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摘要：在同期发情方案中，为更加科学合理地使用CUE-MATE阴道埋置栓，提高移植妊娠率，对同批次2组西门塔尔杂交受体牛分别埋植CUE-MATE和CIDR，使用相同同期发情方案，比较发情率，并对CUE-MATE方案中不同发情时间阶段的牛群移植受胎率进行对比分析。结果表明：埋植不同阴道栓的受体牛发情率均在90%以上，差异不显著（90.38% vs 90.00%，P>0.05）；两地埋植CUE-MATE不同发情时间的受体牛群，移植鲜胚妊娠率无差异（100% vs 100%，P>0.05；100% vs 80%，P>0.05），移植冻胚妊娠率差异不显著（41.18% vs 28.57%，P>0.05；5769% vs 33.33%，P>0.05），提前发情组冻胚妊娠率下降趋势明显。使用CUE-MATE同期发情时，撤栓时间应推迟10～12 h，使得胚胎移植时受体内环境与胚胎发育阶段相一致，保证鲜胚和冻胚均可获得较理想的受胎率。
关键词：同期发情；受体牛；妊娠率；CUE-MATE；CIDR；冻胚；鲜胚
中图分类号： S823.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0213-02
收稿日期：2013-10-14
基金项目：国家科技支撑计划（编号：2011BAD19B01）；石家庄国际科技合作计划（编号：12750066A）；国家农业科技成果转化资金（编号：2013GB2A200043）。
作者简介：陈龙（1982—），男，甘肃兰州人，硕士，畜牧师，主要从事动物繁殖生物技术研究。E-mail：chenlong42451@163.com。
通信作者：余文莉，博士，研究员，主要从事动物繁殖生物技术研究。Tel：（010）84924137；E-mail：anboyuwenli@hotmail.com。為提高奶牛的繁殖率，缩短产犊间隔，在牧场繁育管理或者大规模胚胎移植操作中，有必要使用阴道埋植栓等设备进行同期发情。市面上用于同期发情的阴道栓主要有2种：CUE-MATE与CIDR[1-2]，其主要药物成分是孕酮，含量分别为1.56 g和1.38 g，附着载体为白色螺旋硅胶软体（图1）。作用原理是阴道栓埋植入阴道后，缓慢恒定低剂量释放孕酮，经阴道黏膜吸收直接到达靶器官，通过负反馈作用抑制垂体前叶促性腺激素及其他生长因子的产生，而外源孕激素作用期间不影响黄体的自然消退；维持一定时间后撤栓，体内孕酮含量急剧下降，卵泡发育到成熟的抑制解除，使卵泡细胞发育成熟，同时在雌激素作用下，母牛在同一时间段内表现发情状况[3-4]。
在胚胎移植实践中，对同批次受体牛分别埋植CUE-MATE和CIDR，使用成熟的21 d方案进行受体牛同期发情，CUE-MATE处理组部分牛群集体提前发情。本试验对CUE-MATE方案中不同发情时间的牛群移植阴道栓，并对受胎率进行对比分析，优化适用于CUE-MATE的同期发情方案，以提高胚胎移植妊娠率。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1受体牛河北天和肉牛养殖有限公司和张北华田牧业提供的2胎以内西门塔尔杂交受体牛：产后70 d以上，繁殖系统正常，卵巢有活性，膘情适中。
1.1.2药品CUE-MATE孕酮栓，由新西兰Bioniche Animal Health Pty公司生产，含孕酮1.56 g/支；CIDR孕酮栓，由美国辉瑞动物保健品公司生产，含孕酮1.38 g/支；促卵泡素（FSH），由中科院动物所生产，10 mg/瓶；氯前列烯醇（PG），由齐鲁动物保健品公司生产，0.322 mg/支；维生素ADE、高锰酸钾、利多卡因等选用国产优质产品。
1.2方法
1.2.1受体牛同期发情方案（CIDR/CUE-MATE+PG方法）在发情周期的任何一天08：00—10：00放置阴道栓（土霉素粉+CIDR或土霉素粉+CUE-MATE），同时肌注维生素ADE注射液5 mL/头，当日记为0 d；9 d时的08：00同时肌注PG 0.6 mg/头和维生素ADE注射液5 mL/头；12 d时的08：00撤栓；13～14 d全天观察发情，准确记录；21 d进行胚胎移植。
