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摘要[目的]了解我国地方鸡种禽白血病的自然感染状态，为今后该病的净化提供依据。[方法]采用ELISA法和病毒分离方法，对国内10个地方鸡种开展了ALVAB和ALVJ主要外源性禽白血病流行病学调查，并进一步对其中4个品系的F2代鸡群进行ALV跟踪监测，同时对饲养过程中使用的弱毒活疫苗也进行了ALV抽样检测。[结果]ALVP27抗原阳性率为0～62.1%，ALVAB抗体阳性率为0～25.0%，ALVJ抗体阳性率为0～59.0%，病毒分离阳性率为0～22.0%。4个品系的F2代鸡群1日龄胎粪ALVP27抗原阳性率为6.0%～67.0%，6周龄病毒分离检测阳性率为2.0%～34.3%；国内有1个厂家2个种类2个批次的疫苗分离有ALV。[结论]我国地方鸡种普遍存在ALV感染，不同地方鸡种间差异较大，可能与不同地方鸡种对ALV的遗传抗性有关；某些品系种群的F2代雏鸡ALV阳性率甚至略有提高，可能与疫苗接种污染有关。
关键词地方鸡种；禽白血病；流行病学调查
中图分类号S851.34+7.2文献标识码A文章编号0517-6611（2016）04-133-03
Epidemiological Investigation of Avian Leukemia in Some Indigenous Chicken
FAN Jianhua1，DAI Youli1*，YU Yan1， XU Bu1* et al（1. Jiangsu Institute of Poultry Science， Yangzhou， Jiangsu 225125）
Abstract[Objective] To find the nature infection status of avian leukemia in some indigenous chicken. [Method] By using the method of ELISA method and virus isolation method， we investigated the ALVAB and ALVJ avian leukemia of ten indigenous chicken. ALV monitoring was carried out by the second generation of chickens in four lines. ALV sampling inspection was adopted for the modifiedlive vaccine in raising process. [Result]The ALVP27 antigen positive rate was 0-62.1%； ALVAB antibody positive rate was 0-25.0%； ALVJ antibody positive rate was 0-59.0%； positive rate of virus separation was 0-22.0%. ALVP27 antigen positive rate from the offsprings of four lines was 6.0%-67.0%. Positive rate of virus isolation test was 2.0%-34.3% at the age of sixweek old. Two kinds of vaccines from two batches produced by a manufacturer were polluted by ALV. [Conclusion] Most indigenous chicken are infected by ALV. There are great differences among the different breeds of indigenous chicken， which might be related to the ALV genetic resistance of different indigenous chicken. ALV positive rate of F2 chicks have enhanced slightly in some populations， which might be related to the vaccination pollution.
Key wordsIndigenous chicken； Avian leucosis virus （ALV）； Epidemiological investigation
禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的一種垂直传播性疾病[1-2]。ALV属于单股RNA反转录病毒，目前已发现能自然感染鸡群的ALV只有A～E、J 6个亚群，其中除E亚型为内源性病毒以外，其他均为外源性病毒。外源性ALV均具有较强的致病性，特别是AB和J亚型ALV流行最普遍，危害性也最大[2]。禽白血病的危害主要表现为感染鸡群出现肿瘤疾病及其所导致的慢性消耗性死亡、生产性能下降和免疫抑制等，严重时还影响鸡蛋（胚）源细胞的利用，威胁着民生和社会安定[3]。该病在我国养鸡场的发生与发展，起初进口白羽肉鸡被感染，后来又迅速传播至黄羽肉鸡和进口蛋鸡，近期陆续有地方鸡种患病的报道[4]。由于目前禽白血病尚无商品化疫苗和特效治疗药物，目前防制AB和J亚型ALV以及其他外源性禽白血病的最有效手段是检测和淘汰阳性鸡群[4]。
早期了解鸡群ALV自然感染状态，开展ALV流行病学调查与研究，是制定ALV检测和净化方案与实施种鸡群禽白血病净化的必要措施。笔者对国内10个不同地方鸡种的蛋清、胎粪和血浆等样品开展抗原、抗体和病毒分离等检测，并进一步对F2代雏鸡进行了ALV追踪，同时还对饲养过程中使用的不同弱毒活疫苗也进行了ALV抽检检测，旨在为今后进一步开展ALV净化及地方鸡种抗病育种研究等提供理论依据。 1材料与方法
