【摘 要】
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本研究目的是为了更好地诊断和控制家兔肠炎沙门氏菌病。本研究对分离的细菌进行了鉴定分析和疫病防控技术研究。根据临床症状,对疑似沙门氏菌病样本:繁殖母兔的新鲜粪便和乳汁、流产死胎、兔舍环境样本、饲料、水源等以预增菌液BPW,选择性增菌液TTB、MM、SC,鉴别培养基DHL、BS进行细菌分离,通过比较,筛选并优化沙门氏菌的分离培养方法;以肠炎沙门氏菌特异性引物UsefA-F:5’-ATGCGTAAATC
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
【出 处】
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中国畜牧兽医学会养兔学分会第二届学术交流大会论文集
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本研究目的是为了更好地诊断和控制家兔肠炎沙门氏菌病。本研究对分离的细菌进行了鉴定分析和疫病防控技术研究。根据临床症状,对疑似沙门氏菌病样本:繁殖母兔的新鲜粪便和乳汁、流产死胎、兔舍环境样本、饲料、水源等以预增菌液BPW,选择性增菌液TTB、MM、SC,鉴别培养基DHL、BS进行细菌分离,通过比较,筛选并优化沙门氏菌的分离培养方法;以肠炎沙门氏菌特异性引物UsefA-F:5’-ATGCGTAAATCAGCATCTG-3’,LsefA-R:5’-TTAGTTTTGATACTGCTGAAC-3’做PCR,对沙门氏菌进行种类鉴定;针对沙门氏菌MLST分型的7个看家基因hisD、aroC、hem D、sucA、dnaN、purE、thrA分别合成特异性引物,对分离的肠炎沙门氏菌进行了MLST分型;利用琼脂纸片扩散法对不同兔场的肠炎沙门氏菌菌株进行药敏试验以筛选该菌的敏感性药物用于治疗;利用分离的菌株自制灭活疫苗,对其免疫预防效果进行研究。试验结果显示:对临床样品进行预增菌、选择性增菌及鉴别培养比较后发现,MM选择性增菌液的阳性检出率要明显低于TTB和S C,而TTB和SC择性增菌液的阳性检出率较高且差异不明显。因此,在增菌过程中,淘汰MM选择性增菌液,TTB和SC同时使用或二者选其一。挑取疑似沙门氏菌单菌落进行PCR鉴定,结果表明病原为肠炎沙门氏菌。MLST分型结果显示,不同兔场分离菌株序列型一致,都为ST.11。肠炎沙门氏菌菌株药敏试验结果显示,不同兔场分离菌的耐药情况差异明显,耐药最多的耐8种药物,最少的耐2种,对头孢噻肟、丁胺卡那和氟苯尼考的敏感性最高。用自制灭活疫苗,对家兔进行一次免疫和二次免疫试验,均起到了良好的保护作用,二次免疫试验组的免疫效果优于一次免疫试验组。结论:本研究优化的兔肠炎沙门氏菌分离方法为肠炎沙门氏菌病的诊断和流行病学调查提供有利的工具,在死胎中检测到肠炎沙门氏菌,显示肠炎沙门氏菌可以通过胎盘垂直传播;分离菌株序列型均为ST.11,可能该菌有较强的传播能力,在当地呈地方性流行;分离菌株表现严重的耐药性,可能是发病兔场使用多种抗生素治疗无效果的原因之一,这也反映了兔场存在抗生素使用不规范的情况。
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