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【摘要】 目的 优选藏药六味明目丸的提取工艺。方法 采用正交试验法，以盐酸小檗碱和出膏率为指标，考察提取时间、提取次数和加水量三个因素对六味明目丸提取工艺的影响，优选最佳工艺。结果 优选工艺为加水提取2次，每次加6倍量提取2小时。结论 优选的工艺简单，合理，适合工业化生产。
【关键词】 六味明目丸；盐酸小檗碱；出膏率；正交试验
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.592 文章编号：1004-7484（2013）-08-4594-01
六味明目丸为经典藏医眼科制剂，是（金诃藏药股份有限公司）独家产品，由制铁粉、小檗皮、藏茴香、诃子、毛诃子、余甘子等组成。藏医认为该药具有调节查赤，清热消朦，养肝明目的功效，用于查赤引起的目赤羞明、迎风流泪、视物模糊。中医认为该药具有清热泻火，平肝明目的功效，可用于肝火上炎所致的目赤肿痛、羞明流泪、视物不清等。现行药品标准的六味明目丸为药材全药粉入药，卫生学指标难以控制，不适合工业化生产，患者服药量较大，因此，我们采用正交试验法，以盐酸小檗碱和出膏率为考察指标，对处方中药材的提取工艺进行了初步考察，为该品种进行技术革新奠定了良好的基础。
1 材 料
六味明目药材均由（金诃藏药股份有限公司）提供；盐酸小檗碱（中国食品生物制品检定所，110713——201110，供含量测定用）；日立L-2100型高效液相色谱仪（日立公司）；RE-52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 提取工艺研究
六味明目丸中的小檗皮、诃子、毛诃子和余甘子均含有水溶性有效成分。诃子为“藏药之王”，与毛诃子和余甘子的配伍组合在诸多藏药方剂中出现，被称为藏药三果，是处方的重要组成部分，含有丰富的鞣质和三萜类成分，有效物质成分复杂[1]。小檗皮为藏药常用药材，常用于陈旧黄水病及一切眼病的治疗。小檗皮主要药效活性成分为盐酸小檗碱[2]，与藏药三果比较，活性成分明确。水提工艺中，药材出膏率常常用作工艺选择的辅助因素。因此，我们采用正交试验法，以小檗皮中盐酸小檗碱的提取量为主要考察指标，辅以药材出膏率，考察上述4味药材的提取工艺。
2.1 因素水平的测定 以加水量、提取时间、提取次数为因素，因素水平，见表1。
2.2 提取方法 按处方比例，取小檗皮11.1g、诃子5.6g、毛诃子5.6g、余甘子5.6g，共4味总计27.9g，共9份，按照正交试验设计条件进行处理，提取液分别浓缩至100mL，备用。
2.3 盐酸小檗碱的HPLC测定[3-4]
2.3.1 色谱条件 色谱柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-醋酸溶液（含0.2%三乙胺与0.2%冰醋酸，pH为4）（30：70）；流速：1mL/min；检测波长：346nm；柱温：室温；理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于3000。
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品9.83mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.3 供试品溶液的制备 精密量取2.2项下的备用浓缩液1ml，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.4 测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算，即得。
2.4 出膏率的测定 精密量取2.2项下的备用浓缩液25ml，水浴蒸干，干燥至恒重，计算出膏率，即得。
2.5 结果 以盐酸小檗碱的提取量为主要考察指标，权重系数为0.7，以出膏率为辅助考察指标，权重系数为0.3，对每份样品综合评分，计算公式如下：综合得分=（盐酸小檗碱提取量/最大含量）×0.7×100+（出膏率/最大量）×0.3×100。正交试验结果见表2，方差分析见表3。
2.6 验证试验 为验证最佳提取工艺的稳定性，取小檗皮11.1g、诃子5.6g、毛诃子5.6g、余甘子5.6g，共4味总计27.9g，共6份，其中3份加8倍量水，另外3份加6倍量水，分别提取2次，每次提取2小时，合并提取液，并浓缩至100mL，测定盐酸小檗碱提取量和出膏率。由验证试验可知，优选工艺与最佳工艺的盐酸小檗碱提取量和出膏率均差别不大，与正交试验中的分析是一致的，因此确定优选的提取工艺为提取2次，每次加6倍量水提取2小时。结果见表4。
3 讨 论
3.1 传统的六味明目丸为全药粉入药，我们根据药材所含植化成分的性质，进行了提取工艺的研究，并将提取物制成丸剂，临床实验证明与全药粉入药的六味明目丸相比，产品的总有效率有所提高（将另文报道），说明本试验优选的工艺合理可行。
3.2 在提取工艺研究中，曾以没食子酸的含量作为一个考察指标，但试验中发现，提取时，伴随有没食子酸与其他成分的相互转化。而小檗皮的临床疗效及有效成分均非常明确，因此选择以盐酸小檗碱作为主要考察指标。
参考文献
[1] 姚喆，泽翁拥忠，德洛，等.藏药三果汤散化学与药理研究进展[C].全国第三届药用植物化学与中药新药研发技术创新研讨会，2010：25-32.
[2] 子巴.HPLC法测定不同产地藏药小檗皮中盐酸小檗碱含量比较[J].四川中医，2011，29（9）：45-46.
[3] 陈海娟.HPLC法测定六味明目丸中小檗碱的含量[J].青海医药杂志，2007，37（3）：56-57.
