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[摘 要]随着人们对健康意识的增强，对保健食品的需求也越来越大，市场上出现了很多食品多糖提取物生产厂家，多糖提取物往往以标示含量作为定价的标准，含量越高，定价也要高很多。本文将主要探讨多糖含量的测定方法及其应用。
[关键词]多糖提取物；测定；食品
中图分类号：GT5 文献标识码：B 文章编号：1009-914X（2014）22-0386-01
多糖的含量测定方法有分光光度法、离子交换色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、凝胶电泳法等。目前国内多采用显色试剂-硫酸法，根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解，脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物来测定多糖[1]。
一、多糖含量的测定方法
1.苯酚一硫酸法
多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，可与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。此化合物在490nm处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中多糖的含量成正比，可用比色法测定其含量，以此计算样品中粗多糖含量。即样品用热水溶解后，乙醇沉淀，过滤，滤渣用水溶解定容。取一定样品测定液于比色管中先后加入苯酚、浓硫酸混匀，置于沸水中保温15rain，冷却，用分光光度计在490nm处测定吸光度值。
2.蒽酮一硫酸法
样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。样品液中的糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基糖醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，在620nm处有特征吸收。由于蒽酮反应较为迅速，李利军等提出改进的蒽酮一硫酸法。即直接利用硫酸与水发生水合作用时释放的热量，使反应体系自行升温，达到充分显色，显色时间只需70s体系即达稳定，故此法操作更为简便，测定速度更快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析[2]。
3.刚果红显色法
在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。由此杜海燕等建立了定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。即试管中依次加入刚果红溶液、氢氧化钠溶液和芦荟多糖溶液，摇匀。静置20rain后注入比色皿，以水作参比，在540nm波长处测定吸光度。此方法具有操作简便、快速、选择性好，常见多糖、低聚糖和单糖无干扰或干扰较小等特点。
4.毛细管电泳（CE）
CE是利用带电粒子在高压电场中由于迁移速率不同而达到分离目的的一种新技术。其检测方式有紫外可见检测、激光诱导荧光检测、电化学检测等。但糖类物质既不带电，也无紫外吸收基团和荧光基团，所以不能直接利用CE对其进行分离分析。因此要用CE对糖进行分离应从两个方面考虑，即使糖带电或对糖进行衍生化，使其具有紫外吸收基团和荧光基团。目前，对多糖分离分析是建立在对单糖和寡糖的毛细管电泳分析的基础上，先用酶解和化学水解使糖链分解为单糖和寡糖，再对其进行分离分析，因此对多糖的分析主要是对多糖所含糖原的分析。Wang等首次利用毛细管区带电泳一安培检测法测定了中国女贞多糖的成分，研究发现女贞多糖水解产生的4种单糖在30rain内能被很好地分离，在铜电极上有很强的电流响应信号，方法的检出限和线性范围令人满意[3]。
5.气相色谱法
气相色谱法是分析多糖的有力工具，它具有选择性强、分辨力好、灵敏度高、快速等优点。但因糖类本身没有足够的挥发性，必须在进行气相色谱前，将糖类转化成易挥发、对热较稳定的衍生物。目前常用的衍生物有糖的甲基醚、三甲基硅醚、糖腈乙酸酯衍生物等。崔莉凤等将芦荟及芦荟干粉样品中的多糖水解为单糖之后再衍生化，以木糖醇为内标物，用OV-225与OS-138为色谱柱固定液，使衍生物得到了很好的分离，此方法对检验芦荟制品多糖的含量具有实用价值。
二、多糖含量测定的应用
1.材料与试剂
三氟乙酸、盐酸羟胺、无水吡啶、无水醋酸酐、氯仿、咔唑、浓硫酸、无水乙醇、苯酚、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、甲醇、氢氧化钠、盐酸、磷酸二氢钾（均为分析纯）国药集团药业股份有限公司；乙腈（色谱纯）美国Fisher公司；D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、meso-赤藓醇美国Sigma公司；实验用水为双重蒸馏水[4]。