1.1材料
1.1.1试剂与耗材。ALVp27抗原、ALVAB及ALVJ抗体检测试剂盒，均购自美国IDEXX公司；胎牛血清和DMEM均购自HyClone公司；其他试剂均为国产分析纯，购自南京誉日生物科技有限公司。试验用DF1细胞由山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病实验室馈赠。
1.1.2试验鸡群及检测样本。
1.1.2.1ALV初次流调试验鸡选择及样本采集。随机选取绿壳蛋鸡、仙居鸡、芦花鸡、琅琊鸡、崇仁麻鸡等10个地方品系不同日龄段（71～435 d）鸡各100只，翅静脉采血，1 500 r/min离心3 min后，分离上清置于4 ℃冰箱中冷藏备检；所有母鸡取对应2枚新鲜鸡蛋蛋清，-20 ℃下反复冻融3次后备检。
1.1.2.2ALV追踪监测的F2代雏鸡选择及样本采集。随机选取绿壳蛋鸡鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡等F2代雏鸡各100只，1日龄取胎粪，液氮冻融1次后备检；6周龄采翅静脉血，1 500 r/min离心3 min后，分离上清置于4 ℃下冷藏备检。
1.2检测方法及阳性结果判定ALV-p27抗原、ALV-AB及ALV-J抗体检测方法及结果判定均按照美国IDEXX公司生产的ELISA检测试剂盒说明书进行；DF-1细胞病毒分离按照山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病实验室提供的方法进行[5]。对于母鸡对应2枚蛋蛋清的检测，只要有1枚为阳性，就判定该鸡鸡蛋蛋清检测结果为阳性。
2结果与分析
2.110个地方品系鸡的ALV流行病调查结果由表1可知，蛋清ALV-p27抗原阳性检出率为0～62.1%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是文昌鸡和萧山鸡；ALV-AB抗体阳性检出率为0～25.0%，阳性率最高的是崇仁麻鸡，阳性率最低的是琅琊鸡、瓢鸡、文昌鸡、萧山鸡和固始鸡；ALV-J抗体阳性检出率为0～59.0%，阳性率最高的是芦花鸡，阳性率最低的是白耳鸡；病毒分离阳性检出率为0～22.0%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是白耳鸡和萧山鸡；抗原、ALV-J抗体和病毒分离阳性率均超过20.0%的为绿壳蛋鸡。ALV-J抗体阳性检出率普遍高于ALV-AB抗体，说明ALV-J可能是该原种场禽白血病感染的主要病原。
2.24个地方品系鸡F2代雏鸡ALV跟踪检测结果为进一步验证ALV对地方品系鸡的感染状态，同时也为初步了解ALV在地方雞种间可能造成传播的主要途径，在前期流行病学调查的基础上，选取绿壳蛋鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡等4个ALV阳性检出率具有代表性的鸡种作为此次监测研究对象，对4个鸡种的F2代雏鸡1日龄胎粪进行了ALV-p27抗原和6周龄血浆病毒分离检测。由表2可知，胎粪ALV-p27抗原阳性率为6.0%～67.8%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是瓢鸡；6周龄病毒分离阳性率为2.0%～34.3%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是白耳鸡。
2.34个鸡种2个世代病毒阳性检出率的比较根据美国ALV检测金标准经验，病毒分离阳性率是最能代表鸡群ALV的自然感染状态[5]。因此，该试验又对绿壳蛋鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡4个鸡种2个世代病毒阳性检出率进行了比较。从图1可以看出，绿壳蛋鸡、仙居鸡和芦花鸡阳性率均较F1代略有增加，只有瓢鸡还基本保持原有阳性率水平。这说明地方鸡种本身遗传特性决定着对ALV自然抗性差异，同时也说明种鸡垂直传播和横向感染是育雏期ALV传播的重要原因。
2.4日常饲养过程中ALV对疫苗污染情况抽检结果对该原种鸡场日常饲养过程中使用的4个厂家3个批次共计4个品种的弱毒活疫苗，进行了ALV病毒分离抽样检测。由表3可知，国内某厂家B生产的鸡痘苗和新支二联苗有ALV污染，而其他3个厂家未检出。
3讨论与结论
近年来，禽白血病的广泛传播与蔓延，给我国养鸡业造成了极大的经济损失，我国地方鸡种也面临着禽白血病的威胁。笔者对国内10个地方鸡种开展了ALV流行病学调查，结果表明地方鸡种较普遍存在或曾经感染过ALV，特别是J亚群ALV。张胜斌等[6]研究表明地方鸡种禽白血病阳性率较高。笔者选取4个鸡种对F2代雏鸡进行了ALV跟踪监测，并对饲养过程中所使用的弱毒活疫苗也进行了抽检。结果表明，有3个鸡种在剔除F1代阳性鸡的基础上，F2代阳性率仍有小幅度提高，有1个厂家2个批次的2个疫苗品种有ALV污染。由此推断，F1代可能有部分阳性鸡在检测期带毒或排毒[7]处于封闭阶段，因而造成漏检，致使F2代雏鸡因垂直传播和水平传播的放大效应，或者因疫苗污染造成的感染，阳性率略有增加。高玉龙等[8]和杨克礼等[9]也曾报道蛋媒传播和雏鸡阶段的横向传播以及疫苗污染等均是造成ALV感染的主要途径。胡艳等[10]和张娇[11]研究表明地方鸡种对鸡肠炎沙门氏菌和鸡马立克氏病感染率有较大差异。此次ALV流行病调查发现绿壳蛋鸡和仙居鸡等ALV有较高的阳性检出率，白耳鸡、瓢鸡和固始鸡等ALV阳性率较低，而白耳鸡和瓢鸡等F2代ALV阳性率仍处于较低水平。综上所述，我国地方鸡种对ALV等垂直传播性疾病的感染差异可能与我国地方鸡种遗传抗性相关，有待进一步研究。
参考文献
[1] SAIF Y M.禽病学[M].苏敬良，高福，索勋，译.11版.北京：中国农业出版社，2005.
