例HPV16阳性患者，检出6例整合型（42.86%），两两比较差异有显著性（P<0.01）。对照组例HPV16患者均为游离状态，无整合型。
3讨论
HPV DNA与宿主染色体的整合是宫颈癌发生及恶性进展的一个重要标志，表达整合病毒基因组的细胞比表达游离病毒基因组的细胞具有更强的生长优势。对HPV物理状态进行检测，可提前预知宫颈癌的发生，将有望成为宫颈癌的早期检测指标。
研究表明[3]，HPV16整合现象与宫颈病变程度有密切相关性：随着宫颈损伤级别的升高，HPV16整合率也呈增长趋势。我们采用多重PCR技术，通过比较HPV16阳性标本E2/E6值，发现HPV16阳性标本组，随着宫颈病变级别的增高，HPV DNA整合率逐渐升高，各病变损伤组间整合率差别有显著性意义（P<0.01），提示高危型HPV DNA整合导致的E2基因完整性斷裂是宫颈癌演变的重要标志。
本研究应用分子生物学技术，在HPV16阳性的CIN病变已检测出HPV16整合状态，在宫颈癌前病变已达到一定比例（CINⅢ整合型达30%），即使CINⅠ～Ⅱ期已出现，而在早期浸润癌HPV16病毒阳性的病历中，整合型的达42.86%。结果提示HPV整合状态是宫颈病变快速发展到宫颈癌的标志，提示HPV16病毒整合状态成为宫颈癌的高危因素。因此，对HPV16 E6基因状态的检测，有利于筛检宫颈癌高危患者。
参考文献
[1]Bosch TX，Manos MM，Munoz N，et al.Prevalence of Human Papillomavirus in cervical cancer：a worldwide perspective[J].J Nat lCancer Inst，1995，87（10）：796-801
[2]Park JS，Hwang ES，Park SN，et al.Physical status and expression of HPV genes in cervical cancers.Gynecol Oncol.1997，65（1）：121-129
[3]Hopman A，Smedts F，Dignef W，et al.Transition of high-grade cervical intraepithelial neoplasia to micro-invasive carcinoma is characterized by integration of HPV16/18 and numerical chromosome abnormalities.J Pathol，2004，202：23-33