论文部分内容阅读
[摘 要]目的 探讨微乳薄层色谱法在止咳枇杷颗粒鉴别中的应用。方法 以SDS正丁醇正庚烷水微乳液作为展开剂，通过聚酰胺薄层层析，分离和鉴别了止咳枇杷颗粒中的百部、桑白皮、白前3种药材，考察了微乳液类型、改性剂、酸度等因素对分离效果的影响。结果 百部的鉴别以含水量90%微乳液甲酸（9∶1）为最佳展开剂，桑白皮、白前的鉴别以含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为最佳展开剂。结论 微乳薄层鉴别斑点清晰，为止咳枇杷颗粒鉴别提供了一种简便、准确方法。
[关键词]止咳枇杷颗粒 百部 桑白皮 白前 微乳液 薄层色谱
中图分类号：[R931.7]文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0220-01
薄层色谱法是药物分析中广泛应用的经典方法，展开剂通常是有机溶剂。本文研究了不同含水量的SDS正丁醇正庚烷水微乳系统，在聚酰胺薄膜上对止咳枇杷颗粒中的百部、桑白皮和白前进行了分离鉴别，结果满意。
1 仪器与试药
4882型三用紫外分析仪器（上海顾村电光仪器厂），层析用聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），点样用定量毛细管（华西医科大学仪器厂），双槽层析缸（上海信谊仪器厂）。
止咳枇杷颗粒和阴性对照品（均由潘高寿药业股份有限公司提供），百部、桑白皮、白前药材（广东省药材公司提供，经广东药学院生药教研室房志坚老师鉴定），十二烷基硫酸钠（SDS，广州市医药公司化学试剂仪器批发部进口分装，AR），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液配制
2.1.1 微乳展开剂的配制
在保证SDS-正丁醇-正庚烷为2.7∶6.3∶1.0（质量比）的条件下，改变含水量，配制系列微乳液。分别按上述质量比称取SDS、正丁醇、正庚烷，加适量水搅拌溶解，然后加水至足量，混匀，放置24 h即可。
2.1.2 百部供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
称取止咳枇杷颗粒10g，加水约20mL溶解，用0.1mol/L HCl调pH至1，用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，滤过，合并滤液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。称取百部阴性对照10g，按照供试品溶液的配制方法，制得阴性对照溶液。称取百部对照药材粉末2g，加水20ml，超声提取2次，每次30min，滤过，合并滤液，水浴蒸发至约30mL，0.1moL/LHcl调pH值至1，其余步骤按照供试品溶液的配制方法制得对照药材溶液。
2.1.3 桑白皮供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
称取止咳枇杷颗粒5g，加水约20mL溶解，用氨试液调溶液pH至8，用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，滤过，合并滤液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。取桑白皮阴性对照5g，按照供试品溶液的配制方法，制得阴性对照液。称取桑白皮对照药材粉末2g，加水20mL，超声提取2次，每次30min，滤过，合并滤液，水浴蒸发至约30mL，用氨试液调pH至8，其余步骤按照供试品溶液的配制方法制得对照药材溶液。
2.1.4 白前供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
分别称取止咳枇杷颗粒5g，白前阴性对照5g，白前对照药材粉末2g，分别按“2.1.3”项下方法制得供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液。
2.2 薄层层析
用定量毛细管吸取对照药材液、供试品溶液和阴性对照溶液各1μL 于聚酰胺薄膜上点样，以各微乳液为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.2.1 展开剂的选择
百部展开剂的选择：实验中各种微乳液甲酸（9∶1）作展开剂进行选择。由于百部的鉴别斑点只在90%含水量的微乳液水相前沿与油相前沿之间出现，故选含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为鉴别百部的展开剂。
桑白皮，白前展开剂的选择：实验表明，在微乳液中加入适当甲酸，各斑点分离得更清晰，更集中。实验中各种微乳液甲酸（9∶1）为展开剂的各供试品薄层色谱可见，桑白皮、白前鉴别斑点的Rf值随含水量的增加而下降，但分离效果随含水量的增加而改善，且展开时间减少；以油水双连续微乳液为展开剂，斑点有重叠，展开不理想；以O/W微乳液为展开剂，分离效果明显改善。由各薄层色谱可见，含水量≥70%的微乳液甲酸（9∶1）鉴别桑白皮均较理想；白前以含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为最佳鉴别系统。故选择含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为鉴别桑白皮和白前的展开剂。