2.仪器与设备
6890气相色谱仪（配有FID氢火焰检测器）美国惠普公司；1200高效液相色谱仪（配有G1314紫外检测器） 美国Agilent公司；TU-1901紫外分光光度计北京普析通用仪器有限公司；TG16W高速离心机长沙平凡仪器仪表有限公司；N-1001旋转蒸发仪上海爱朗仪器有限公司。
3.气相色谱与液相色谱条件
气相色谱条件：色谱柱为DB-1701石英毛细柱（30m×0.32mm，0.25μm）；升温程序：190℃保持5min，以8℃/min升至260℃；载气N2流速1.5mL/min，进样量1μL；分流比为20：1。液相色谱条件：色谱柱为AlltimaC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈与0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液（氢氧化钠调节pH6.90）；柱温30℃；流速1mL/min。
4.实验结果
取7份同一枸杞多糖样品，进行平行测定，测定鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸面積的RSD值分别为4.17%、1.79%、7.31%、5.78%、6.16%、6.08%、7.50%。
计算LBP-1中各单糖的物质的量比为阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：鼠李糖：甘露糖：木糖= 7.17：3.05：1：0.90：0.35：0.23，半乳糖醛酸含量为10%。
采用2010年版药典中枸杞多糖测定方法，以葡萄糖做标准曲线，测得LBP-1中枸杞多糖含量为14%，但是如果按照该样品中不同单糖的含量物质的量比配制标准曲线，测得LBP-1中枸杞多糖含量为30%，由此可见，单纯采用葡萄糖做标准曲线测得的结果要小于实际结果。
参考文献
[1] 张华.灰树花多糖咀嚼片中多糖含量测定[J].北方药学，2014，02：19.
[2] 陈黎，朱海涛，杜士明，陈科力.鄂西北地区白及的多糖含量研究[J].中国药师，2014，01：62-64.
[3] 盖成，张丽娟，范国强.枸杞子提取物中多糖含量测定方法研究[J].现代仪器与医疗，2013，01：70-72+66.
[4] 霍文，劳凤云，姚熠辰.不同产地刺五加不同部位多糖含量测定[J].中国执业药师，2013，02：19-22.
[关键词]多糖提取物；测定；食品
中图分类号：GT5 文献标识码：B 文章编号：1009-914X（2014）22-0386-01
多糖的含量测定方法有分光光度法、离子交换色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、凝胶电泳法等。目前国内多采用显色试剂-硫酸法，根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解，脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物来测定多糖[1]。
一、多糖含量的测定方法
1.苯酚一硫酸法
多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，可与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。此化合物在490nm处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中多糖的含量成正比，可用比色法测定其含量，以此计算样品中粗多糖含量。即样品用热水溶解后，乙醇沉淀，过滤，滤渣用水溶解定容。取一定样品测定液于比色管中先后加入苯酚、浓硫酸混匀，置于沸水中保温15rain，冷却，用分光光度计在490nm处测定吸光度值。
2.蒽酮一硫酸法
样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。样品液中的糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基糖醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，在620nm处有特征吸收。由于蒽酮反应较为迅速，李利军等提出改进的蒽酮一硫酸法。即直接利用硫酸与水发生水合作用时释放的热量，使反应体系自行升温，达到充分显色，显色时间只需70s体系即达稳定，故此法操作更为简便，测定速度更快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析[2]。
3.刚果红显色法
