【摘 要】
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目的检测Ether a go-go(Eag)在人骨肉瘤细胞中的表达并探索其调控的分子机制。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(reverse trariseription polymerase chain reaction,RT-
【机 构】
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厦门大学附属东南医院骨科,厦门大学附属东南医院神经内科
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目的检测Ether a go-go(Eag)在人骨肉瘤细胞中的表达并探索其调控的分子机制。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(reverse trariseription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot,WB)检测骨肉瘤细胞MG-63中Eag的表达。体外实验检测Eag抑制剂对MG-63细胞增殖的影响,体内实验检测Eag短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)对裸鼠骨肉瘤生长的影响。最后用WB检测骨肉瘤细胞中促有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen—activated protein kinase,MAPK)和p53蛋白的表达水平。结果 Eag在MG-63细胞中高表达,Eag shRNA或抑制剂丙咪嗪(Imipramine)能从体内外有效地抑制人骨肉瘤细胞增殖。p38 MAPK抑制剂SB203580或小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可抑制MG-63细胞的增殖,同时诱导p53的表达。p53激活剂nutlin-3可抑制MG-63细胞增殖并下调Eag的表达,而p53抑制剂pifithrin—alpha(PVT-α)则能促进MG-63细胞增殖并诱导Eag的表达。结论 Eag作为癌基因参与了骨肉瘤细胞增殖过程,其可能受p38 MAPK/p53信号通路的调控。
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