目的 探讨促红细胞生成素肝细胞受体A3 (EphA3)参与肝癌细胞侵袭的作用机制.方法 培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株HepG2和MHCC97H.采用siRNA干扰的方法抑制肝癌细胞中EphA3的表达.设立未处理组(未处理肝癌细胞),对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA3).用RT-PCR和Western blot法检测EphA3的表达;用Transwell小室检测不同处理后的HepG2和MHCC97H细胞的侵袭能力;采用Western blot和ELISA法检测VEGF蛋白表达和活力的变化情况.多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验.结果 HL-7702、HepG2和MHCC97H中EphA3 mRNA的相对表达量分别为0.94±0.13、1.76 ±0.16和3.62±0.14; EphA3蛋白的相对表达量分另别为0.96 ±0.12、1.59 ±0.11和3.82 ±0.11,非肿瘤细胞与肝癌细胞中EphA3表达比较,差异有统计学意义(t=2.511,6.437;2.321,6.895,P＜0.05).RT-PCR法检测HepG2细胞系中未处理组、对照组、siRNA干扰组EphA3 mRNA的相对表达量分别为0.95 ±0.11、0.96 ±0.12和0.31±0.15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=4.051,P＜0.05);MHCC97H细胞中EphA3 mRNA的相对表达量分另别为0.97±0.16、0.95 ±0.14和0.40 ±0.11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=5.237,P＜0.05);Western blot法检测3组HepG2细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0.97 ±0.16、0.95 ±0.15和0.32±0.17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(=4.145,P＜0.05);MHCC97H细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0.95 ±0.11、0.96±0.12和0.38±0.17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =4.327,P＜0.05).采用体外侵袭实验,检测3组穿透的细胞数量,HepG2细胞系细胞数量分别为(111±4)个/10HPF、(109±5)个/10HPF和(51±3)个/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =7.582,P＜0.05);MHCC97H细胞系细胞数量分别为(402 ±6)个/10HPF、(397 ±7)个/10HPF和(152 ±7)个/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=9.479,P＜0.05).Western blot 法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0.98 ±0.11、0.96 ±0.13和0.57 ±0.11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.167,P＜0.05);Western blot法检测MHCC97H细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0.97 ±0.14、0.98 ±0.12和0.34±0.15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =4.278,P＜0.05).ELISA法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0.96±0.15、0.94 ±0.11和0.47 ±0.13,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.981,P＜0.05);MHCC97H细胞中VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0.98±0.12、0.97 ±0.12和0.38±0.14,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=4.059,P＜0.05).结论 EphA3可能是通过调控VEGF蛋白表达和活性来实现肝癌细胞的侵袭,提示EphA3可作为肝癌治疗的新靶点。
EphA3通过调控VEGF参与肝癌细胞侵袭的机制
【摘 要】
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目的 探讨促红细胞生成素肝细胞受体A3 (EphA3)参与肝癌细胞侵袭的作用机制.方法 培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株HepG2和MHCC97H.采用siRNA干扰的方法抑制肝癌细胞中EphA3的表达.设立未处理组(未处理肝癌细胞),对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA3).用RT-PCR和Western blot法检测EphA3的表达;用Transw
【机 构】
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471000开封,解放军第一五五医院普通外科,710032西安,第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科,471000开封,解放军第一五五医院普通外科,471000开封,解放军第一五五医院普通外科,47100
【出 处】
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中华消化外科杂志
【发表日期】
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2014年13期
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