在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。由此杜海燕等建立了定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。即试管中依次加入刚果红溶液、氢氧化钠溶液和芦荟多糖溶液，摇匀。静置20rain后注入比色皿，以水作参比，在540nm波长处测定吸光度。此方法具有操作简便、快速、选择性好，常见多糖、低聚糖和单糖无干扰或干扰较小等特点。
4.毛细管电泳（CE）
CE是利用带电粒子在高压电场中由于迁移速率不同而达到分离目的的一种新技术。其检测方式有紫外可见检测、激光诱导荧光检测、电化学检测等。但糖类物质既不带电，也无紫外吸收基团和荧光基团，所以不能直接利用CE对其进行分离分析。因此要用CE对糖进行分离应从两个方面考虑，即使糖带电或对糖进行衍生化，使其具有紫外吸收基团和荧光基团。目前，对多糖分离分析是建立在对单糖和寡糖的毛细管电泳分析的基础上，先用酶解和化学水解使糖链分解为单糖和寡糖，再对其进行分离分析，因此对多糖的分析主要是对多糖所含糖原的分析。Wang等首次利用毛细管区带电泳一安培检测法测定了中国女贞多糖的成分，研究发现女贞多糖水解产生的4种单糖在30rain内能被很好地分离，在铜电极上有很强的电流响应信号，方法的检出限和线性范围令人满意[3]。
5.气相色谱法
气相色谱法是分析多糖的有力工具，它具有选择性强、分辨力好、灵敏度高、快速等优点。但因糖类本身没有足够的挥发性，必须在进行气相色谱前，将糖类转化成易挥发、对热较稳定的衍生物。目前常用的衍生物有糖的甲基醚、三甲基硅醚、糖腈乙酸酯衍生物等。崔莉凤等将芦荟及芦荟干粉样品中的多糖水解为单糖之后再衍生化，以木糖醇为内标物，用OV-225与OS-138为色谱柱固定液，使衍生物得到了很好的分离，此方法对检验芦荟制品多糖的含量具有实用价值。
二、多糖含量测定的应用
1.材料与试剂
三氟乙酸、盐酸羟胺、无水吡啶、无水醋酸酐、氯仿、咔唑、浓硫酸、无水乙醇、苯酚、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、甲醇、氢氧化钠、盐酸、磷酸二氢钾（均为分析纯）国药集团药业股份有限公司；乙腈（色谱纯）美国Fisher公司；D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、meso-赤藓醇美国Sigma公司；实验用水为双重蒸馏水[4]。
2.仪器与设备
6890气相色谱仪（配有FID氢火焰检测器）美国惠普公司；1200高效液相色谱仪（配有G1314紫外检测器） 美国Agilent公司；TU-1901紫外分光光度计北京普析通用仪器有限公司；TG16W高速离心机长沙平凡仪器仪表有限公司；N-1001旋转蒸发仪上海爱朗仪器有限公司。
3.气相色谱与液相色谱条件
气相色谱条件：色谱柱为DB-1701石英毛细柱（30m×0.32mm，0.25μm）；升温程序：190℃保持5min，以8℃/min升至260℃；载气N2流速1.5mL/min，进样量1μL；分流比为20：1。液相色谱条件：色谱柱为AlltimaC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈与0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液（氢氧化钠调节pH6.90）；柱温30℃；流速1mL/min。
4.实验结果
取7份同一枸杞多糖样品，进行平行测定，测定鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸面積的RSD值分别为4.17%、1.79%、7.31%、5.78%、6.16%、6.08%、7.50%。
计算LBP-1中各单糖的物质的量比为阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：鼠李糖：甘露糖：木糖= 7.17：3.05：1：0.90：0.35：0.23，半乳糖醛酸含量为10%。
采用2010年版药典中枸杞多糖测定方法，以葡萄糖做标准曲线，测得LBP-1中枸杞多糖含量为14%，但是如果按照该样品中不同单糖的含量物质的量比配制标准曲线，测得LBP-1中枸杞多糖含量为30%，由此可见，单纯采用葡萄糖做标准曲线测得的结果要小于实际结果。
参考文献
[1] 张华.灰树花多糖咀嚼片中多糖含量测定[J].北方药学，2014，02：19.
[2] 陈黎，朱海涛，杜士明，陈科力.鄂西北地区白及的多糖含量研究[J].中国药师，2014，01：62-64.
[3] 盖成，张丽娟，范国强.枸杞子提取物中多糖含量测定方法研究[J].现代仪器与医疗，2013，01：70-72+66.
[4] 霍文，劳凤云，姚熠辰.不同产地刺五加不同部位多糖含量测定[J].中国执业药师，2013，02：19-22.