1.2.2受体牛发情鉴定13～14 d（撤栓后24 h）开始观察发情并记录，以站立稳定、接收爬跨为标准。撤栓后24～36 h接受爬跨定义为提前发情，36～60 h为正常发情。
1.2.3受体牛胚胎移植直肠检查受体牛黄体发育状况及子宫健康状况，结合发情记录确定移植头数，保定牛只，高锰酸钾温水清洗外阴，采用尾椎硬膜外注射5 mL利多卡因方法麻醉，待尾部松弛后进行非手术法移植，胚胎移入黄体发育侧的子宫角深部。
1.2.4妊娠检查胚胎移植后50～60 d采用直肠把握法进行妊娠检查。
1.3试验数据分析
运用卡方检验（χ2）作显著性分析。
2结果与分析
2.1埋植不同阴道栓的受体牛发情时间比较
选择同批次受体牛分为2组，埋植CUE-MATE和CIDR阴道栓，实施相同的同期发情方案并撤栓后观察发情。由表1可见，2组受体牛发情率均在90%以上，差异不显著（9038% vs 90.00%，P>0.05）；CUE-MATE组撤栓后24～36 h有15头发情，即提前发情，CIDR组撤栓后只有1头提前发情，其他集中在36～60 h发情，两者差异显著（28.85% vs 250%，P<0.05）。
3讨论与结论
同期发情的目的是能够使受体牛在预期时间范围内集中发情、排卵。目前同期发情的方法已由单纯一类激素制剂向阴道栓和激素制剂配合使用方向发展，如近年来发展起来的CIDR+PG、CUE-MATE+PG法等[5-7]。和占星等将CUE-MATE+PG法同期发情方案与2次PG法相比，前者同期化程度和可移植率更高，更适用于规模化牧场集中应用[5，8]。本试验中受体牛使用CIDR和CUE-MATE 2种阴道栓的同期发情率均高于90%，但是，组间受体牛发情时间出现了差异，CIDR组在撤栓后36 h左右开始正常发情，CUE-MATE组有近1/3牛在撤栓后24 h即出现发情现象，这可能是由于CUE-MATE中孕酮含量较高（1.56 g/支 vs 1.38 g/支），缓释的孕酮在血浆中浓度也高于CIDR组[9]，对卵泡发育的负反馈抑制作用更强，撤栓后孕酮水平急剧下降更明显，刺激促性腺激素释放激素水平升高，促进卵泡发育并成熟的速度更快，因而表现出发情提前的现象。 两地牧场受体牛均埋植CUE-MATE，实施相同的21 d同期发情方案，都出现一定比例的提前发情牛。以撤栓后 36 h 为界，根据发情时间分组统计移植妊娠率，提前发情牛与正常发情牛的鲜胚和冻胚移植的妊娠率无差异，但是冻胚移植妊娠率前者降低12.61～24.36百分点。这主要是由于正常发情牛集中在撤栓后36～60 h发情，21 d移植正好是受体牛发情后7～7.5 d，保证了胚胎发育阶段与受体生理状况的一致性；而提前发情牛集中在撤栓后24～36 h发情，21 d移植时受体牛处于发情后8 d，一方面冻胚经历的冻融过程及冷冻保护剂毒性对胚胎细胞骨架、线粒体及透明带超微结构造成了一定程度不可逆的物理和化学损伤[10]，降低其与母体妊娠信号识别的能力[11]，另一方面冷冻胚胎解冻后复苏需要一个过程，使其在子宫内的发育滞后于鲜胚，这一滞后也使冻胚与提前发情的受体的同步差更大。因此，冻胚在发情后8 d移植会低于发情后7～7.5 d移植的妊娠率，也低于同时期发情的鲜胚移植妊娠率。
使用CUE-MATE栓处理受体牛群，建议受体牛撤栓時间较常规CIDR方案推迟10～12 h，其他保持一致，以使得胚胎移植时受体所处时间与胚胎发育阶段相一致，保证鲜胚和冻胚均可获得较理想的受胎率。另外，CUE-MATE与CIDR相比较，其栓枪设计直径较粗，装枪略显复杂，埋植速度较慢，但是螺旋软体与软骨支架可以方便分离，便于清洗及重复使用，并且持栓率高，达到100%。在实际生产中，须考虑牛群规模、月龄、膘情和日程安排等因素，挑选适宜的阴道栓用于生产，同时结合发情观察，提高繁殖率。
参考文献：
[1]赵克树，张卫华. CUE-MATE型硅胶栓孕激素阴道埋置系统处理发情延迟母牛同期发情效果观察[J]. 奶牛杂志，2011（3）：61-62.
