【摘 要】
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探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法.通过酶消化法获得幼鼠表皮,并制成单表皮细胞悬液,以表皮干细胞培养基,即无钙EMEM培养基(添加9% FBS,0.05mmol/L CaCl2,4ng/m
【机 构】
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100037,北京,解放军第304医院
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探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法.通过酶消化法获得幼鼠表皮,并制成单表皮细胞悬液,以表皮干细胞培养基,即无钙EMEM培养基(添加9% FBS,0.05mmol/L CaCl2,4ng/ml EGF,0.5ng/ml硫酸庆大霉素及50%成纤维细胞条件培养基)置细胞培养箱内培养.成纤维细胞条件培养基为无钙EMEM培养基(添加9% FBS、0.05mmol/L CaCl2、0.5μg/ml硫酸庆大霉素)培养幼鼠皮肤块48h后所得培养液.将1×106/ml上述培养的角质形成细胞经TGG细胞消化液37℃下振荡消化后,接种至鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内,37℃下静置10～15min,留用快速贴壁细胞继续培养,所得细胞分别以能否呈克隆状生长和透射电镜观察其超微结构及β1整合素、K19免疫细胞化学染色进行鉴定.结果显示,鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞经继续培养,可见细胞呈克隆状生长.电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征,β1整合素、K19免疫细胞化学染色阳性.研究表明,表皮干细胞可在体外分离与培养,本实验方法为较好方法之一.
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