[4] 國家食品药品监督管理局.六味明目丸标准[J].国家药品标准颁布件，批件号：（2011）国药标字ZD-0089号.
【关键词】 六味明目丸；盐酸小檗碱；出膏率；正交试验
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.592 文章编号：1004-7484（2013）-08-4594-01
六味明目丸为经典藏医眼科制剂，是（金诃藏药股份有限公司）独家产品，由制铁粉、小檗皮、藏茴香、诃子、毛诃子、余甘子等组成。藏医认为该药具有调节查赤，清热消朦，养肝明目的功效，用于查赤引起的目赤羞明、迎风流泪、视物模糊。中医认为该药具有清热泻火，平肝明目的功效，可用于肝火上炎所致的目赤肿痛、羞明流泪、视物不清等。现行药品标准的六味明目丸为药材全药粉入药，卫生学指标难以控制，不适合工业化生产，患者服药量较大，因此，我们采用正交试验法，以盐酸小檗碱和出膏率为考察指标，对处方中药材的提取工艺进行了初步考察，为该品种进行技术革新奠定了良好的基础。
1 材 料
六味明目药材均由（金诃藏药股份有限公司）提供；盐酸小檗碱（中国食品生物制品检定所，110713——201110，供含量测定用）；日立L-2100型高效液相色谱仪（日立公司）；RE-52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 提取工艺研究
六味明目丸中的小檗皮、诃子、毛诃子和余甘子均含有水溶性有效成分。诃子为“藏药之王”，与毛诃子和余甘子的配伍组合在诸多藏药方剂中出现，被称为藏药三果，是处方的重要组成部分，含有丰富的鞣质和三萜类成分，有效物质成分复杂[1]。小檗皮为藏药常用药材，常用于陈旧黄水病及一切眼病的治疗。小檗皮主要药效活性成分为盐酸小檗碱[2]，与藏药三果比较，活性成分明确。水提工艺中，药材出膏率常常用作工艺选择的辅助因素。因此，我们采用正交试验法，以小檗皮中盐酸小檗碱的提取量为主要考察指标，辅以药材出膏率，考察上述4味药材的提取工艺。
2.1 因素水平的测定 以加水量、提取时间、提取次数为因素，因素水平，见表1。
2.2 提取方法 按处方比例，取小檗皮11.1g、诃子5.6g、毛诃子5.6g、余甘子5.6g，共4味总计27.9g，共9份，按照正交试验设计条件进行处理，提取液分别浓缩至100mL，备用。
2.3 盐酸小檗碱的HPLC测定[3-4]
2.3.1 色谱条件 色谱柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-醋酸溶液（含0.2%三乙胺与0.2%冰醋酸，pH为4）（30：70）；流速：1mL/min；检测波长：346nm；柱温：室温；理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于3000。
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品9.83mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.3 供试品溶液的制备 精密量取2.2项下的备用浓缩液1ml，加甲醇稀释至25ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.4 测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算，即得。
2.4 出膏率的测定 精密量取2.2项下的备用浓缩液25ml，水浴蒸干，干燥至恒重，计算出膏率，即得。
2.5 结果 以盐酸小檗碱的提取量为主要考察指标，权重系数为0.7，以出膏率为辅助考察指标，权重系数为0.3，对每份样品综合评分，计算公式如下：综合得分=（盐酸小檗碱提取量/最大含量）×0.7×100+（出膏率/最大量）×0.3×100。正交试验结果见表2，方差分析见表3。
2.6 验证试验 为验证最佳提取工艺的稳定性，取小檗皮11.1g、诃子5.6g、毛诃子5.6g、余甘子5.6g，共4味总计27.9g，共6份，其中3份加8倍量水，另外3份加6倍量水，分别提取2次，每次提取2小时，合并提取液，并浓缩至100mL，测定盐酸小檗碱提取量和出膏率。由验证试验可知，优选工艺与最佳工艺的盐酸小檗碱提取量和出膏率均差别不大，与正交试验中的分析是一致的，因此确定优选的提取工艺为提取2次，每次加6倍量水提取2小时。结果见表4。
3 讨 论
3.1 传统的六味明目丸为全药粉入药，我们根据药材所含植化成分的性质，进行了提取工艺的研究，并将提取物制成丸剂，临床实验证明与全药粉入药的六味明目丸相比，产品的总有效率有所提高（将另文报道），说明本试验优选的工艺合理可行。
3.2 在提取工艺研究中，曾以没食子酸的含量作为一个考察指标，但试验中发现，提取时，伴随有没食子酸与其他成分的相互转化。而小檗皮的临床疗效及有效成分均非常明确，因此选择以盐酸小檗碱作为主要考察指标。
参考文献
[1] 姚喆，泽翁拥忠，德洛，等.藏药三果汤散化学与药理研究进展[C].全国第三届药用植物化学与中药新药研发技术创新研讨会，2010：25-32.
[2] 子巴.HPLC法测定不同产地藏药小檗皮中盐酸小檗碱含量比较[J].四川中医，2011，29（9）：45-46.
[3] 陈海娟.HPLC法测定六味明目丸中小檗碱的含量[J].青海医药杂志，2007，37（3）：56-57.
[4] 國家食品药品监督管理局.六味明目丸标准[J].国家药品标准颁布件，批件号：（2011）国药标字ZD-0089号.