肝癌相关基因HTA是由本实验室发现并鉴定的在肝癌组织中特异性表达并与肝癌侵袭和转移密切相关的新基因;实验室前期收集肝癌患者外周血建立了全人源抗肝癌抗体基因库。 目的:利用全人源抗肝癌哺乳动物细胞表面展示抗体库筛选抗HTA抗体可变区基因。 方法:从肝癌细胞株HepG2中扩增HTA基因ORF区序列,构建可溶性表达载体PGEX-4T-3-HTA并转入表达菌株Rosetta;大量诱导表达可溶性GST-HTA融合蛋白,GST-tag磁珠纯化后,western blot验证;全人源抗肝癌抗体基因库重、轻链质库共转染HEK293T细胞建立哺乳动物细胞表面展示抗体库,RT-PCR及细胞Elisa鉴定全人源全长抗体的表达;利用磁珠细胞分选,从哺乳动物细胞表面展示抗体库中筛选特异性表达HTA抗体的细胞,利用特异性引物扩增抗HTA抗体可变区基因。 结果:成功构建可溶性表达载体PGEX-4T-3-HTA并纯化出可溶性GST-HTA融合蛋白;哺乳动物细胞表面展示抗体库成功表达全人源全长抗体;利用磁珠细胞分选,筛选并扩增出两条抗HTA抗体重链可变区基因(VH)H3和H5和两条轻链链可变区基因(VL)κ1和1κ2。 结论:利用全人源抗肝癌哺乳动物细胞表面展示抗体库可以筛选出抗HTA抗体可变区基因,为制备全人源全长抗HTA抗体奠定基础。