目的 应用尿素酶预处理-气相色谱-质谱技术(UP-GC-MS)测定尿液甲基丙二酸水平,探讨UP-GC-MS诊断甲基丙二酸尿症(MMA)的可行性；应用串联质谱技术(MS-MS)和分子生物学技术,确定MMA外周血脂酰肉碱、支链氨基酸水平,分析C3水平、C3∶C2比值对甲基丙二酸尿症的诊断价值。方法 收集2500例MMA高危儿尿液,利用UP-GC-MS筛查和确诊MMA患儿；收集确诊MMA患儿外周血,应用MS-MS测定氨基酸及脂酰肉碱水平,以及通过分子生物学技术(DNA抽提、PCR及基因序列分析)明确MMA基因分型。结果 2010年10月至2013年3月,我院共接受MMA高危儿尿液标本2500例,应用UP-GC-MS筛查MMA 56例,确诊18例,甲基丙二酸和甲基枸橼酸为甲基丙二酸尿症特异性生物标志物；MS-MS测定发现甲基丙二酸尿症患儿血液中C3和C3∶C2值上升；18例确诊MMA中收集6个家系血标本20例,应用分子生物学技术对(MUT、MMACHC)基因进行测序,发现1家系MMA患儿为MUT基因突变,3家系为MMACHC基因突变,其4号外显子609鸟嘌呤突变为腺嘌呤(G＞A)在3个MMACHC家系中均出现,为热点突变。结论 UP-GC-MS是诊断小儿MMA的有效生化方法；应用MS-MS检测C3和C3∶C2可作为甲基丙二酸尿症患儿筛查指标；MMACHC基因4号外显子609G＞A可能是我国MMACHC型甲基丙二酸尿症患儿热点突变。