【摘 要】
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目的：分析Pax5基因对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖分化的调控作用,筛查其下游靶基因,并初步探讨其作用分子信号通路.方法：分别构建携带GFP荧光的牙髓干细
【机 构】
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510055广州,中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院,广东省口腔医学重点实验室
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目的：分析Pax5基因对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖分化的调控作用,筛查其下游靶基因,并初步探讨其作用分子信号通路.方法：分别构建携带GFP荧光的牙髓干细胞(DPSCs-GFP)和携带Pax5基因的牙髓干细胞(DPSCs-Pax5).CCK8法检测DPSCs、DPSCs-GFP和DPSCs-Pax5三组细胞1、2、4和8天的增殖情况.RT-PCR和WB法检测三组细胞1、4、8和16天表达ALP、OCN、DSPP和DMP1的水平.Von Kossa染色法检测三组细胞16天的矿化程度.RNA-seq基因测序筛查Pax5调控牙髓干细胞增殖分化的下游靶基因,并通过生物信息学方法预测Pax5基因作用的信号通路.结果：DPSCs-GFP和DPSCs-Pax5两组细胞在转染后第4天表达绿色荧光蛋白的水平均高于90％.CCK8实验表明,DPSCs-Pax5的增殖在转染后第4和8天显著性低于DPSCs和DPSCs-GFP(P＜0.05).RT-PCR和WB分析显示,在体外培养的第8和16天DPSCs-Pax5表达ALP、OCN、DSPP和DMP1的水平明显高于DPSCs-GFP(P＜0.05).Von Kossa染色显示DPSCs-Pax5较DPSCs-GFP形成了更多的条状和块状染色.RNA-seq基因测序和生物信息学分析预测Pax5通过直接激活下游的OCN和Osterix等基因提升了牙髓干细胞的成骨/成牙本质向分化潜能.结论：慢病毒质粒介导的Pax5基因转染减弱了牙髓干细胞的增殖能力,但却明显地增强了牙髓干细胞的成骨/成牙本质向分化潜能.Pax5下游靶基因OCN和Osterix可能参与调控牙髓干细胞的分化进程.
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