[2] 崔治中.鸡白血病及其鉴别诊断和预防控制[J].中国家禽，2010，32（8）：1-12.
[3] 范建华，俞燕，高明燕，等.小群保种的我国地方鸡禽白血病净化措施研究[J].中国畜牧兽医文摘，2013，29（12）：156-159
[4] 崔治中，孙淑红，赵鹏，等.对我国种鸡场禽白血病净化的几点建议[J].中国家禽，2014，36（1）：1-3.
[5] PAYNE L N，FADLY A M.Leukosis/sarcoma group[M]//CALNEK B W.Disease of poultry.USA：Iowa State University Press，1997：414-466.
[6] 张胜斌，吴天威，韦平，等.地方优良鸡种禽白血病病毒感染调查及净化[J].中国家禽，2010，32（12）：11-16.
[7] 俞燕，朱鸿媛，高明燕，等.地方鸡种禽白血病病毒自然感染动态及检测方法比较[J].中国家禽，2014，36（8）：10-12.
[8] 高玉龙，邵华斌，罗青平，等.2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查[J].中国预防兽医学报， 2010（1）： 32-35.
[9] 杨克礼，韦平，潘玲，等.安徽省鸡免疫抑制性疾病的流行病学调查[J]. 中国兽医科技，2006，35（8）：665-670.
[10] 胡艳，单艳菊，刘学贤，等.不同鸡种沙门菌感染率比较分析[J].中国家禽，2010，32（5）：6-8.
[11] 张娇.地方鸡对马立克氏病的抗性研究及FSHβ基因的遗传变异[D].泰安：山东农业大学，2013.
关键词地方鸡种；禽白血病；流行病学调查
中图分类号S851.34+7.2文献标识码A文章编号0517-6611（2016）04-133-03
Epidemiological Investigation of Avian Leukemia in Some Indigenous Chicken
FAN Jianhua1，DAI Youli1*，YU Yan1， XU Bu1* et al（1. Jiangsu Institute of Poultry Science， Yangzhou， Jiangsu 225125）
Abstract[Objective] To find the nature infection status of avian leukemia in some indigenous chicken. [Method] By using the method of ELISA method and virus isolation method， we investigated the ALVAB and ALVJ avian leukemia of ten indigenous chicken. ALV monitoring was carried out by the second generation of chickens in four lines. ALV sampling inspection was adopted for the modifiedlive vaccine in raising process. [Result]The ALVP27 antigen positive rate was 0-62.1%； ALVAB antibody positive rate was 0-25.0%； ALVJ antibody positive rate was 0-59.0%； positive rate of virus separation was 0-22.0%. ALVP27 antigen positive rate from the offsprings of four lines was 6.0%-67.0%. Positive rate of virus isolation test was 2.0%-34.3% at the age of sixweek old. Two kinds of vaccines from two batches produced by a manufacturer were polluted by ALV. [Conclusion] Most indigenous chicken are infected by ALV. There are great differences among the different breeds of indigenous chicken， which might be related to the ALV genetic resistance of different indigenous chicken. ALV positive rate of F2 chicks have enhanced slightly in some populations， which might be related to the vaccination pollution.
