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采用半胱氨酸-咔唑法测定发酵粗酶液中葡萄糖异构酶的酶活,确定了半胱氨酸—咔唑法测定葡萄糖异构酶酶活的最佳酶促反应条件为pH值8．0、温度70℃、反应时间75min。
葡萄糖异构酶酶活测定方法的优化
【摘 要】
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采用半胱氨酸-咔唑法测定发酵粗酶液中葡萄糖异构酶的酶活,确定了半胱氨酸—咔唑法测定葡萄糖异构酶酶活的最佳酶促反应条件为pH值8．0、温度70℃、反应时间75min。
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,天津 300457
【出 处】
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2008年全国酶制剂研究开发应用技术研讨会
【发表日期】
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2008年12期
其他文献
脂肪酶是主要工业用酶制剂之一,在食品、洗涤剂和制药等领域广泛应用。本研究将编码米黑根毛霉(Rhizomucor miehe1)脂肪酶RML的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K—RML,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G418梯度筛选获得了分泌表达RML的重组毕赤酵母工程菌,SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶分子量大小与预期一致。初步研究表
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采用气相色谱法分析了从葡萄酒中分离获得的10株乳酸菌株在添加不同浓度羟基肉桂酸类物质的合成培养基中产生的香气酚,结果显示,有3株菌能够利用p-香豆酸产生香气酚。Pediococcus sp 菌株能够利用p-香豆酸产生4-乙烯基酚类,但不能产生4-乙基酚类。Oenococcus oeni株不能产生任何一种p-香豆酸衍生物。这些茵利用阿魏酸产生香气酚的能力低于利用p-香豆酸产生香气酚的能力。
生物酶制剂在蛋黄提取卵磷脂和鸡蛋内膜提取胶原蛋白中的应用。采用了分段加酶的方式从蛋黄中提取卵磷脂,两段中酶的添加量分别为复合蛋白酶6％,脂肪酶1％,磷脂提取率≥95％。采用4Mpa,40min高压的方式对鸡蛋内膜进行预处理,复合酶的添加量为0．5％,水解制得胶原蛋白。
研究了氮源添加量、Cu2+和Zn2+、培养温度和pH值等胁迫条件对酵母菌生物量及SOD酶活力的影响。研究结果表明：氮源胁迫(以蛋白胨双倍添加为例)的条件下,酵母菌体细胞生长优势明显,但SOD酶活力低于正常氮源添加量,最大时相差约30％左右;Cu2+和Zn2+的胁迫对生物量影响不明显,但培养12h左右,SOD酶活力迅速达到最高峰221U／mL,表明酵母菌体细胞对此胁迫条件迅速作出反应;低温胁迫(20
在摇瓶条件下,考察了碳源、氮源对枯草芽孢杆菌WSHDZ-01合成过氧化氢酶的影响。结果表明,硝酸钠为适宜氮源,虽然生物量仅1．25 g／L,但过氧化氢酶活力最高达3258U／mL。经过优化,WSHDZ—01生物量提高到6 g／L。过氧化氢酶活力达到11240U／mL,生物量提高了近4倍,过氧化氢酶产量提高了近3倍。
在3L罐上考察了不同酵母粉补加方式(一次性补加、分批补加和恒速流加)对混合茵发酵生产聚乙烯醇降解酶(PVAase)的影响,研究结果表明分批补加酵母粉效果最好,发酵结束后PVAase酶活达到3．32 U·mL-1,是添加前的2．57倍。
利用重组Pichia pastoris GS115表达碱性果胶酶的诱导阶段,最佳初始菌体浓度和甲醇诱导浓度分别为122g／L和20g／L,两者之间最佳比值范围是0．16~0．20 g／g(甲醇／菌体浓度)。在此基础上通过生长阶段甘油的指数流加,以及诱导阶段基于甲醇比消耗速率和溶氧等参数进行甲醇流加的方式,将甲醇与茵体浓度比例控制在0．171~0．195g／g之间。此时,酶活达到430U／mL,生产
以橄榄油为唯一碳源从被油污染的土样中分离出52株产碱性脂肪酶的菌株,其中8株产低温碱性脂肪酶,对其中酶活较高的菌进行初步酶学性质研究,其中菌株TCCC11083酶活5．5U／mL,该酶最适温度25℃,最适pH9．0,对该菌株进行茵种鉴定,结果表明,TCCC11083属于假单胞菌。
本研究利用表达载体pET-22b,实现了去信号肽的中温α-淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,AMY分子量为66．8kDa。重组酶AMY的最适温度为60q℃,最适反应pH为6．0,在温度不超过80℃,反应pH5．0到6．5之间,酶活较稳定。