【摘 要】
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目的 探讨miR-21对食管癌(EC)细胞放疗敏感性的作用及其机制.方法 将处于指数生长期的人食管癌KYSE150细胞置于培养瓶中培养,使用X放射线照射KYSE150细胞,得到放疗抵抗株KYSE150R;通过基因编辑技术合成hsa-miR-21 mimic和miR-21 inhibitor,使用Lipo3000进行细胞转染,分为KYSE-150细胞对照组(miR-21 inhibitor NC转染KYSE-150细胞)、KYSE-150细胞实验组(miR-21 inhibitor转染KYSE-150细胞)
【机 构】
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南京中医药大学沭阳附属医院 肿瘤科, 江苏 南京 223600
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目的 探讨miR-21对食管癌(EC)细胞放疗敏感性的作用及其机制.方法 将处于指数生长期的人食管癌KYSE150细胞置于培养瓶中培养,使用X放射线照射KYSE150细胞,得到放疗抵抗株KYSE150R;通过基因编辑技术合成hsa-miR-21 mimic和miR-21 inhibitor,使用Lipo3000进行细胞转染,分为KYSE-150细胞对照组(miR-21 inhibitor NC转染KYSE-150细胞)、KYSE-150细胞实验组(miR-21 inhibitor转染KYSE-150细胞)、KYSE-150R细胞对照组(miR-21 mimic NC转染KYSE-150R细胞)及KYSE-150R细胞实验组(miR-21 mimic转染KYSE-150R细胞);克隆形成实验检测放射敏感性,计算细胞存活分数,根据单靶多击模型模拟存活曲线;增殖实验,用酶标仪在450 nm处测定吸光度;Western blot分析p-ATM(Ser1981)、p-ATR(Ser428)、p-BRCA1(Ser1524)、p-Chk1(Ser345)、p-Chk2(Thr68)、p-H2AX(Ser139)、p-p53(Ser15)、p53的表达.结果 克隆形成实验显示,在亲本株KYSE150细胞中,inhibitor-KYSE150组细胞存活分数低于阴性对照组inhibitor NC组(P<0.05);在放疗抵抗KYSE150R细胞中,mimic-KYSE150R在细胞存活分数高于阴性对照组mimic NC-R组(P<0.05);细胞增殖实验显示,inhibitor-KYSE150组细胞增殖曲线高于阴性对照组inhibitor NC组,mimic-KYSE150R在细胞增殖曲线低于阴性对照组mimic NC-R组(P<0.05);蛋白质印迹分析显示,inhibitor-KYSE150组细胞中p-ATM、p-ATR、p-H2AX、p-BRCA1、p-CHK1、p-CHK2及p-p53表达水平低于inhibitor NC组细胞(P<0.05);mim-ic-KYSE150R组细胞中p-ATM、p-ATR、p-H2AX、p-BRCA1、p-CHK1、p-CHK2以及p-p53表达水平高于mimic NC-R组细胞(P<0.05).结论 miR-21过表达可降低EC对放疗敏感性,其机制可能与肿瘤细胞中DNA损伤有关.
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