【摘 要】
：
以PCR方法扩增得到弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)ATCC 8090中酪氨破酚裂解酶的结构基因tpl,与带强启动子T5的表达载体pQE30T连接后构建质粒pQTTPL,并转化到E.coli M1
【机 构】
：
江南大学教育部工业生物技术重点实验室江南大学分析测试中心江南大学教育部工业生物技术重点实验室;江南大学医学系,江苏无锡,214036
论文部分内容阅读
以PCR方法扩增得到弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)ATCC 8090中酪氨破酚裂解酶的结构基因tpl,与带强启动子T5的表达载体pQE30T连接后构建质粒pQTTPL,并转化到E.coli M15中进行表达,所表达的酶经镍亲和柱HiTrap、Sephadex G-75凝胶过滤、凝血酶切除组氨酸标签后再通过镍亲和柱HiTrap三步纯化后,得到SDS-PAGE单一谱带的纯酶,比酶活3.32U/mg,该酶最适pH 7.8,最适温度30℃,在40℃以下和pH7.0-8.4之间保持较好的稳定性,Fe2+、Mg2+对酶有明显的激活作用,Ba2+、Pb2+、Mn2+、Ni2+、Sn2+、Co3+、Cu2+对酶活有不同程度的抑制作用.而K+和Ca2+的作用可以忽略不计,以L-酪氨酸为底物时,该酶的Km和为Vmax分别为0.25 mmol/L和2.39μmol/(mg·min)。
其他文献
水蛭素(rHv2-Lys47)是一个具有65个氨基酸的抗凝活性肽.在毕赤酵母高密度发酵分泌表达过程中,发酵上清中可检出4个水蛭素活性组份,分别为Hir65及其C-末端缺失1-3个氨基酸的Hi
本文就提取SBR脱氮反应器中活性污泥总DNA的预处理、细胞破壁、去除蛋白质等方法进行了比较研究.将不同方法提取得到的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳、紫外吸光度和ERIC-PCR检测
本文考察了菌种Rhodococcos sp.N595生产羟基乙酸的主要发酵参数,结果表明最适发酵培养温度,起始pH值分别为30℃,pH 8;最佳碳、氮源分别为甘露醇,复合氮源蛋白胨和酵母膏;乙
通过对11种大孔吸附树脂的比较,选出能有效提高朱红密孔菌转对香草酸转化的HZ802树脂.对其添加条件试验表明,当朱红密孔菌对2g/L香草酸转化12h时,加入HZ802树脂继续转化,香草
药用真菌生物活性制品的开发具有广阔的前景,本文综述了发酵技术在药用真菌培养的应用及研究进展.结合目前国内外的研究热点,药用真菌的流加发酵技术应用、多糖组分多样性及
通过对拮抗Bacillus sp.组合CL-8的最佳混菌发酵条件的研究,表明SL-13、SL-14、SL-44三株单一拮抗菌种的最佳接种比例为2∶1∶2,培养基初始pH值为7.0,温度30℃,装液量为250ml
采用离子排斥液相色谱法对琥珀酸及发酵液中常见的代谢产物进行了分析.以高交联度磺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物多孔微球作为固定相的Aminex HPX-87H离子色谱柱为分析柱,利用
硫辛酸(Lipoic acid)是一种具有生物活性的天然产物.它是多种生物系统中的一种重要修复因子,显示出很强的生物活性.其外消旋体曾用来治疗各种肝病,近年研究发现硫辛酸是一种
研究了从霉变的稻草中筛选的烟曲霉XC6对制浆造纸废水的降解.结果表明,烟曲霉XC6可以直接应用于制浆造纸废水的处理,可大幅度降低废水CODCr含量(降低85％以上)和废水的浊度(降
环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取