【摘 要】
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目的 尽管一些肉眼可见畸形的出生缺陷在出生时得到确诊,但是仍然有很多、特别是遗传相关性出生缺陷,因为出生时临床表现不典型或在新生儿期后及婴幼儿期才起病,为临床诊断带来很大困难。早期诊断出生缺陷能为受累家庭进行遗传咨询和减低再发风险提供科学依据,同时对于未来的干预及预后改善也至关重要。新一代测序+外显子捕获技术克服了Sanger测序及MLPA,aCGH诊断技术存在的低通量、解析度低等技术障碍,又降低
【机 构】
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北京军区总医院附属八一儿童医院临床遗传中心
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目的 尽管一些肉眼可见畸形的出生缺陷在出生时得到确诊,但是仍然有很多、特别是遗传相关性出生缺陷,因为出生时临床表现不典型或在新生儿期后及婴幼儿期才起病,为临床诊断带来很大困难。早期诊断出生缺陷能为受累家庭进行遗传咨询和减低再发风险提供科学依据,同时对于未来的干预及预后改善也至关重要。新一代测序+外显子捕获技术克服了Sanger测序及MLPA,aCGH诊断技术存在的低通量、解析度低等技术障碍,又降低了全基因组测序的高成本。本文对新生儿及小婴儿期起病的可能与遗传相关性出生缺陷,利用新一代测序+外显子捕获技术进行遗传变异分析,以期能够明确病因及发病机理。方法 以生后逐渐出现的以运动/体格发育迟滞伴或不伴智力发育异常的0-3岁43例新生儿或小婴儿为研究对象,来自本院门诊及住院病例；临床已除外因为感染、出生时缺血缺氧及药物因素所致；经PWS/AS MR-PCR、SMN Exon7、8、FMR-1基因分析除外PWS、SMA及脆性-X综合症。抽取研究对象外周静脉血2ml,提取出基因组DNA,然后构建Illumina标准文库,完成文库拼接。利用设计的针对700种新生儿及小婴儿起病的遗传疾病基因外显子捕获试剂盒,对43个样本进行目标基因外显子区域捕获。利用Illumina HiSeq 2000对经过试剂盒标准流程捕获的目标DNA进行双端100 bp测序,生物信息学分析软件处理分析测序原始数据。阳性结果用Sanger测序及MLPA技术进行验证。结果 43例中发现并确定了基因突变位点及类型26例,包括多巴反应性肌张力障碍(GCH1基因)1例、线粒体DNA耗竭综合征(DG UOK基因)1例、先天性中枢性呼吸障碍综合征(PHOX2B基因)3例、粘脂质综合征(GNPTAB基因)2例、神经元蜡样脂褐质沉积症3型(CLN3基因)1例、GM1神经节苷脂贮积症1型(GLB1基因)1例、 糖原累积病Ⅱ(GAA基因)型2例、Leigh综合征(PDHA1基因)1例。同时对14例经临床及MLPA确诊的DMD,经过新一代测序明确了9例DMD基因重复和缺失断裂点和变异片段的起始长度,同时检出了5例DMD点突变类型。结论 尽管出生缺陷的病因诊断非常困难,新一代测序+外显子捕获技术与目前经典及主流分子遗传学技术相比,在对临床病因不明的出生缺陷在基因水平进行突变筛选中显示出高通量及性价比优势,提高了目前难于应用现有技术手段诊断的、从新生儿或小婴儿起病的遗传变异导致的出生缺陷的确诊率。
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