[2]巴特尔，孙伟，苏和，等. 荷斯坦牛生产体内性控胚胎的试验研究[J]. 中国奶牛，2012（11）：22-25.
[3]梁成. 阴道栓在奶牛繁殖方面的应用[C]//中国奶业协会年会论文集2008：上册. 北京：中国奶业协会，2008：135-136.
[4]梁坤. 牛胚胎移植技术[J]. 黑龙江动物繁殖，2010，18（1）：59-62.
[5]和占星，王喆，文际坤，等. CUE-MATE、PGF2α诱导受体奶牛同期发情的效果[J]. 中国畜牧杂志，2004，40（4）：28-30.
[6]吕善潮，王丽云，张胜利. 母牛发情控制技术研究进展[J]. 上海畜牧兽医通讯，2010（1）：24-25.
[7]鲁立刚，贾银海，金深逊，等. 不同同期发情处理方法对威宁黄牛胚胎移植效果的影响研究[J]. 中国牛业科学，2011，37（6）：32-34.
[8]李静，王海军，哈克木，等. CUE-MATE诱导新疆褐牛同期发情试验[J]. 中国牛业科学，2009，35（6）：25-27.
[9]Rogan D，Martinez M F，Bo G A，et al. 16 Progesterone release patterns from cue-mate in comparison to other intravaginal progesterone-releasing devices in lactating dairy cows[J]. Reproduction Fertility and Development，2006，19（1）：126-127.
[10]张慧，苏雷. 家畜胚胎冷冻与胚胎结构损伤的研究[J]. 养殖技术顾问，2009（6）：144-146.
[11]毕江华，冯春涛，余文莉，等. 妊娠识别信号影响牛胚胎移植妊娠率的研究[J]. 中国奶牛，2012（15）：20-22.
关键词：同期发情；受体牛；妊娠率；CUE-MATE；CIDR；冻胚；鲜胚
中图分类号： S823.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0213-02
收稿日期：2013-10-14
基金项目：国家科技支撑计划（编号：2011BAD19B01）；石家庄国际科技合作计划（编号：12750066A）；国家农业科技成果转化资金（编号：2013GB2A200043）。
作者简介：陈龙（1982—），男，甘肃兰州人，硕士，畜牧师，主要从事动物繁殖生物技术研究。E-mail：chenlong42451@163.com。
通信作者：余文莉，博士，研究员，主要从事动物繁殖生物技术研究。Tel：（010）84924137；E-mail：anboyuwenli@hotmail.com。為提高奶牛的繁殖率，缩短产犊间隔，在牧场繁育管理或者大规模胚胎移植操作中，有必要使用阴道埋植栓等设备进行同期发情。市面上用于同期发情的阴道栓主要有2种：CUE-MATE与CIDR[1-2]，其主要药物成分是孕酮，含量分别为1.56 g和1.38 g，附着载体为白色螺旋硅胶软体（图1）。作用原理是阴道栓埋植入阴道后，缓慢恒定低剂量释放孕酮，经阴道黏膜吸收直接到达靶器官，通过负反馈作用抑制垂体前叶促性腺激素及其他生长因子的产生，而外源孕激素作用期间不影响黄体的自然消退；维持一定时间后撤栓，体内孕酮含量急剧下降，卵泡发育到成熟的抑制解除，使卵泡细胞发育成熟，同时在雌激素作用下，母牛在同一时间段内表现发情状况[3-4]。