Key wordsIndigenous chicken； Avian leucosis virus （ALV）； Epidemiological investigation
禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的一種垂直传播性疾病[1-2]。ALV属于单股RNA反转录病毒，目前已发现能自然感染鸡群的ALV只有A～E、J 6个亚群，其中除E亚型为内源性病毒以外，其他均为外源性病毒。外源性ALV均具有较强的致病性，特别是AB和J亚型ALV流行最普遍，危害性也最大[2]。禽白血病的危害主要表现为感染鸡群出现肿瘤疾病及其所导致的慢性消耗性死亡、生产性能下降和免疫抑制等，严重时还影响鸡蛋（胚）源细胞的利用，威胁着民生和社会安定[3]。该病在我国养鸡场的发生与发展，起初进口白羽肉鸡被感染，后来又迅速传播至黄羽肉鸡和进口蛋鸡，近期陆续有地方鸡种患病的报道[4]。由于目前禽白血病尚无商品化疫苗和特效治疗药物，目前防制AB和J亚型ALV以及其他外源性禽白血病的最有效手段是检测和淘汰阳性鸡群[4]。
早期了解鸡群ALV自然感染状态，开展ALV流行病学调查与研究，是制定ALV检测和净化方案与实施种鸡群禽白血病净化的必要措施。笔者对国内10个不同地方鸡种的蛋清、胎粪和血浆等样品开展抗原、抗体和病毒分离等检测，并进一步对F2代雏鸡进行了ALV追踪，同时还对饲养过程中使用的不同弱毒活疫苗也进行了ALV抽检检测，旨在为今后进一步开展ALV净化及地方鸡种抗病育种研究等提供理论依据。 1材料与方法
1.1材料
1.1.1试剂与耗材。ALVp27抗原、ALVAB及ALVJ抗体检测试剂盒，均购自美国IDEXX公司；胎牛血清和DMEM均购自HyClone公司；其他试剂均为国产分析纯，购自南京誉日生物科技有限公司。试验用DF1细胞由山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病实验室馈赠。
1.1.2试验鸡群及检测样本。
1.1.2.1ALV初次流调试验鸡选择及样本采集。随机选取绿壳蛋鸡、仙居鸡、芦花鸡、琅琊鸡、崇仁麻鸡等10个地方品系不同日龄段（71～435 d）鸡各100只，翅静脉采血，1 500 r/min离心3 min后，分离上清置于4 ℃冰箱中冷藏备检；所有母鸡取对应2枚新鲜鸡蛋蛋清，-20 ℃下反复冻融3次后备检。
1.1.2.2ALV追踪监测的F2代雏鸡选择及样本采集。随机选取绿壳蛋鸡鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡等F2代雏鸡各100只，1日龄取胎粪，液氮冻融1次后备检；6周龄采翅静脉血，1 500 r/min离心3 min后，分离上清置于4 ℃下冷藏备检。
1.2检测方法及阳性结果判定ALV-p27抗原、ALV-AB及ALV-J抗体检测方法及结果判定均按照美国IDEXX公司生产的ELISA检测试剂盒说明书进行；DF-1细胞病毒分离按照山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病实验室提供的方法进行[5]。对于母鸡对应2枚蛋蛋清的检测，只要有1枚为阳性，就判定该鸡鸡蛋蛋清检测结果为阳性。
2结果与分析
2.110个地方品系鸡的ALV流行病调查结果由表1可知，蛋清ALV-p27抗原阳性检出率为0～62.1%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是文昌鸡和萧山鸡；ALV-AB抗体阳性检出率为0～25.0%，阳性率最高的是崇仁麻鸡，阳性率最低的是琅琊鸡、瓢鸡、文昌鸡、萧山鸡和固始鸡；ALV-J抗体阳性检出率为0～59.0%，阳性率最高的是芦花鸡，阳性率最低的是白耳鸡；病毒分离阳性检出率为0～22.0%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是白耳鸡和萧山鸡；抗原、ALV-J抗体和病毒分离阳性率均超过20.0%的为绿壳蛋鸡。ALV-J抗体阳性检出率普遍高于ALV-AB抗体，说明ALV-J可能是该原种场禽白血病感染的主要病原。