2.2.2 层析结果
百部的鉴别：吸取百部对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量90%微乳液甲酸（9∶1）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的浅蓝色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
止咳枇杷颗粒的微乳薄层色谱鉴别桑白皮的鉴别：吸取桑白皮对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量70%微乳液甲酸（91）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
白前的鉴别：吸取白前对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
3 讨论
3.1 展开剂的选择
在百部的鉴别中，含水量90%的微乳液有2个溶剂前沿，其中第2溶剂前沿为亲水性物质与疏水性物质的分界线，在加了甲酸的展开剂中，生物碱盐亲水性组分斑点出现在两前沿之间的水层，从而得到分离。桑白皮、白前鉴定以70%（O/W）微乳甲酸（9∶1）为最佳展开系统，鉴别斑点清晰，圆而集中。
3.2 改性剂的选择和pH的影响
本文曾考察了多种改性剂，如甲酸，乙酸，丙酮，乙酰丙酮，甲醇，乙腈，盐酸，乙二胺，氨水等，发现以甲酸、丙酮的效果最佳，可减少斑点的扩散和拖尾现象，而甲酸有抑制酸碱组分拖尾的效果，因而选择甲酸作改性剂。盐酸也可达到同样的效果，但它的用量必须很小，否则微乳液的稳定性将受破坏。本文也尝试了多种改性剂同时加入的方法，发现效果与单种差不多甚至无改性作用。甲酸加入量>5%即可达到效果，故选择加入10%甲酸作改性剂。
与常用薄层方法比较，微乳薄层操作简便，分离效率高；荧光强度增大，色谱斑点圆而集中，检出灵敏度高；展开剂含水量大，而湿度对实验影响不大，故实验条件宽松，重现性较好；有机溶剂展开剂有毒，易燃，环境污染大，而微乳液以水为主，用量很少，可避免上述缺点，且降低实验成本。本研究利用微乳薄层分离较理想鉴定了止咳枇杷冲剂中的百部、桑白皮和白前，为其分离和鉴定提供了一种简便、准确方法，并展示了微乳薄层的良好应用前景。
参考文獻
[1] 李干左，郭荣.微乳液理论及其应用[M].北京：石油工业出版社，2005： 59.
[2] 康纯，闻莉毓，丁仲伯.微乳薄层用于黄酮类成分分离鉴定的研究[J].药物分析杂志，2000，20（2）：121.
[关键词]止咳枇杷颗粒 百部 桑白皮 白前 微乳液 薄层色谱
中图分类号：[R931.7]文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0220-01
薄层色谱法是药物分析中广泛应用的经典方法，展开剂通常是有机溶剂。本文研究了不同含水量的SDS正丁醇正庚烷水微乳系统，在聚酰胺薄膜上对止咳枇杷颗粒中的百部、桑白皮和白前进行了分离鉴别，结果满意。
1 仪器与试药
4882型三用紫外分析仪器（上海顾村电光仪器厂），层析用聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），点样用定量毛细管（华西医科大学仪器厂），双槽层析缸（上海信谊仪器厂）。
止咳枇杷颗粒和阴性对照品（均由潘高寿药业股份有限公司提供），百部、桑白皮、白前药材（广东省药材公司提供，经广东药学院生药教研室房志坚老师鉴定），十二烷基硫酸钠（SDS，广州市医药公司化学试剂仪器批发部进口分装，AR），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液配制
2.1.1 微乳展开剂的配制
在保证SDS-正丁醇-正庚烷为2.7∶6.3∶1.0（质量比）的条件下，改变含水量，配制系列微乳液。分别按上述质量比称取SDS、正丁醇、正庚烷，加适量水搅拌溶解，然后加水至足量，混匀，放置24 h即可。
2.1.2 百部供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
称取止咳枇杷颗粒10g，加水约20mL溶解，用0.1mol/L HCl调pH至1，用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，滤过，合并滤液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。称取百部阴性对照10g，按照供试品溶液的配制方法，制得阴性对照溶液。称取百部对照药材粉末2g，加水20ml，超声提取2次，每次30min，滤过，合并滤液，水浴蒸发至约30mL，0.1moL/LHcl调pH值至1，其余步骤按照供试品溶液的配制方法制得对照药材溶液。
2.1.3 桑白皮供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
