【摘 要】
:
建立羊种布鲁氏菌027株侵染HPT-8细胞的cDNA文库。分别提取布鲁氏菌侵染20min、1h、2h、3h、4h后HPT-8细胞总RNA,逆转录合成cDNA,同源重组法构建布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库,对文库63个克隆进行测序分析,采用BlastX和BlastN进行序列同源性比对,并将63个基因进行了功能分类。结果羊种布鲁氏菌027株侵染人胚胎滋养层cDNA文库的库容为L43x106,
【机 构】
:
石河子大学动物科技学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 石河子大学医学院,石河子,新疆,83
【出 处】
:
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会
论文部分内容阅读
建立羊种布鲁氏菌027株侵染HPT-8细胞的cDNA文库。分别提取布鲁氏菌侵染20min、1h、2h、3h、4h后HPT-8细胞总RNA,逆转录合成cDNA,同源重组法构建布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库,对文库63个克隆进行测序分析,采用BlastX和BlastN进行序列同源性比对,并将63个基因进行了功能分类。结果羊种布鲁氏菌027株侵染人胚胎滋养层cDNA文库的库容为L43x106,重组率为96.92%,插入片段大小在0.2-5kb,EST测序分析结果与转录、能量代谢、运输及细胞因子的相关基因所占比例较高。
其他文献
研究低氧环境下鸡胚肺血管内皮细胞源性内皮素-1对下层平滑肌细胞的影响。组织贴块法培养内皮细胞和平滑肌细胞,将内皮细胞培养于常氧和低氧环境中,于24h收集上清液过滤-20℃保存备用,并用放免法测定内皮细胞ET-1的分泌。采用CCK-8法检测平滑肌细胞的增殖,Fura2-AM检测平滑肌细胞内Ca2+浓度,RT-PCR检测内皮细胞ET-1mRNA和平滑肌细胞ETARmRNA的表达。低氧条件下内皮细胞分泌
为了建立区分内外源性JSRV的诊断方法,应用Cluster W对比enJSRV与exJSRV的序列差异,针对外源性前病毒序列设计上下游引物,提取健康羊肺组织及肺肿瘤组织、肺门淋巴结、肾组织、潜伏感染羊外周血单核细胞总DNA。结果表明特异性PCR法快速、灵敏,是针对于含前病毒量较高的死后羊肺肿瘤组织实用的诊断方法。从而成功排除了高拷贝数enJSRV的干扰,在国内首次建立了针对exJSRV长末端重复序
JSRV无病毒癌基因,病毒的Env蛋白能转化细胞致肺肿瘤,而内源性JSRV则在母羊生殖道内大量表达。内外源性JSRV的受体均为Hyal-2,该受体在羊、人类及鼠的细胞中无所不在,且过表达鼠Hyal2对JSRV在鼠N1H3T3和208F细胞中的转化没有影响。因而推测病毒的肺嗜性不是由于AT Ⅱ细胞和Clara细胞上的Hyal-2受体数量多,而是由于内外源性JSRV LTR的嗜性不同导致的,为了从分子
OPA感染羊无针对JSRV的循环性抗体,然而,患羊肺组织、淋巴网状内皮系统及外周血单核细胞均有前病毒DNA及JSRV的转录产物。目前,本研究组建立的血清学及特异性PCR方法能在肺肿瘤组织的检测中发挥作用,然而,对于活体羊,因血液样本含前病毒的载量很低,超过了前两种方法的检测阈值。为了寻找能应用于活体羊检测样本的新方法,本实验对比enJSRV与exJSRV的序列差异,针对外源性前病毒设计了两套引物,
为了解内外源性JSRV LTR的差别,从分子机制上分析内外源性JSRV-LTR的不同嗜性的机理,本实验克隆测序了健康山羊和绵羊的内源性JSRV-LTR,有益于了解JSRV的病毒学特性及与宿主共进化的关系。
绵羊肺腺瘤病病毒(Jaagsiekte retrovirus, JSRV)属于β反转录病毒,为线性单股正链RNA,全长7.4kb,编码相互重叠的gag,pro,pol,env基因。其中env基因的orf编码跨膜蛋白(transmembraneprotein.TM)和表面蛋白(surface protein,SU)。利用真核表达载体pCDNA3.1+,建立在细胞内稳定表达tm的HepG2细胞系,为进
利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX-U-M的免疫效果。IFA试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M 能够在BHK-21细胞内成功表达目的基因,小鼠免疫试验结果表明,真核表达质粒p
为了明确内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)是否在蒙古绵羊的发育过程中发挥作用以及在绵羊肺腺瘤病致瘤过程中可能发挥的作用,本试验利用RT-PCR和组织原位杂交技术对enJSRV及其受体Hyal-2在妊娠绵羊的子宫和孕体的表达规律和分布定位进行了研究。结果表明:enJSRV及其受体Hyal-2在蒙古绵羊不同妊娠期(27d、56d、91d和107d)的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和孕体中均有表达,且二者特异
朊蛋白在哺乳动物中高度保守,在机体多数组织都有表达。本研究运用免疫组织化学技术,首次对我国一类保护物种宁夏滩羊各组织中朊蛋白(PrPc)的分布进行了定性、定位研究,结果显示,PrP在滩羊的大脑、脑干、肝脏、脾脏、肾脏均有表达。此研究为揭示朊蛋白在组织中的表达量与朊病毒(prion)的感染部位之间的关系提供科学依据。此外,通过对滩羊朊蛋白免疫组织化学检测方法的优化,为朊病毒病的检测提供技术与方法支持
本研究应用双萤光素酶报告基因技术,比较了绵羊、山羊内源性JSRV-LTR与绵羊外源性JSRV-LTR在不同细胞内的萤光素酶活性,结果表明除肺泡Ⅱ型上皮细胞外,内外源性JSRV-LTR在各细胞内的启动子活性相差较小;绵羊外源性JSRV-LTR在肺泡Ⅱ型上皮细胞内相对活性为其他细胞内相对活性的24—230倍,说明绵羊外源性JSRV—LTR对肺泡Ⅱ型上皮细胞具有特殊的嗜性;分别缺失突变C/EBP、HNF