【摘 要】
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为了明确内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)是否在蒙古绵羊的发育过程中发挥作用以及在绵羊肺腺瘤病致瘤过程中可能发挥的作用,本试验利用RT-PCR和组织原位杂交技术对enJSRV及其受体Hyal-2在妊娠绵羊的子宫和孕体的表达规律和分布定位进行了研究。结果表明：enJSRV及其受体Hyal-2在蒙古绵羊不同妊娠期(27d、56d、91d和107d)的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和孕体中均有表达,且二者特异
【机 构】
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内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特市 010018
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会
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为了明确内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)是否在蒙古绵羊的发育过程中发挥作用以及在绵羊肺腺瘤病致瘤过程中可能发挥的作用,本试验利用RT-PCR和组织原位杂交技术对enJSRV及其受体Hyal-2在妊娠绵羊的子宫和孕体的表达规律和分布定位进行了研究。结果表明：enJSRV及其受体Hyal-2在蒙古绵羊不同妊娠期(27d、56d、91d和107d)的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和孕体中均有表达,且二者特异性的表达在子宫内膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞、胎盘的子叶及滋养层巨型双核细胞和多核合胞体小半鞘翅。enJSRV及其受体Hyal-2在妊娠蒙古绵羊子宫和孕体中的表达,揭示其在胎盘和孕体发育过程中可能发挥重要作用,同时可通过干扰exJSRV的侵入而影响肺腺瘤病的发生。
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用F81细胞对来自四川地区疑似感染细小病毒犬粪便进行病毒分离,并进行常规病毒学鉴定,设计犬细小病毒特异性引物,采用PCR技术扩增出VP2全长基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,测序并进行遗传进化分析。结果,分离到的该细小病毒,在F81细胞上出现明显的CPV病变,电镜观察可见细小病毒样粒子,并具有细小病毒理化特征,表明所分离病毒为CPV,将该分离株命名为CPV-CN-04-08-3。CPV-
鸡β-防御素gal-8是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。本研究从已构建的重组质粒pGEM-T Easygal-8中克隆出gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pNz8048,构建重组质粒pNZ8048-gal-8,然后将重组质粒电击转化乳酸乳球菌NZ9000中。经菌落PCR、双酶切、测序鉴定,成功构建了乳酸菌表达载体pNZ8048-gal-8。测序结果经Blast程序对比显示基因
07、08年某鸡场相继爆发鸡病毒性肝炎,为了确定病原和了解发病时患病鸡的病理学变化,分别对该鸡场的患病鸡进行了PCR检测和临床病理学研究。结果表明：患病鸡均呈FAV阳性,病鸡精神不振,食欲降低,嗜睡,一般无明显前驱症状,突然发病死亡。同时剖检后肝脏肿大、土黄色,表面有密集的小出血点或出血斑,以及-肾脏肿大、出血是本次发病鸡的突出病变。最终确诊本次发病是由禽腺病毒引起的鸡包涵体肝炎。
研究低氧环境下鸡胚肺血管内皮细胞源性内皮素-1对下层平滑肌细胞的影响。组织贴块法培养内皮细胞和平滑肌细胞,将内皮细胞培养于常氧和低氧环境中,于24h收集上清液过滤-20℃保存备用,并用放免法测定内皮细胞ET-1的分泌。采用CCK-8法检测平滑肌细胞的增殖,Fura2-AM检测平滑肌细胞内Ca2+浓度,RT-PCR检测内皮细胞ET-1mRNA和平滑肌细胞ETARmRNA的表达。低氧条件下内皮细胞分泌
为了建立区分内外源性JSRV的诊断方法，应用Cluster W对比enJSRV与exJSRV的序列差异，针对外源性前病毒序列设计上下游引物，提取健康羊肺组织及肺肿瘤组织、肺门淋巴结、肾组织、潜伏感染羊外周血单核细胞总DNA。结果表明特异性PCR法快速、灵敏，是针对于含前病毒量较高的死后羊肺肿瘤组织实用的诊断方法。从而成功排除了高拷贝数enJSRV的干扰，在国内首次建立了针对exJSRV长末端重复序
JSRV无病毒癌基因，病毒的Env蛋白能转化细胞致肺肿瘤，而内源性JSRV则在母羊生殖道内大量表达。内外源性JSRV的受体均为Hyal-2，该受体在羊、人类及鼠的细胞中无所不在，且过表达鼠Hyal2对JSRV在鼠N1H3T3和208F细胞中的转化没有影响。因而推测病毒的肺嗜性不是由于AT Ⅱ细胞和Clara细胞上的Hyal-2受体数量多，而是由于内外源性JSRV LTR的嗜性不同导致的，为了从分子
OPA感染羊无针对JSRV的循环性抗体，然而，患羊肺组织、淋巴网状内皮系统及外周血单核细胞均有前病毒DNA及JSRV的转录产物。目前，本研究组建立的血清学及特异性PCR方法能在肺肿瘤组织的检测中发挥作用，然而，对于活体羊，因血液样本含前病毒的载量很低，超过了前两种方法的检测阈值。为了寻找能应用于活体羊检测样本的新方法，本实验对比enJSRV与exJSRV的序列差异，针对外源性前病毒设计了两套引物，
为了解内外源性JSRV LTR的差别，从分子机制上分析内外源性JSRV-LTR的不同嗜性的机理，本实验克隆测序了健康山羊和绵羊的内源性JSRV-LTR，有益于了解JSRV的病毒学特性及与宿主共进化的关系。
绵羊肺腺瘤病病毒(Jaagsiekte retrovirus, JSRV)属于β反转录病毒，为线性单股正链RNA，全长7.4kb，编码相互重叠的gag,pro,pol,env基因。其中env基因的orf编码跨膜蛋白(transmembraneprotein.TM)和表面蛋白(surface protein,SU)。利用真核表达载体pCDNA3.1+，建立在细胞内稳定表达tm的HepG2细胞系，为进
利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX-U-M的免疫效果。IFA试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M 能够在BHK-21细胞内成功表达目的基因,小鼠免疫试验结果表明,真核表达质粒p