称取止咳枇杷颗粒5g，加水约20mL溶解，用氨试液调溶液pH至8，用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，滤过，合并滤液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。取桑白皮阴性对照5g，按照供试品溶液的配制方法，制得阴性对照液。称取桑白皮对照药材粉末2g，加水20mL，超声提取2次，每次30min，滤过，合并滤液，水浴蒸发至约30mL，用氨试液调pH至8，其余步骤按照供试品溶液的配制方法制得对照药材溶液。
2.1.4 白前供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液的配制
分别称取止咳枇杷颗粒5g，白前阴性对照5g，白前对照药材粉末2g，分别按“2.1.3”项下方法制得供试品溶液、阴性对照液和对照药材溶液。
2.2 薄层层析
用定量毛细管吸取对照药材液、供试品溶液和阴性对照溶液各1μL 于聚酰胺薄膜上点样，以各微乳液为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.2.1 展开剂的选择
百部展开剂的选择：实验中各种微乳液甲酸（9∶1）作展开剂进行选择。由于百部的鉴别斑点只在90%含水量的微乳液水相前沿与油相前沿之间出现，故选含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为鉴别百部的展开剂。
桑白皮，白前展开剂的选择：实验表明，在微乳液中加入适当甲酸，各斑点分离得更清晰，更集中。实验中各种微乳液甲酸（9∶1）为展开剂的各供试品薄层色谱可见，桑白皮、白前鉴别斑点的Rf值随含水量的增加而下降，但分离效果随含水量的增加而改善，且展开时间减少；以油水双连续微乳液为展开剂，斑点有重叠，展开不理想；以O/W微乳液为展开剂，分离效果明显改善。由各薄层色谱可见，含水量≥70%的微乳液甲酸（9∶1）鉴别桑白皮均较理想；白前以含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为最佳鉴别系统。故选择含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为鉴别桑白皮和白前的展开剂。
2.2.2 层析结果
百部的鉴别：吸取百部对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量90%微乳液甲酸（9∶1）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的浅蓝色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
止咳枇杷颗粒的微乳薄层色谱鉴别桑白皮的鉴别：吸取桑白皮对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量70%微乳液甲酸（91）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
白前的鉴别：吸取白前对照药材液、供试品溶液和阴性液各1μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以含水量70%微乳液甲酸（9∶1）为展开剂，室温上行法展开，展距约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色斑点，而阴性对照液则无相应斑点。
3 讨论
3.1 展开剂的选择
在百部的鉴别中，含水量90%的微乳液有2个溶剂前沿，其中第2溶剂前沿为亲水性物质与疏水性物质的分界线，在加了甲酸的展开剂中，生物碱盐亲水性组分斑点出现在两前沿之间的水层，从而得到分离。桑白皮、白前鉴定以70%（O/W）微乳甲酸（9∶1）为最佳展开系统，鉴别斑点清晰，圆而集中。
3.2 改性剂的选择和pH的影响
本文曾考察了多种改性剂，如甲酸，乙酸，丙酮，乙酰丙酮，甲醇，乙腈，盐酸，乙二胺，氨水等，发现以甲酸、丙酮的效果最佳，可减少斑点的扩散和拖尾现象，而甲酸有抑制酸碱组分拖尾的效果，因而选择甲酸作改性剂。盐酸也可达到同样的效果，但它的用量必须很小，否则微乳液的稳定性将受破坏。本文也尝试了多种改性剂同时加入的方法，发现效果与单种差不多甚至无改性作用。甲酸加入量>5%即可达到效果，故选择加入10%甲酸作改性剂。
与常用薄层方法比较，微乳薄层操作简便，分离效率高；荧光强度增大，色谱斑点圆而集中，检出灵敏度高；展开剂含水量大，而湿度对实验影响不大，故实验条件宽松，重现性较好；有机溶剂展开剂有毒，易燃，环境污染大，而微乳液以水为主，用量很少，可避免上述缺点，且降低实验成本。本研究利用微乳薄层分离较理想鉴定了止咳枇杷冲剂中的百部、桑白皮和白前，为其分离和鉴定提供了一种简便、准确方法，并展示了微乳薄层的良好应用前景。
参考文獻
[1] 李干左，郭荣.微乳液理论及其应用[M].北京：石油工业出版社，2005： 59.
[2] 康纯，闻莉毓，丁仲伯.微乳薄层用于黄酮类成分分离鉴定的研究[J].药物分析杂志，2000，20（2）：121.