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背景:bFGF抗体具有抑制肿瘤血管新生、抑制肿瘤生长和转移到的作用。我们在抗bFGF人源性ScFv抗体的基础上,通过连接肽连接轻重链可变区并和引入二硫键,成功构建了二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody),并将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体pPICZαA中,在毕赤酵母GS115表达系统中进行高效表达,纯化后通过间接ELISA检测其抗原结合活性和稳定性,并通过细胞实验和动物实验进一步研究其体内外抗肿瘤活性,为临床抗肿瘤药物的研发奠定基础。目的:为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其体内外抗肿瘤活性。方法:利用间接ELISA检测纯化后ds-Diabody抗体与抗原结合活性。CCK-8法检测ds-Diabody对肿瘤细胞的增殖抑制作用,划痕修复实验和Transwell系统检测其对肿瘤细胞的迁移侵袭影响,成管实验和Transwell检测其对血管内皮细胞体外成管和迁移的抑制作用,信号通路分析其作用于肿瘤细胞的机制。使用BALB/C裸小鼠建立人乳腺癌荷瘤模型,并检测尾静脉注射抗体对荷瘤小鼠肿瘤生长,瘤重及小鼠体重的影响。免疫组化法检测肿瘤组织CD3 1和LYVE的表达情况,初步探讨抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。对肿瘤组织,以Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测ds-Diabody抗体诱导人乳腺癌细胞调亡的情况。结果:ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF更好地特异性结合,并且具有良好的稳定性。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人卵巢癌细胞株Skov3 cells,人乳腺癌细胞株MCF-7 cells,人黑色素瘤细胞株A375 cells和人肺癌细胞株A549 cells的增殖,细胞增殖抑制率为30-43.4%。划痕实验和Transwell结果表明ds-Diabody可以抑制MCF-7 cells的迁移及侵袭。而且ds-Diabody可以抑制血管内皮细胞的成管及迁移。信号通路分析结果表明ds-Diabody能有效阻断与bFGF相关的MAPK和Akt通路。ds-Diabody作用于荷人乳腺癌MCF-7的BALB/C裸鼠,给药10次后,肿瘤生长抑制率达61.52%;流式细胞结果显示dsDiabody能够诱导肿瘤细胞的凋亡。能较好的抑制肿瘤的生长。