在胚胎移植实践中，对同批次受体牛分别埋植CUE-MATE和CIDR，使用成熟的21 d方案进行受体牛同期发情，CUE-MATE处理组部分牛群集体提前发情。本试验对CUE-MATE方案中不同发情时间的牛群移植阴道栓，并对受胎率进行对比分析，优化适用于CUE-MATE的同期发情方案，以提高胚胎移植妊娠率。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1受体牛河北天和肉牛养殖有限公司和张北华田牧业提供的2胎以内西门塔尔杂交受体牛：产后70 d以上，繁殖系统正常，卵巢有活性，膘情适中。
1.1.2药品CUE-MATE孕酮栓，由新西兰Bioniche Animal Health Pty公司生产，含孕酮1.56 g/支；CIDR孕酮栓，由美国辉瑞动物保健品公司生产，含孕酮1.38 g/支；促卵泡素（FSH），由中科院动物所生产，10 mg/瓶；氯前列烯醇（PG），由齐鲁动物保健品公司生产，0.322 mg/支；维生素ADE、高锰酸钾、利多卡因等选用国产优质产品。
1.2方法
1.2.1受体牛同期发情方案（CIDR/CUE-MATE+PG方法）在发情周期的任何一天08：00—10：00放置阴道栓（土霉素粉+CIDR或土霉素粉+CUE-MATE），同时肌注维生素ADE注射液5 mL/头，当日记为0 d；9 d时的08：00同时肌注PG 0.6 mg/头和维生素ADE注射液5 mL/头；12 d时的08：00撤栓；13～14 d全天观察发情，准确记录；21 d进行胚胎移植。
1.2.2受体牛发情鉴定13～14 d（撤栓后24 h）开始观察发情并记录，以站立稳定、接收爬跨为标准。撤栓后24～36 h接受爬跨定义为提前发情，36～60 h为正常发情。
1.2.3受体牛胚胎移植直肠检查受体牛黄体发育状况及子宫健康状况，结合发情记录确定移植头数，保定牛只，高锰酸钾温水清洗外阴，采用尾椎硬膜外注射5 mL利多卡因方法麻醉，待尾部松弛后进行非手术法移植，胚胎移入黄体发育侧的子宫角深部。
1.2.4妊娠检查胚胎移植后50～60 d采用直肠把握法进行妊娠检查。
1.3试验数据分析
运用卡方检验（χ2）作显著性分析。
2结果与分析
2.1埋植不同阴道栓的受体牛发情时间比较
选择同批次受体牛分为2组，埋植CUE-MATE和CIDR阴道栓，实施相同的同期发情方案并撤栓后观察发情。由表1可见，2组受体牛发情率均在90%以上，差异不显著（9038% vs 90.00%，P>0.05）；CUE-MATE组撤栓后24～36 h有15头发情，即提前发情，CIDR组撤栓后只有1头提前发情，其他集中在36～60 h发情，两者差异显著（28.85% vs 250%，P<0.05）。
3讨论与结论
同期发情的目的是能够使受体牛在预期时间范围内集中发情、排卵。目前同期发情的方法已由单纯一类激素制剂向阴道栓和激素制剂配合使用方向发展，如近年来发展起来的CIDR+PG、CUE-MATE+PG法等[5-7]。和占星等将CUE-MATE+PG法同期发情方案与2次PG法相比，前者同期化程度和可移植率更高，更适用于规模化牧场集中应用[5，8]。本试验中受体牛使用CIDR和CUE-MATE 2种阴道栓的同期发情率均高于90%，但是，组间受体牛发情时间出现了差异，CIDR组在撤栓后36 h左右开始正常发情，CUE-MATE组有近1/3牛在撤栓后24 h即出现发情现象，这可能是由于CUE-MATE中孕酮含量较高（1.56 g/支 vs 1.38 g/支），缓释的孕酮在血浆中浓度也高于CIDR组[9]，对卵泡发育的负反馈抑制作用更强，撤栓后孕酮水平急剧下降更明显，刺激促性腺激素释放激素水平升高，促进卵泡发育并成熟的速度更快，因而表现出发情提前的现象。 