杂交猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wodekechengsheji
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RT-PCR扩增技术,从经ConA活化的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA中扩增出IFN-γ cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中进行测序验证后,与原核表达载体pET30a(+)重组,构建含IFN-γ基因的重组表达质粒pET30a(+)/IFN-γ,测序结果与NCBI中已登录的IFN-γ基因序列比对,核苷酸序列同源性在98.6%~100%之间,氨基酸同源性在96.4%-99.4%;诱导表达含Hisx6的IFN-γ重组蛋白,经sDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白进行成功表达,相对分子量约26Ku,表达量约为33%,主要存于包涵体中,具有良好的免疫学活性,本研究的进行为猪源γ-干扰素深入研究奠定基础。
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目的:构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的apx ⅠC基因与apx ⅡC基因缺失突变弱毒菌株APP85,为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。方法:以标准菌株APP259中apxⅠC基因与apxⅡC基因为目的缺失基因,根据APP Ⅰ型菌apx基因组序列,利用软件设计分别扩增apxⅠCA上下游同源臂以及apxⅡCA上下游同源臂引
为在没有基因芯片点样仪和扫描仪的诊断实验室操作低密度DNA反向杂交检测,将已建立的玻片为基质的芯片检测方法转换成膜基质反向斑点杂交。将玻片为基质的芯片所用25-30 mer探针修改加长到30-38mer,点于0.2μm孔径尼龙膜。扩增23SrRNA基因片段的2对PCR引物序列不变,下游引物改用地高辛标记,目标细菌DNA在常规PCR后与膜上探针杂交,结果初步证明探针特异性好,23S rRNA基因反向
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法:从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果:实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用
将真核表达空质粒pVAx1转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500株,构建成重组菌c500(pVAX1),通过体外培养和体内接种的方法,研究该真核表达质粒在体外和体内的稳定性。将重组菌C500(pVAX1)分别以不同剂量口服接种雏鸡,并在雏鸡体内传代接种的方法,研究该重组菌对雏鸡的安全性。结果显示重组菌在体外培养过程中,所携带质粒的重组菌在有抗性选择压力条件下传代过程中存在一定的稳定性。在体内接种过程中,粪
为探讨分离之河南滑县、武陟等12个地域的猪源肠球菌的亲缘关系,采用对其16S rDNA基因的RFLP分析、序列分析、及系统进化树的构建等方法,对这12株疑似猪源肠球菌进行了研究:结果显示:12株分离株均与肠球菌同源性最高,同源率达98.1%-100%;而与猪链球菌同源率最高才达85.5%,且进化树中,12株菌株均位居与猪链球菌并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ,XbaⅠ,ECORⅠ分别对这12株球
猪传染性胸膜肺炎(PIPS)是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪高度接触性呼吸道传染病,是猪急性呼吸道疾病发生的重要原因。本文以探讨APP两种在体内表达的蛋白ApxIVA(胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素IVA)和TbpB(运铁蛋白结合蛋白B)对灭活疫苗免疫效果的影响为目的。研究从分析基因序列特性开始,采用PCR方法成功扩增APP血清1型apcIVA基因5端两个特征性氨基酸序列(N端疏水性区域和中
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RAPD技术是1990年创立的一种新的DNA遗传标记技术,能够用来检测基因组DNA的多态性,以及进行种株的鉴定和分类。本实验通过RAPD技术研究了猪肺炎支原体和猪鼻支原体基因组DNA遗传结构的差异,建立了鉴定这2个菌株的RAPD方法。
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根据毕赤酵母表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪干扰素α(PoIFN-α)基因重新设计改造和重新合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经ZeocinTM抗性筛选后获得大量多拷贝插入的重组子,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