【摘 要】
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为建立一种猪德尔塔病毒(PDCoV)的快速检测方法,本研究根据NCBI公布的PDCoV序列设计了1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增PDCoV的S基因,将其连接至pMD 19-T载体上,以构建正确
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院,南宁530004;广西壮族自治区动物疫病控制中心,南宁530000;军事科学院军事兽医研究所,长春130122;温州大学病毒学研究所,温州325035
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为建立一种猪德尔塔病毒(PDCoV)的快速检测方法,本研究根据NCBI公布的PDCoV序列设计了1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增PDCoV的S基因,将其连接至pMD 19-T载体上,以构建正确的重组质粒作为标准品,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了验证分析.结果 显示:该检测方法在标准品浓度为6.26×101～6.26×108 copies/μL范围内呈良好线性关系,其相关性为0.999,斜率为-4.312;灵敏度良好,检测下限可达6.26×101 copies/μL;特异性良好,对PEDV和TGEV两种猪常见病原均无特异性扩增;重复性好,组内和组间变异系数均小于2.0％;利用该方法对43份临床样品进行检测,PDCoV阳性率为4.6％.结果 表明,本研究成功建立了PDCoV的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,为PDCoV快速灵敏的诊断奠定了坚实基础.
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