【摘 要】
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研究已证实杆状病毒可以进入各种脊椎动物细胞,包括哺乳动物细胞,禽类细胞,以及鱼类细胞。由于杆状病毒能高效转导哺乳动物细胞,在疫苗研究,基因治疗,以及基因功能研究方面都有一定应用,现已成为一种新型的基因导入载体。然而研究发现,杆状病毒转导鱼类细胞系效率低下,这就阻碍了杆状病毒在鱼类细胞中 的应用。本研究构建了重组杆状病毒Bac-CMV-EGFP,以CMV为启动子,EGFP为报告基因。用重组杆状病毒转
【机 构】
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华中农业大学水产学院,湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070
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研究已证实杆状病毒可以进入各种脊椎动物细胞,包括哺乳动物细胞,禽类细胞,以及鱼类细胞。由于杆状病毒能高效转导哺乳动物细胞,在疫苗研究,基因治疗,以及基因功能研究方面都有一定应用,现已成为一种新型的基因导入载体。然而研究发现,杆状病毒转导鱼类细胞系效率低下,这就阻碍了杆状病毒在鱼类细胞中 的应用。本研究构建了重组杆状病毒Bac-CMV-EGFP,以CMV为启动子,EGFP为报告基因。用重组杆状病毒转导了6种常规的鱼类细胞系,利用流式细胞仪检测了重组杆状病毒对鱼类细胞的转导效率。研究发现,重组杆状病毒可以高效转导鱼类细胞,特别是鲤鱼上皮瘤细胞(EPC),胖头鲤肌肉细胞(FHM),并且报告基因在细胞中能够持续存在很长时间。本研究结果,为杆状病毒载体在鱼类细胞中的应用奠定了基础。
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组织蛋白酶D (cathepsin D,EC 3.4.23.5)是一种天冬氨酸肽链内切酶,广泛存在于生物界中,具有多种生物功能.通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE),首次获得大珠母贝组织蛋白酶D基因(pm CD)的cDNA全长序列1742bp,其中5UTR38bp,3UTR 531bp,开放阅读框1173bp,共编码390个氨基酸.序列分析结果表明,pm CD编码的蛋白质分子量约
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利用SMART cDNA文库构建试剂盒首次构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库.两个文库容量分别为2.30×106 cfu/ml和1.20×106 cfu/ml,重组率均超过98％,平均插入片段长度均大于1 kb,文库质量符合标准要求.随机选取的4009个克隆进行5′端测序,得到3884个有效序列(外套膜：923个,肾脏：2961个),测序成功率96.9％.经过质量控制和拼接,共得
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