两地牧场受体牛均埋植CUE-MATE，实施相同的21 d同期发情方案，都出现一定比例的提前发情牛。以撤栓后 36 h 为界，根据发情时间分组统计移植妊娠率，提前发情牛与正常发情牛的鲜胚和冻胚移植的妊娠率无差异，但是冻胚移植妊娠率前者降低12.61～24.36百分点。这主要是由于正常发情牛集中在撤栓后36～60 h发情，21 d移植正好是受体牛发情后7～7.5 d，保证了胚胎发育阶段与受体生理状况的一致性；而提前发情牛集中在撤栓后24～36 h发情，21 d移植时受体牛处于发情后8 d，一方面冻胚经历的冻融过程及冷冻保护剂毒性对胚胎细胞骨架、线粒体及透明带超微结构造成了一定程度不可逆的物理和化学损伤[10]，降低其与母体妊娠信号识别的能力[11]，另一方面冷冻胚胎解冻后复苏需要一个过程，使其在子宫内的发育滞后于鲜胚，这一滞后也使冻胚与提前发情的受体的同步差更大。因此，冻胚在发情后8 d移植会低于发情后7～7.5 d移植的妊娠率，也低于同时期发情的鲜胚移植妊娠率。
使用CUE-MATE栓处理受体牛群，建议受体牛撤栓時间较常规CIDR方案推迟10～12 h，其他保持一致，以使得胚胎移植时受体所处时间与胚胎发育阶段相一致，保证鲜胚和冻胚均可获得较理想的受胎率。另外，CUE-MATE与CIDR相比较，其栓枪设计直径较粗，装枪略显复杂，埋植速度较慢，但是螺旋软体与软骨支架可以方便分离，便于清洗及重复使用，并且持栓率高，达到100%。在实际生产中，须考虑牛群规模、月龄、膘情和日程安排等因素，挑选适宜的阴道栓用于生产，同时结合发情观察，提高繁殖率。
参考文献：
[1]赵克树，张卫华. CUE-MATE型硅胶栓孕激素阴道埋置系统处理发情延迟母牛同期发情效果观察[J]. 奶牛杂志，2011（3）：61-62.
[2]巴特尔，孙伟，苏和，等. 荷斯坦牛生产体内性控胚胎的试验研究[J]. 中国奶牛，2012（11）：22-25.
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[4]梁坤. 牛胚胎移植技术[J]. 黑龙江动物繁殖，2010，18（1）：59-62.
[5]和占星，王喆，文际坤，等. CUE-MATE、PGF2α诱导受体奶牛同期发情的效果[J]. 中国畜牧杂志，2004，40（4）：28-30.
[6]吕善潮，王丽云，张胜利. 母牛发情控制技术研究进展[J]. 上海畜牧兽医通讯，2010（1）：24-25.
[7]鲁立刚，贾银海，金深逊，等. 不同同期发情处理方法对威宁黄牛胚胎移植效果的影响研究[J]. 中国牛业科学，2011，37（6）：32-34.
[8]李静，王海军，哈克木，等. CUE-MATE诱导新疆褐牛同期发情试验[J]. 中国牛业科学，2009，35（6）：25-27.
[9]Rogan D，Martinez M F，Bo G A，et al. 16 Progesterone release patterns from cue-mate in comparison to other intravaginal progesterone-releasing devices in lactating dairy cows[J]. Reproduction Fertility and Development，2006，19（1）：126-127.
[10]张慧，苏雷. 家畜胚胎冷冻与胚胎结构损伤的研究[J]. 养殖技术顾问，2009（6）：144-146.
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