2.24个地方品系鸡F2代雏鸡ALV跟踪检测结果为进一步验证ALV对地方品系鸡的感染状态，同时也为初步了解ALV在地方雞种间可能造成传播的主要途径，在前期流行病学调查的基础上，选取绿壳蛋鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡等4个ALV阳性检出率具有代表性的鸡种作为此次监测研究对象，对4个鸡种的F2代雏鸡1日龄胎粪进行了ALV-p27抗原和6周龄血浆病毒分离检测。由表2可知，胎粪ALV-p27抗原阳性率为6.0%～67.8%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是瓢鸡；6周龄病毒分离阳性率为2.0%～34.3%，阳性率最高的是绿壳蛋鸡，阳性率最低的是白耳鸡。
2.34个鸡种2个世代病毒阳性检出率的比较根据美国ALV检测金标准经验，病毒分离阳性率是最能代表鸡群ALV的自然感染状态[5]。因此，该试验又对绿壳蛋鸡、白耳鸡、瓢鸡和芦花鸡4个鸡种2个世代病毒阳性检出率进行了比较。从图1可以看出，绿壳蛋鸡、仙居鸡和芦花鸡阳性率均较F1代略有增加，只有瓢鸡还基本保持原有阳性率水平。这说明地方鸡种本身遗传特性决定着对ALV自然抗性差异，同时也说明种鸡垂直传播和横向感染是育雏期ALV传播的重要原因。
2.4日常饲养过程中ALV对疫苗污染情况抽检结果对该原种鸡场日常饲养过程中使用的4个厂家3个批次共计4个品种的弱毒活疫苗，进行了ALV病毒分离抽样检测。由表3可知，国内某厂家B生产的鸡痘苗和新支二联苗有ALV污染，而其他3个厂家未检出。
3讨论与结论
近年来，禽白血病的广泛传播与蔓延，给我国养鸡业造成了极大的经济损失，我国地方鸡种也面临着禽白血病的威胁。笔者对国内10个地方鸡种开展了ALV流行病学调查，结果表明地方鸡种较普遍存在或曾经感染过ALV，特别是J亚群ALV。张胜斌等[6]研究表明地方鸡种禽白血病阳性率较高。笔者选取4个鸡种对F2代雏鸡进行了ALV跟踪监测，并对饲养过程中所使用的弱毒活疫苗也进行了抽检。结果表明，有3个鸡种在剔除F1代阳性鸡的基础上，F2代阳性率仍有小幅度提高，有1个厂家2个批次的2个疫苗品种有ALV污染。由此推断，F1代可能有部分阳性鸡在检测期带毒或排毒[7]处于封闭阶段，因而造成漏检，致使F2代雏鸡因垂直传播和水平传播的放大效应，或者因疫苗污染造成的感染，阳性率略有增加。高玉龙等[8]和杨克礼等[9]也曾报道蛋媒传播和雏鸡阶段的横向传播以及疫苗污染等均是造成ALV感染的主要途径。胡艳等[10]和张娇[11]研究表明地方鸡种对鸡肠炎沙门氏菌和鸡马立克氏病感染率有较大差异。此次ALV流行病调查发现绿壳蛋鸡和仙居鸡等ALV有较高的阳性检出率，白耳鸡、瓢鸡和固始鸡等ALV阳性率较低，而白耳鸡和瓢鸡等F2代ALV阳性率仍处于较低水平。综上所述，我国地方鸡种对ALV等垂直传播性疾病的感染差异可能与我国地方鸡种遗传抗性相关，有待进一步研究。
参考文献
[1] SAIF Y M.禽病学[M].苏敬良，高福，索勋，译.11版.北京：中国农业出版社，2005.
[2] 崔治中.鸡白血病及其鉴别诊断和预防控制[J].中国家禽，2010，32（8）：1-12.
[3] 范建华，俞燕，高明燕，等.小群保种的我国地方鸡禽白血病净化措施研究[J].中国畜牧兽医文摘，2013，29（12）：156-159
[4] 崔治中，孙淑红，赵鹏，等.对我国种鸡场禽白血病净化的几点建议[J].中国家禽，2014，36（1）：1-3.
[5] PAYNE L N，FADLY A M.Leukosis/sarcoma group[M]//CALNEK B W.Disease of poultry.USA：Iowa State University Press，1997：414-466.
[6] 张胜斌，吴天威，韦平，等.地方优良鸡种禽白血病病毒感染调查及净化[J].中国家禽，2010，32（12）：11-16.
[7] 俞燕，朱鸿媛，高明燕，等.地方鸡种禽白血病病毒自然感染动态及检测方法比较[J].中国家禽，2014，36（8）：10-12.
[8] 高玉龙，邵华斌，罗青平，等.2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查[J].中国预防兽医学报， 2010（1）： 32-35.
[9] 杨克礼，韦平，潘玲，等.安徽省鸡免疫抑制性疾病的流行病学调查[J]. 中国兽医科技，2006，35（8）：665-670.
[10] 胡艳，单艳菊，刘学贤，等.不同鸡种沙门菌感染率比较分析[J].中国家禽，2010，32（5）：6-8.
[11] 张娇.地方鸡对马立克氏病的抗性研究及FSHβ基因的遗传变异[D].泰安：山东农业大学，2013.